Summary
Fedt-afledte stamceller (ASCs) er let isoleret og høstet fra fedt af normale rotter. ASC ark kan oprettes ved hjælp af celle-ark engineering og kan blive transplanteret ind i Zucker diabetisk fede rotter udviser fuld-tykkelse hud mangler med udsatte knogle og derefter dækket med et dobbeltlag af kunstigt hud.
Abstract
Kunstig hud har opnået betydelige terapeutiske resultater i klinisk praksis. Men kunstig hudbehandlinger for sår i diabetisk patienter med hindret blodgennemstrømning eller med store sår kan forlænges. Celle-baserede behandlinger er dukket op som en ny teknik til behandling af diabetisk sår, og celle-ark engineering har forbedret effekten af celle transplantation. En række rapporter har antydet, at fedt-afledte stamceller (ASCs), en type mesenchymale stromale celler (MSC), udviser terapeutiske potentiale på grund af deres relativ overflod i fedtvæv og deres tilgængelighed for indsamling sammenlignet med MSCs fra andre væv. Derfor synes ASCs at være en god kilde til stamceller til terapeutisk brug. I denne undersøgelse, blev ASC ark fra epididymis fedtaflejringer af normale Lewis rotter oprettet ved hjælp af temperatur-responderende kultur retter og normal næringssubstratet indeholdende ascorbinsyre. ASC ark blev transplanteret ind i Zucker diabetisk fedtsyrer (ZDF) rotter, en rotte model af type 2 diabetes og fedme, der udviser formindsket sårheling. Et sår blev oprettet på den bageste kranielle overflade, ASC ark blev transplanteret ind i såret og en tolagede kunstig hud blev brugt til at dække arkene. ZDF rotter, der fik ASC plader havde bedre sårheling end ZDF rotter uden transplantation af ASC ark. Denne fremgangsmåde var begrænset, fordi ASC plader er følsomme over for tørre forhold, der kræver vedligeholdelse af en fugtig sår miljø. Derfor, kunstig hud blev brugt til at dække ASC ark for at forhindre udtørring. Allogen transplantation af ASC plader i kombination med kunstig hud kan også gælde for andre vanskelige sår eller forbrændinger, som de observerede med perifer arteriel sygdom og kollagen sygdom, og kan gives til patienter, der er underernærede eller bruger steroider. Denne behandling kan således være det første skridt mod at forbedre de terapeutiske muligheder for diabetisk sår healing.
Introduction
Befolkningen i diabetisk patienter er stigende på verdensplan og nåede 400 millioner i 20151; en anslået 15-25% af patienter med diabetes er i fare fra progression af en lavere-ekstremitet diabetisk sår2. Lavere-ekstremitet diabetisk sår er genstridig og kan kræve en langvarig terapeutiske periode med rehabilitering træning efter fuldstændig helbredelse. En lang terapi periode ofte resulterer i en betydelig reduktion i patienternes livskvalitet. Således, nye behandlingsformer, at mindske eller forhindre forværring skal udvikles til behandling af diabetiske sår. For at evaluere diabetisk sårheling, vi optimeret en diabetisk sår sår-heling model i rotter, som efterligner praktiske kliniske tilstande, og vurderet om omplantning fedtholdigt-afledte stamceller (ASC) ark ved hjælp af celle-ark engineering accelereret sårheling.
Mesenchymale stromale celler (MSCs) udviser en fremragende potentiale for fremskyndelse af sårheling på grund af deres selvfornyelse kapacitet, deres immunmodulerende effekter og deres evne til at differentiere i forskellige celle lineages3. ASCs er en type af MSC stammer fra fedtvæv, og de udviser flere fordele i forhold til MSCs stammer fra andre væv, herunder deres angiogene potentielle og paracrine aktivitet4,5. Fedtvæv er relativt rigeligt i den menneskelige krop og dens tilgængelighed giver mulighed for samling ved hjælp af minimalt invasive procedurer. Derfor er ASCs anvendt eksperimentelt for sårheling programmer6,7.
Tidligere rapporter har vist, at den direkte indsprøjtning af encellede MSC suspensioner i områderne omkring sår kan fremskynde sårheling8,9. Trods rapporter om fremskyndelse af sårheling i diabetisk sår modeller efter injektion af encellede suspensioner, er overlevelsestid af transplanterede celler på webstedet sår ikke klar.
I denne undersøgelse anvendte vi celle-ark engineering ved hjælp af temperatur-responderende kultur retter. Disse retter har temperatur-responderende polymer N- isopropylacrylamide kovalent bundet op på deres overflade10. Det podede polymer lag giver mulighed for temperatur-kontrollerede celle vedhæftning til eller løsrivelse fra overfladen af kultur parabol. Overfladen af skålen bliver hydrofobe ved 37 ° C, så cellerne til at overholde og formere sig, mens celler frigøre spontant fra overfladen, når det bliver hydrofilt ved temperaturer under 32 ° C. Dyrkede celler kan høstes som en sammenhængende celle ark med intakt celle til celle vejkryds og ekstracellulære matricer (ECMs) blot ved at reducere temperaturen; Proteolytiske enzymer, der skader ECM, såsom trypsin, er således ikke kræves11. Derfor, celle-ark engineering kan bevare celle til celle forbindelser og forbedre effektiviteten af celle transplantation.
Derudover øger celle-ark transplantation celle overlevelseschancerne i forhold til celle indsprøjtning12. I denne protokol, blev Zucker diabetisk fede (ZDF) rotter valgt som en type 2 diabetes og fedme model med Forsinket sårheling. ZDF rotter udvikle spontant fedme på ca. 4 uger. De derefter udvikler type 2-diabetes med fedme mellem 8 og 12 ugens i alder, på hvilket tidspunkt de udviser hyperglykæmi forbundet med insulin resistens, dyslipidæmi og hypertriglyceridæmi13. Forsinket sårheling, nedsat blodgennemstrømning i perifere blodkar og diabetisk nefropati er også observeret14,15,16. ZDF rotter kan derudover være en passende model til at studere heling af genstridig kutant sår, såsom diabetisk sår.
Forskelle mellem mennesker og gnavere i sårheling mekanismer er forbundet med anatomiske forskelle i huden. Sårheling hos normale rotter er baseret på såret sammentrækning, sårheling hos mennesker bygger paa ny epithelialization og granulationsvæv dannelse. Typisk, sår fiksering bruges i gnavere modeller hjælper med at minimere sår sammentrækning og giver mulighed for den gradvise dannelse af granulationsvæv17, selv om sår i diabetiske rotter er næsten helt lukket af sammentrækning. Dog diabetisk sår sammentrækning i ZDF rotter er nedsat, og sårheling primært sker gennem re epithelialization og granulationsvæv dannelse; denne proces er således mere ligner menneskelige sårheling14.
Diabetisk sår med udsatte ben efter debridering er ofte stødt på klinisk. Tidligere studier har undersøgt 12-mm diameter fuld-tykkelse hud sår på ryggen af athymiske nøgen mus18,19 , og 10-mm diameter fuld-tykkelse hud sår på ryggen af normale mus20. For at udvikle en klinisk model for svær diabetisk sår, større (15 x 10 mm2) fuld-tykkelse hud mangler med udsat knogle og uden periosteum blev skabt, som tidligere beskrevet21, i rotter med type 2 diabetes og fedme.
Rotte ASC (rASC) plader fra ASCs af normale Lewis rotter blev skabt gennem allogen transplantation af ASC ark. I klinisk praksis er autolog transplantation uigennemførlig, fordi diabetisk patienter med sår ofte udviser alvorlige diabetiske komplikationer, såsom ukontrolleret højt blodsukker og høje body mass indeks og disse komplikationer årsag sårheling lidelser, der øger vanskeligheden ved at opnå fedtvæv fra disse patienter. Derudover ASCs fra dyr med diabetes udstille ændret egenskaber og nedsat funktion22. Protokollen præsenteres her beskrives derfor, allogen transplantation af rASC plader fra normale rotter og anvendelsen af kunstigt hud til diabetisk rotter.
Tolagede kunstige huden bruges i denne protokol forhindrer den spontane sammentrækning af sår, fremmer syntesen af en ny bindevæv matrix og ligner ægte dermis23. I denne protokol, er kunstig hud placeret på en rASC ark og fast med nylon tråde at forhindre sår sammentrækning eller udvidelsen som følge af løs rotte hud. Derudover kunstig hud giver en tredimensionel ramme for ASC ark, opretholder et fugtigt miljø for de transplanterede ASC plader og sår, og beskytter sårene fra infektion og ydre kræfter. Endelig, en ikke-klæbende dressing er placeret over såret til at beskytte den fra eksterne virkninger, opretholder et fugtigt sår miljø og absorbere ekssudat.
En rASC ark er tynde, fleksible og deformerbare og kan overholdes flytte modtageren steder, såsom en bankende hjerte24. Celle-ark engineering har været brugt til genopbygning af forskellige væv og kan generere helbredende virkninger25,26. ASC ark, der udviser kliniske terapeutiske potentiale kan fremskynde heling af mange typer af sår. Derudover allogen transplantation af ASC ark, kombineret med brugen af kunstig hud, kan anvendes til behandling af vanskelige sår eller forbrændinger, som dem, der observeres i perifer arteriel sygdom eller kollagen sygdom, eller de kan administreres til patienter, der er underernærede eller bruger steroider. Denne metode øger effektiviteten af omplantning ASCs. Sårheling ZDF rotte model producerer en alvorlig såret tilstand, som ligner den menneskelige sårheling proces og efterligner kliniske tilstande i en små eksperimentelle dyr.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Denne protokol forsøgte at etablere en ny celle-baseret behandling for genstridig diabetisk sår. Kort (som illustreret i figur 1), allogene rASC ark blev oprettet ud fra normale rotter ved hjælp af celle-ark engineering og blev derefter transplanteres ved hjælp af et dobbeltlag af kunstig hud på en fuld-tykkelse hud defekt på en diabetisk rotte. Lysmikroskop billeder af et godt eksempel på en rASC ark (figur 2A) og et dårligt eksempel på en rASC ark (figur 2B) er vist i figur 2. Når ASCs er belagt på en ny kultur fadet, bør skålen være langsomt rystede frem og tilbage og venstre og højre i en inkubator til at opnå ensartede rASC såning og en ensartet tyk rASC ark (figur 2A). Hvis rASCs ikke kan være ensartet knyttet og kulturperler på overfladen af kultur parabol, kan ikke arket indsamles som en sammenhængende ASC ark (figur 2B). Figur 3 viser ASC ark, der er høstet som en sammenhængende celle ark ved stuetemperatur, fordi ASCs var ensartet knyttet til parabol overflade. Normalt, kan rASC ark håndteres med et par pincet. Hvis det er nødvendigt, en overførsel membran kan bruges til at overføre en celle ark fra kultur parabol til webstedet sår, såsom hvis er arket celle skør og skrøbelig.
Figur 4 viser ZDF rotter bruges som en diabetisk sårheling model og transplantation af allogene rASC ark kombineret med kunstig hud. En rASC ark er blød og fleksibel, justerbar i størrelsen, og som kan udvides til alle hjørner af webstedet såret med et par pincet (Figur 4A-F). RASC ark-dækket defekten var også dækket med kunstig hud (15 x 10 mm2) og sutureres med ca 10 masker ved hjælp af en 5-0 nylon sutur (figur 4 g). For at beskytte såret, et fugtigt sår miljø blev opretholdt og ekssudater blev absorberet, en ikke-klæbende dressing (20 x 15 mm2) var placeret over den kunstige hud og 5-0 nylon sutur blev anvendt (figur 4I). Ikke-klæbende dressing er ofte fjernet af ZDF rotter i flere dage efter ansøgning. Rotter skal derfor overvåges efter transplantation. Normalt, udskiftes ikke-klæbende dressing hver 2 dage under fuld narkose. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
De makroskopiske fotografier i figur 5 er de repræsentative resultater af transplantation af en rASC ark. I vores tidligere undersøgelse var den gennemsnitlige sår område i gruppen rASC ark transplantation (figur 5B) betydeligt mindre end i kontrolgruppen (figur 5A). For kontrollen, blev kun kunstig hud brugt til at dække såret uden transplantation af en rASC ark. Disse billeder blev taget 14th dagen efter oprettelsen af såret (n = 6 i hver gruppe)31.
Figur 1: skematisk af proceduren eksperimentelle Transplantation. Skematisk af eksperimentelle transplantation procedure udføres med en allogen rotte fedtholdigt-afledte stamceller (rASC) ark og kunstig hud i en rotte sårheling model af type 2 diabetes og fedme. (A) rotte adipøst væv var kirurgisk skåret ud fra normale Lewis rotter. rASCs blev isoleret og seedet på en 60 cm2 kultur parabol og kulturperler ved 37 ° C i en 5% CO2 inkubator for 7-8 dage. (B) rASCs var podes hver 2-3 dage, og passage 3 rASCs var seedet på en 35 mm diameter temperatur-responderende kultur parabol. Cellerne var kulturperler i komplet medium indeholdende 16,4 µg/mL L-ascorbinsyre syre fosfat magnesium salt n-hydrat (AA) ved 37 ° C i en 5% CO2 inkubator for 7-8 dage. RASCs blev høstet som en sammenhængende rASC ark ved at sænke temperaturen til 20 ° C. (C) rASC ark transplanteret ind på en 15 x 10 mm2 fuld-tykkelse hud defekt med udsatte knogle på hovedet af rotter udstiller diabetes og fedme (Zucker diabetisk fede (ZDF) rotter) bruges som sårheling model. (D) en rASC ark var placeret på kraniet direkte over defekten og dækket) med en 15 x 10 mm2 ark af tolagede kunstig hud, som var sutureres i sted med 10 nylon (5-0) suturer. Diabetes 2015; 64: 2723-2734; med tilladelse. Diabetes (c) copyright (2015) af American Diabetes Association. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Lys mikroskop billeder af ASCs. Lysmikroskop billeder af ASC spredning til kanten af kultur retter, uden huller mellem ASCs. (A) en rASC ark med en ensartet tykkelse i alle retninger 7 dage efter start af dyrkningsbaserede (A). (B) en rASC ark uden ensartet såning. En sammenhængende rASC ark ikke kan opnås på dag 7 efter starten af dyrkningsbaserede (B). Skalere barer = 100 µm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: Time-lapse billeder af rASC ark statuer stuetemperatur. Time-lapse billeder af status for en rASC ark ved stuetemperatur. rASCs på en 35 mm diameter temperatur-responderende kultur parabol spontant og gradvist løsrevet fra skålen overfladen ved stuetemperatur (ca. 20 ° C) og blev høstet som et sammenhængende ark. (A) ca 5 min efter flytning temperatur-responderende kultur parabol til stuetemperatur. (B) ca. 10 min. efter flytning 35 mm diameter temperatur-responderende kultur parabol til stuetemperatur. (C) ca. 20-30 min. efter flytning temperatur-responderende kultur parabol til stuetemperatur. Dette er en god kvalitet rASC ark (C). (D-E) rASC ark status ca 20-30 min efter flytning temperatur-responderende kultur parabol til stuetemperatur. Denne rASC ark er af gennemsnitlig kvalitet (D). (F-G) rASC ark håndteres normalt med et par pincet. Hvis arket celle er skør og skrøbelig, kan en membran bruges som et stillads til at overføre celle ark fra kultur parabol til webstedet sår. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: Tidsserier billeder af sår oprettelse og rASC ark Transplantation med kunstig hud og en ikke-klæbende Dressing
Gang serie billeder af sår oprettelse og rASC ark transplantation med kunstig hud og en ikke-klæbende dressing. (A) stats-ZDF rotter var barberet med en barbermaskine. Efter barbering af kropsbehåring, blev Afkrydsninger (15 x 10 mm2) trukket med en fedtet hydrofobe pen. (B) en fuld-tykkelse hud defekt (15 x 10 mm2) var lavet på hovedet af en bedøvede ZDF rotte ved at fjerne kutant væv fra epidermis til periosteum. Hud og kutant væv blev skåret ud med en skalpel, og periosteum blev fjernet med en periosteal raspatory. Ved hjælp af gaze fugtet med sterilt saltvand, blev pres anvendt til at stoppe blødninger efter excision. (C) rASC ark transplantation. En rASC ark var placeret over defekt umiddelbart over kraniet af rotte ved hjælp af et par pincet. (D-G) Justere rASC ark udvidelse til at matche sår størrelse. RASC ark er fleksibel, justerbar, og kan udvides til alle hjørner af sår websted ved hjælp af et par pincet. For større sår, kan to eller tre fleksible rASC plader stables. (H) suturering kunstige huden dækker rASC ark. Defekten og transplanterede rASC ark var dækket med kunstig hud (15 x 10 mm2), som var sutureres med 10 masker ved hjælp af 5-0 nylon sutur. (jeg) Suturing af den ikke-klæbende dressing (20 x 15 mm2) til webstedet sår dækket med kunstig hud. For at beskytte såret, var ikke-klæbende dressing (20 x 15 mm2) placeret over en kunstig hud med 5-0 nylon sutur. Diabetes 2015; 64: 2723-2734; med tilladelse. Diabetes (c) copyright (2015) af American Diabetes Association. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5: makroskopiske billeder af fuld-tykkelse hud mangler. Makroskopisk fotografier af fuld-tykkelse hud mangler uden transplantation af en rASC ark (A) og med transplantation af en rASC ark (B) 14 dage efter oprettelsen af såret. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De mest kritiske trin til vellykket dyrkning en rASC ark er som følger: 1) temperaturen holdes på cirka 37 ° C under dyrkning på temperatur-responderende kultur retter. Under oprettelsen af en rASC ark hver procedure blev udført på en 37 ° C thermo-plade, og hver reagens blev opvarmet til 37 ° C at forhindre cellerne i spontant afmontering fra fad31. 2) de modtagende ZDF rotter skal overvåges for at forhindre fjernelse af ikke-klæbende dressing, som er afgørende for en vellykket transplantation af rASC plader. Hvis dressingen er fjernet, skal du anvende en ny ikke-klæbende dressing for at forhindre de transplanterede ASC ark fra afmontering fra webstedet sår.
Brug denne fremgangsmåde, var rASC ark generelt opnået inden for 5-7 dage efter såning passage 3 celler på temperatur-responderende kultur retter. Kultur tidsforbruget til at generere en rASC ark kan reguleres efter den første celle tæthed og den tid, hvor komplet næringssubstratet indeholdende AA anvendes. Hvis en rASC ark frigøres fra fadet under celle dyrkning, rASC ark skal være genskabt, og ekstra retter skal udarbejdes i tilfælde af celle detachement.
Begrænsningerne i denne protokol er som følger: 1) streng temperatur styring skal anvendes for at opretholde en omtrentlige temperatur på 37 ° C under hele processen, når du bruger temperatur-responderende kultur retter. 2) efter at have indhentet en rASC ark, særligt medicinsk udstyr, skal bruges til at opretholde fugtige forhold, fordi arket rASC er følsom over for tørre forhold. 3) postoperativ administration, herunder daglig observation af tilstanden af den modtagende rotte, er påkrævet.
Større sår med udsatte knogle er ofte observeret klinisk. For eksempel, kan trafik ulykke traumer, forbrændinger, inficerede sår og beskadigede eller nekrotiske sår efter debridering udvikle sig til store sår med udsatte knogle. Her, blev en klinisk model af alvorlige sår udviklet ved hjælp af en stor, fuld-tykkelse hud defekt med synlige knogler i rotter med type 2 diabetes og fedme. Denne model har potentiale til at blive brugt som en standard model til evaluering af sårheling i diabetisk rotter.
Kunstig hud er et kommercielt tilgængelige hospitalsudstyret for fuld-tykkelse hud mangler efter debridering, og rekombinant basic fibroblast vækstfaktor (bFGF) har været meget anvendt til sårheling fremme angiogenese og granulering. Disse to behandlinger har været brugt til at opnå betydelige terapeutiske resultater, selv for kronisk sår, såsom diabetisk sår. Det er blevet rapporteret, at ASCs udskiller angiogeneic vækstfaktorer28, som vaskulær endotel vækstfaktor (VEGF), hepatocyt vækstfaktor (HGF) og bFGF, som kunne bidrage til neovascularization29,30 og fremskynde sårheling. Vores tidligere undersøgelse bekræftede, at ASCs løbende udskiller disse vækstfaktorer31. Derfor, ASC ark, kombineret med kunstig hud, har potentiale til at blive brugt som en ny terapeutisk mulighed for fremskyndelse vascularization og sårheling31, og disse ark kan anvendes til behandling af mange typer af vanskelige sår eller forbrændinger i humane kliniske indstillinger i fremtiden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De følgende forfattere videregive finansielle relationer relevante til denne publikation: Teruo Okano er grundlægger og direktør af bestyrelsen for celle frø Inc., hvilke licenser teknologi og patenter fra Tokyo Women's Medical University, og Teruo Okano og Masayuki Yamato er interessenter i celle frø Inc. Tokyo Women's Medical Universitet modtager forskningsmidler fra celle frø Inc. Andre Forfatterne erklærer, at de ikke har økonomiske relationer relevante til denne publikation.
Acknowledgments
Forfatterne takke Dr. Yukiko Koga afdeling af plast og rekonstruktionskirurgi, Juntendo University School of Medicine, for at give praktiske råd. Vi takker også Mr. Hidekazu Murata af den diabetiske Center af Tokyo Women's Medical University School of Medicine for fremragende teknisk support. Denne undersøgelse blev støttet af oprettelsen af Innovation Centre for avanceret tværfaglig forskning områder Program af projekt for udviklingslandene innovationssystemer "celle ark Tissue Engineering Center (CSTEC)" fra ministeriet for uddannelse, kultur, sport, videnskab og teknologi (MEXT) i Japan.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| α-MEM glutamax | Invitrogen | 32571-036 | Carlsbad, CA |
| Fetal bovine serum (FBS) | Japan Bioserum Co Ltd. | S1650-500 | |
| Penicillin/streptomycin | Life Technologies | 15140-122 | |
| Collagenase A | Roche Diagnostics | 10 103 578 001 | Mannheim, Germany |
| 60 cm2 Primaria tissue culture dish | BD Biosciences | 353803 | Franklin Lakes, NJ |
| Dulbecco's Phosphate Buffer Saline (PBS) | Life Technologies | 1490-144 | |
| 0.25% Trypsin-ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA) | Life Technologies | 25200-056 | |
| L-ascorbic acid phosphate magnesium salt n-hydrate | Wako | 013-19641 | |
| 35-mm temperature-responsive culture dish (UpcellTM) | CellSeed | NUNC-174904 | Tokyo, Japan |
| Microwarm plate (MP-1000) | Kitazato Science Co., Ltd. | 1111 | |
| Rodent mechanical ventilator | Stoelting | #50206 | Wood Dale, IL |
| 4% isoflurane | Pfizer Japan | 114-13340-3 | Tokyo, Japan |
| Artificial skin (Pelnac®) | Smith & Nephew | PN-R40060 | Tokyo, Japan |
| Non-adhesive dressing (Hydrosite plus®) | Smith & Nephew | 66800679 | Known as Allevyn non-adhessing® in the United State |
| 5-0 nylon suture | Alfresa | EP1105NB45-KF2 | |
| 20 CELLSTAR TUBES | greiner bio-one | 227 261 | |
| 15 mL Centrifuge Tube | Corning Incorporated | 430791 | |
| 14 GOLDMAN-FOX PERIOSTEAL | Hu-Friedy | P14 | Chicago, IL |
References
- International Diabetes Federation. IDF Diabetes Atlas, 7 ed.. , International Diabetes Federation. Brussels, Belgium. Available from: http://www.diabetesatlas.org/ (2015).
- Boulton, A. J., Vileikyte, L., Ragnarson-Tennvall, G., Apelqvist, J. The global burden of diabetic foot disease. Lancet. 366 (9498), 1719-1724 (2005).
- Zannettino, A. C., et al. Multipotential human adipose-derived stromal stem cells exhibit a perivascular phenotype in vitro and in vivo. J Cell Physiol. 214 (2), 413-421 (2008).
- Kern, S., Eichler, H., Stoeve, J., Kluter, H., Bieback, K. Comparative analysis of mesenchymal stem cells from bone marrow, umbilical cord blood, or adipose tissue. Stem Cells. 24 (5), 1294-1301 (2006).
- Casteilla, L., Planat-Benard, V., Laharrague, P., Cousin, B. Adipose-derived stromal cells: Their identity and uses in clinical trials, an update. World J Stem Cells. 3 (4), 25-33 (2011).
- Zuk, P. A., et al. Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies. Tissue Eng. 7 (2), 211-228 (2001).
- Zuk, P. The ASC: Critical Participants in Paracrine-Mediated Tissue Health and Function. , (2013).
- Nie, C., et al. Locally administered adipose-derived stem cells accelerate wound healing through differentiation and vasculogenesis. Cell Transplant. 20 (2), 205-216 (2011).
- Shin, L., Peterson, D. A. Human mesenchymal stem cell grafts enhance normal and impaired wound healing by recruiting existing endogenous tissue stem/progenitor cells. Stem Cells Transl Med. 2 (1), 33-42 (2013).
- Okano, T., Yamada, N., Sakai, H., Sakurai, Y. A novel recovery system for cultured cells using plasma-treated polystyrene dishes grafted with poly(N-isopropylacrylamide). J Biomed Mater Res. 27 (10), 1243-1251 (1993).
- Yamato, M., et al. Thermo-responsive culture dishes allow the intact harvest of multilayered keratinocyte sheets without dispase by reducing temperature. Tissue Eng. 7 (4), 473-480 (2001).
- Sekine, H., et al. Cardiac cell sheet transplantation improves damaged heart function via superior cell survival in comparison with dissociated cell injection. Tissue Engineering Part A. 17 (23-24), 2973-2980 (2011).
- Kuhlmann, J., et al. Intramyocellular lipid and insulin resistance: a longitudinal in vivo 1H-spectroscopic study in Zucker diabetic fatty rats. Diabetes. 52 (1), 138-144 (2003).
- Slavkovsky, R., et al. Zucker diabetic fatty rat: a new model of impaired cutaneous wound repair with type II diabetes mellitus and obesity. Wound Repair Regen. 19 (4), 515-525 (2011).
- Oltman, C. L., et al. Progression of vascular and neural dysfunction in sciatic nerves of Zucker diabetic fatty and Zucker rats. Am J Physiol Endocrinol Metab. 289 (1), E113-E122 (2005).
- Coppey, L. J., Gellett, J. S., Davidson, E. P., Dunlap, J. A., Yorek, M. A. Changes in endoneurial blood flow, motor nerve conduction velocity and vascular relaxation of epineurial arterioles of the sciatic nerve in ZDF-obese diabetic rats. Diabetes Metab Res Rev. 18 (1), 49-56 (2002).
- Galiano, R. D., Michaels, V., Dobryansky, M., Levine, J. P., Gurtner, G. C. Quantitative and reproducible murine model of excisional wound healing. Wound Repair Regen. 12 (4), 485-492 (2004).
- Lin, Y. C., et al. Evaluation of a multi-layer adipose-derived stem cell sheet in a full-thickness wound healing model. Acta Biomater. 9 (2), 5243-5250 (2013).
- McLaughlin, M. M., Marra, K. G. The use of adipose-derived stem cells as sheets for wound healing. Organogenesis. 9 (2), 79-81 (2013).
- Cerqueira, M. T., et al. Human adipose stem cells cell sheet constructs impact epidermal morphogenesis in full-thickness excisional wounds. Biomacromolecules. 14 (11), 3997-4008 (2013).
- Koga, Y., et al. Recovery course of full-thickness skin defects with exposed bone: an evaluation by a quantitative examination of new blood vessels. J Surg Res. 137 (1), 30-37 (2007).
- Cianfarani, F., et al. Diabetes impairs adipose tissue-derived stem cell function and efficiency in promoting wound healing. Wound Repair Regen. 21 (4), 545-553 (2013).
- Matsuda, K., Suzuki, S., Isshiki, N., Ikada, Y. Re-freeze dried bilayer artificial skin. Biomaterials. 14 (13), 1030-1035 (1993).
- Miyahara, Y., et al. Monolayered mesenchymal stem cells repair scarred myocardium after myocardial infarction. Nat Med. 12 (4), 459-465 (2006).
- Iwata, T., et al. Cell sheet engineering and its application for periodontal regeneration. J Tissue Eng Regen Med. , (2013).
- Elloumi-Hannachi, I., Yamato, M., Okano, T. Cell sheet engineering: a unique nanotechnology for scaffold-free tissue reconstruction with clinical applications in regenerative medicine. J Intern Med. 267 (1), 54-70 (2010).
- Watanabe, N., et al. Genetically modified adipose tissue-derived stem/stromal cells, using simian immunodeficiency virus-based lentiviral vectors, in the treatment of hemophilia. B. Hum Gene Ther. 24 (3), 283-294 (2013).
- Kim, W. S., et al. Wound healing effect of adipose-derived stem cells: a critical role of secretory factors on human dermal fibroblasts. J Dermatol Sci. 48 (1), 15-24 (2007).
- Nakagami, H., et al. Novel autologous cell therapy in ischemic limb disease through growth factor secretion by cultured adipose tissue-derived stromal cells. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25 (12), 2542-2547 (2005).
- Asahara, T., et al. VEGF contributes to postnatal neovascularization by mobilizing bone marrow-derived endothelial progenitor cells. EMBO J. 18 (14), 3964-3972 (1999).
- Kato, Y., et al. Allogeneic transplantation of an adipose-derived stem cell (ASC) sheet combined with artificial skin accelerates wound healing in a rat wound model of type 2 diabetes and obesity. Diabetes. , db141133 (2015).
