נוהל מפורט לסינתזה של אזיד 125 I-שכותרתו ואת radiolabeling של dibenzocyclooctyne (DBCO) -group מצומדות, 13 ננומטר בגודל ננו-חלקיקי זהב באמצעות תגובת לחץ ללא נחושת מתואר.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
פרוטוקול אופטימיזציה עבור Radiolabeling היעיל של חלקיקי זהב על ידי שימוש
במאמר זה
סיכום
תקציר
כאן, אנו מדגימים פרוטוקול מפורט לרדיוסינתזה של קבוצת תותבות אזיד 125עם תווית I ויישומו לתיוג רדיו יעיל של ננו-חלקיקי זהב מתפקדים בקבוצת DBCO באמצעות תגובת קליק נטולת נחושת. יוד רדיואקטיבי של הפרקורסור הסטנילטי-מבשר (2) בוצע על ידי שימוש ב-[125I]NaI וכלורמין T כמחמצן בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות. לאחר טיהור HPLC של המוצר הגולמי, הושג האזיד המטוהר 125עם תווית I (1) עם תפוקה רדיוכימית גבוהה (75 ± 10%, n = 8) וטוהר רדיוכימי מעולה (>99%). לסינתזה של ננו-חלקיקי זהב בגודל 13 ננומטר עם תווית רדיו, ננו-חלקיקי הזהב המתפקדים על ידי DBCO (3) הוכנו באמצעות פולימר פוליאתילן גליקול תיולטי. תגובת קליק נטולת נחושת בין 1 ל-3 נתנה ל-125ננו-חלקיקי זהב המסומנים ב-I (4) עם יותר מ-95% מהתפוקה הרדיוכימית כפי שנקבע על ידי כרומטוגרפיה של שכבה דקה רדיו (radio-TLC). תוצאות אלה מצביעות בבירור על כך ששיטת תיוג הרדיו הנוכחית המשתמשת בתגובת קליק ללא נחושת המקודמת על ידי מתח תהיה שימושית לתיוג רדיו יעיל ונוח של ננו-חומרים המכילים קבוצת DBCO.
מבוא
תגובת הקליק נטולת הנחושת המקודמת על ידי הזן בין אזידים לציקלוקוקטינים יושמה באופן נרחב על תיוג ביו-אורתוגונלי יעיל של מגוון רחב של ביו-מולקולות, ננו-חומרים ונבדקים חיים1-7. בשל ספציפיות האתר המצוינת וקצב התגובה המהיר של תגובת צימוד זו, הוא שימש גם לסינתזה של עוקבים עם תוויות רדיו. כמה קבוצות תותבות של 18אזיד או DBCO עם תווית F הוכנו לתיוג במבחנה של סוגי סרטן שונים המכוונים לפפטידים ונוגדנים, כמו גם להדמיה ממוקדת מראש של גידולים8-13. בנוסף לדוגמאות אלה, אותה תגובת צימוד יושמה על תיוג מתכת-רדיואיזוטופ של ננו-חומרים למחקרי הדמיה של טומוגרפיה של פליטת פוזיטרונים (PET)14-16.
במשך כמה ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
זהירות: צורת החמצון של יוד רדיואקטיבי היא תנודתי למדי ויש לטפל עם מגינים להוביל נאותים בקבוקוני עופרת. כל צעדי radiochemical צריכות להתבצע במנדף פחם-מסונן מאוורר היטב, ואת הפרוצדורות צריכות להיות פיקוח על ידי זיהוי התקני רדיואקטיביות.
1. הכנת הכימיקלים והמחסנית הפוך שלב לסינתזה של 125 I-שכותרתו יזיד
- הכנת ריאגנטים בתמיסה
- ממסי 1 מ"ג של המבשר יזיד (2) ב 150 μl את....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
תגובת radioiodination של מבשר stannylated (2) בוצעה באמצעות 150 MBq של [125 I] נאה, חומצה אצטית, ו chloramine T בטמפרטורת חדר למשך 15 דקות כדי לספק את המוצר רדיואקטיבי (1). לאחר HPLC טיהור preparative של התערובת הגולמית, המוצר הרצוי הושג עם 75 ± 10% (n = 8) של תשואת radiochemical. HPLC אנליטי חשף כי טוהר radiochemical של שכותרתו לי מוצר 125 היה יותר מ -99% (איור 2), ואת הרדיוא.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
באופן כללי, התשואה radiochemical הנצפה של אזיד מטוהרים 125 שכותרתו-I (1) היה 75 ± 10% (n = 8). Radiolabeling הושג עם 50-150 MBq של רדיואקטיביות, ותוצאות radiochemical הן די עקביות. אם [125 I] Nai (t 1/2 = 59.4 ד) כי עבר התפרקות רדיואקטיבית במשך יותר מחודש שמשה תגובת radioiodination, תשואת radiochemical של 1 נצפה להיות ירידה קלה (53-65%). לכן, מומלץ כי [125 I] Nai להיות מנוצל ברגע זה מיוצר או מוע.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מקרן המחקר הלאומית של קוריאה, במימון ממשלת הרפובליקה של קוריאה, (מענקים מס' 2012M2B2B1055245 ו-2012M2A2A6011335) ועל ידי מרכז RI-Biomics של מכון המחקר לאנרגיה אטומית של קוריאה.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| כלורמין T trihydrate | Sigma | 402869 | |
| [125I]NaI in aq. NaOH | Perkin-Elmer | NEZ033A010MC | |
| נתרן מטאביסולפיט | Sigma | S9000 | |
| חומצה פורמית | Sigma | 251364 | |
| Sep-Pak tC18 plus מחסנית | מים | WAT036800 | |
| דימתיל סולפוקסיד | סיגמא | D2650 | |
| אצטון | סיגמא | 650501 | |
| אתנול | סיגמא | 459844 | |
| זהב(III) כלוריד טריהידראט | סיגמא | 520918 | |
| 20 | Sigma | P1379 | |
| DBCO PEG SH (MW 5,000) | NANOCS | PG2-DBTH-5k | |
| TLC סיליקה ג'ל 60 F254 | Merck | ||
| אנליטי HPLC | Agilent | 1290 אינפיניטי | מספר דגם |
| הכנה HPLC | Agilent | 1260 אינסוף | מספר דגם |
| אנליטי C18 עמודה הפוכה | Agilent | Zorbax Eclipse XDB-C18 | |
| Preparative C18 עמודה הפוכה | Agilent | PrepHT XDB-C18 | |
| סורק רדיו TLC | Bioscan | AR-2000 | מספר דגם |
| כיול מינון רדיואיזוטופ | Capintec, Inc | CRC -25R כיול מינון | מספר דגם |
מקורות
- Jewett, J. C., Bertozzi, C. R. Cu-free Click Cycloaddition Reactions in Chemical Biology. Chem. Soc. Rev. 39, 1272-1279 (2010).
- Debets, M. F., et al. Bioconjugation with Strained Alkenes and Alkyne. Acc. Chem. Res. 44, 805-815 (2011).
- Sletten, E. M., Bertozzi, ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
