Summary
स्तन कैंसर मेटास्टेसिस को लक्षित करने वाले सहायक चिकित्सा का मूल्यांकन करने वाली पूर्व नैदानिक मॉडल की कमी है। इसका समाधान करने के लिए, हमने नवो फुफ्फुसीय स्तनधारी एडेनोकार्किनोमा मेटास्टेसिस का एक मूरीन मॉडल विकसित किया, जिसमें सहायक तंत्र (प्राथमिक ट्यूमर के सर्जिकल रिसेक के बाद) में प्रशासित चिकित्सकों का मूल्यांकन किया जा सकता है, पहले बीजयुक्त फुफ्फुसीय मेटास्टेस को प्रभावित करने में प्रभावकारिता के लिए मूल्यांकन किया जा सकता है।
Introduction
उत्तरी अमेरिका में महिलाएं स्तन कैंसर 2 के विकास का ~ 12% आजीवन जोखिम है; इनमें से अधिकतर व्यक्तियों को शल्य चिकित्सा के माध्यम से प्राथमिक ट्यूमर को हटा दिया जाता है, और कैंसर उपप्रकार के आधार पर, उसके बाद सहायक, सेटिंग, 3 में लक्षित, एंडोक्राइन, केमो- और / या विकिरण चिकित्सा प्राप्त होगी। उदाहरणों में, हार्मोन रिसेप्टर-पॉजिटिव कैंसर का निदान महिलाओं को एचईआर 2-पॉजिटिव ट्यूमर के साथ एंटीस्ट्रोन एस्ट्रोजेन थेरेपी और महिलाओं को विकिरण / कीमोथेरेपी के साथ एचईआर 2-लक्षित उपचार प्राप्त करने के लिए किया गया है, जबकि कोई भी लक्षित उपचार तीन गुना ट्यूमर 3 के लिए उपलब्ध नहीं है। रेडियेशन, किमोथेरेपी, व्यक्तिगत और हार्मोन आधारित चिकित्सा में प्रगति के बावजूद शल्यचिकित्सा के शोधन के पूरक, 30-70% महिलाओं में स्टेज II या III रोग 4 के निदान के रोग में पुनरावर्ती है, क्योंकि चिकित्सा, दूरसंचारों में मेटास्टैटिक रोग को समाप्त करने में काफी हद तक अप्रभावी हैं फेफड़े, हड्डी, बीबारिश और / या यकृत 5 यह विशेष रूप से महत्वपूर्ण है कि जब प्राथमिक ट्यूमर के अभाव में मेटास्टेटिक बीमारी होती है, तो इसका अर्थ है कि निश्चित सर्जरी के समय में प्रसारित घातक कोशिका द्वितीयक अंगों में पहले से मौजूद थीं। इस प्रकार मेटास्टैटिक ट्यूमर के विकास को खत्म करने या धीमा करने में सक्षम चिकित्सक तत्काल आवश्यक हैं।
जबकि स्तन कैंसरजन के नए मॉडल मॉडल नेपोलैस्टिक प्रगति 1 को विनियमित करने के तंत्रों को प्रकट करने में उल्लेखनीय जानकारी दी है, मौजूदा मॉडल में भी कई सीमाएं हैं इनमें से एक तथ्य यह है कि नवोन्मुखी ट्रांसजेनिक मॉडल आमतौर पर कई स्तन ग्रंथियों में प्राथमिक ट्यूमर विकसित करते हैं, जिसमें प्राथमिक ट्यूमर बोझ अध्ययन की अवधि सीमित करता है। जबकि प्राथमिक ट्यूमर कोशिका से बचने और मेटास्टैटिक बीजों की संभावना इन मॉडलों में नवप्रॉपलस्टिक प्रगति की शुरुआत में होती है, मेटास्टाटिकल ट्यूमर का स्पष्ट विकास देर से होता है, और यह निर्भर करता है किN माउस मॉडल और तनाव की पृष्ठभूमि, अक्सर आंशिक रूप से 1 घुसना है। इसके अलावा, द्वितीयक अंगों में मेटास्टेस को नियमन करने वाले अणुओं की खोज के लिए, और सहायक सेटिंग में चिकित्सकों के पूर्व-क्लिनिकल प्रभावकारिता के मूल्यांकन के लिए अब नए मॉडल की उपयोगिता को सीमित करता है।
इन सीमाओं को नाकाम करने के लिए हम फेफड़ों के लिए स्तन कार्सिनोमा मेटास्टेसिस के एक नए सिरे से मूल निवासी मॉडल विकसित किया है। माता-पिता की ट्रांसजेनिक महिलाओं ( यानी एमएमटीवी-पीईएमटी एफसीबी / एन स्ट्रेन पृष्ठभूमि पर यहां वर्णित अध्ययनों के लिए) देर से अवस्था के निओ स्तनपान के ट्यूमर की आयु 100 दिनों के लिए 6 वर्ष है, जिस पर उनके प्राथमिक ट्यूमर को शल्यचिकित्सा में शोधन किया जाता है और एंजाइमेटिक रूप से अलग हो जाता है। एकल कक्ष निलंबन सस्पेंशन (1 एक्स 10 6 कोशिकाएं) बारी-बारी से 6-7 सप्ताह के पुराने प्राप्तकर्ता सिनेजेनिक मादा चूहों में छिपी हुई हैं, जहां एक प्राथमिक स्तन ट्यूमर 38 से 60 दिन की अवधि में विकसित होते हैं ( 3 ) पर, प्राप्तकर्ता चूहों का संवेदनाहट होता है और प्राथमिक ट्यूमर को शल्यचिकित्सा में शल्यचिकित्सा किया जाता है जैसे कि सर्जिकल साइट पर ट्यूमर के पुनर्निर्माण को कम किया जाता है, महिलाओं में सर्जरी के साथ अनुरूप ( अनुपूरक चित्रा 1 )। एफवीबी / एन तनाव की पृष्ठभूमि पर, चूहों फेफड़ों में हिस्टोलिजिकल-डिटेक्टेबल मेटास्टैटिक फॉस को 45% पर्सिटेंस के साथ ~ 115 दिन बाद सर्जरी ( चित्रा 1 बी ) द्वारा विकसित करती हैं। मेटास्टाटिकल ट्यूमर की वृद्धि के इस विस्तारित विलंब के साथ, मॉडल सहायक चिकित्सा वितरण के लिए विशिष्ट रूप से स्थित है, और प्राथमिक ट्यूमर के शल्य चिकित्सा हटाने के बाद मेटास्टैटिक प्रगति को प्रभावित करने वाले अंतर्निहित जीव विज्ञान का स्पष्ट और मूल्यांकन करने के लिए।
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Protocol
निम्नलिखित प्रोटोकॉल में इस्तेमाल किए गए पशु ओरेगन हेल्थ एंड साइंस यूनिवर्सिटी की इंस्टीट्यूशनल एनीम केयर एंड यूज कमेटी (आईएसीयूसीसी) द्वारा कवर किए गए हैं, जिसे पशु कल्याण कानून के नियमों और लोक स्वास्थ्य सेवा (पीएचएस) नीति के अनुरूप बनाया गया है।
बाँझ परिस्थितियों का रखरखाव: जीवाणु यंत्रों का इस्तेमाल किया जाना चाहिए और चूहों के बीच, पीबीएस में धुलाई, बाँझ धुंध के साथ साफ साफ किया जाना चाहिए, इसके बाद कम से कम 15 मिनट के लिए निस्संक्रामक 70% इथेनॉल के साथ श्वसनिकाण किया जाना चाहिए। जीवित रहने की सर्जरी के लिए सर्जिकल टोपी, फेसमास्क, गाउन और दस्ताने पहना जाना चाहिए। जीवित रहने की सर्जरी के लिए जानवरों की पूर्व-ऑपरेटिव तैयारी निम्नलिखित प्रोटोकॉल में शामिल है। अभिकर्मकों और उपकरणों की सूची के लिए तालिका 1 को देखें।
1. प्राथमिक स्तन ट्यूमर से सिंगल सेल सस्पेंशन की अलगाव और तैयारी
- एनेस्थेटेस दाता मादा 100 दिन पुराने ट्रांसजेनिक एमएमटीवी-पीईएमटी (एफवीबी / एन) चूहों और सी के तहत बनाए रखनाएक एनेस्थेसिया मुखौटा के माध्यम से 2% आईसोफ्लुरेन के प्रशासन द्वारा खुशियां बेहोश। पुष्टि करें कि अनुपस्थित पैर चुटकी पलटा के साथ माउस ठीक से anesthetized है
- बाँझ कैंची का उपयोग करते हुए त्वचा की त्वचा और आसपास के वसा ऊतक और / या लिम्फ नोड्स से स्तन ट्यूमर को अलग करके 100 दिनों की पुरानी ट्रांसजेनिक मादा एमएमटीवी-पीईएमटी (एफवीबी / एन) चूहों से एक बाँझ सेटिंग, प्राथमिक स्तनपायी ट्यूमर में। ग्रीवा अव्यवस्था द्वारा संवेदनाहारी चूहों को पुष्ट करें
- बाँझ कैंची या स्केलपेल के साथ, प्राथमिक ट्यूमर को मैन्युअल रूप से छोटे टुकड़ों (~ 1.0 मिमी 3 ) में दबाएं। 3.0 मिलीग्राम / एमएल कोलेजनज़ ए और 4.0 यू / एमएल डीएनस में डीएमईएम में भंग होने वाले ट्यूमर के टुकड़े रखें। ऊपर पाचन माध्यम के ~ 10 एमएल प्रति 1.0 सेंटीमीटर व्यास ट्यूमर का उपयोग करें।
- बाँझ 25 मिलीलीटर बोतल में ~ 125 आरपीएम पर एक बाँझ हलचल बार और 40 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के साथ पाचन करें।
- भ्रूण को गोजातीय सीरम (एफबीएस) को 10% के अंतिम मस्तिष्क में जोड़कर पाचन बंद करो और पूरे मिश्रण को डब्ल्यूएट बर्फ जहां यह बनाए रखा है।
- पचाने वाले ट्यूमर निलंबन को 0.7 माइक्रोन नायलॉन स्ट्रेनर के माध्यम से 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब में फ़िल्टर करें और स्ट्रेनर में शेष ट्यूमर को त्याग दें। 300 डिग्री सेल्सियस पर 4 डिग्री सेल्सियस पर सतह पर तैरनेवाला अपकेंद्रित्र
- 10 एमएल डीएमईएम प्रति 1.0 सेंटीमीटर ट्यूमर में गोली रिसेट करें और 0.7 माइक्रोन नायलॉन स्ट्रेनर के माध्यम से फिर से फिल्टर करें। सेल एकाग्रता की गणना करें, फिर 300 डिग्री सेल्सियस पर 4 डिग्री सेल्सियस पर अपकेंद्रित्र
- 2 x 10 7 जीवित कोशिकाओं / एमएल की एकाग्रता में 90% एफबीएस के साथ 10% डाइमिथाइल सल्फॉक्सिड में रीससस्पेंड गोली। -80 डिग्री सेल्सियस पर पूरे प्राथमिक ट्यूमर के सिंगल-सेल निलंबन को स्टोर करें
2. स्तन ट्यूमर के ऑर्थोपाइक इंजेक्शन
- जमे हुए प्राथमिक ट्यूमर निलंबन को 37 डिग्री सेल्सियस तक आंशिक रूप से पिघलना जब तक जमे हुए गोली को क्रायोजेनिक ट्यूब से 20 मिलीलीटर डीएमईएम में छोड़ दिया जा सकता है और कोशिकाओं की गणना कर सकते हैं। 300 डिग्री सेल्सियस पर 4 डिग्री सेल्सियस और 1: 1 डीएमईएम में resuspend कोशिकाओं में अपकेंद्रित्र: विकास कारक-कम solubilized तहखाने झिल्ली तैयारी ई1 एक्स 10 7 कोशिकाओं / एमएल ( सामग्री की तालिका देखें) की एकाग्रता पर एंजेलब्रेथ-होल्म-झुंड (ईएचएस) माउस सरकोमा से निकाले गए।
- Anesthetized प्राप्तकर्ता महिला syngeneic माउस उदर पक्ष को रखें और एक एनेस्थेसिया मुखौटा के माध्यम से 2% आईसोफ्लुरेन का प्रबंध करके निरंतर बेहोशी के तहत बनाए रखें।
- एरोसोलिज्ड 70% इथेनॉल का उपयोग कर सही 4 वीं स्तन ग्रंथि इंजेक्शन साइट जीवाणु और एक बाँझ कपास झाड़ू के साथ पाली (vinylpyrrolidone) आयोडीन लागू।
- 2 जीबी 0.3 मिलीलीटर इंसुलिन सिरिंज का उपयोग करके 6 से 10 सप्ताह की उम्र वाली महिला एफवीबी / एन माउस की स्पष्ट चौथी स्तन ग्रंथि में 100 μL (जमे हुए प्राथमिक ट्यूमर निलंबन से 1 एक्स 10 6 जीवित कोशिकाओं) इंजेक्षन करें।
Orthotopic स्तन ट्यूमर की सर्जिकल शल्य चिकित्सा
- ट्यूमर सेल इंजेक्शन के बाद 38-60 दिन, चूहों को euthanize नहीं है कि ऑर्थोपीटिक ट्यूमर की मात्रा 172 से 450 मिमी 3 के बीच मात्रा में प्रदर्शित नहीं करता [लंबाई x (चौड़ाई 2
- एनेस्थेटिज्ड चूहों को उचित ट्यूमर आकार उदर तरंगों को एक एनेस्थेसिया मुखौटा के जरिए 2% आइसोफ्ल्यूरन का संचालन करके निरंतर बेहोश करने की क्रिया के तहत प्रदर्शित करें और पुष्टि करें कि अनुपस्थित पैर चुटकी पलटा के साथ माउस ठीक से संवेदनाहृत है। बेहोश करने की क्रिया के दौरान सूखापन की रोकथाम के लिए आँखों पर पशु चिकित्सक मरहम लागू करें
- प्राथमिक ट्यूमर के आस-पास सर्जिकल क्षेत्र को बाँझने के लिए 70% इथेनॉल स्प्रे करें, फिर एक बाँझ कपास झाड़ू के साथ पॉली (vinylpyrrolidone) -Iodine को लागू करें।
नोट: सर्जिकल साइट पर बालों को हटाने के परिणामस्वरूप ~ 5% चूहों के लिए त्वचा की उत्तेजनाएं और / या संक्रमण होने के कारण इसे इस चरण (डेटा नहीं दिखाया गया) से बाहर रखा गया था। - जैसा चित्रा 1 सी में दिखाया गया है, ट्यूमर के लिए कुंद कैंची का औसत दर्जे का दुम का उपयोग करके एक प्रारंभिक त्वचा चीरा बनायें।
- इसके बाद, ट्यूमर को त्वचा के बेहतर छांटना ( चित्रा -1 सी ) औसत दर्जे का बना लें। किसी भी vasculature fe दबाना करने की आवश्यकता पर ध्यान देंचीरा का विस्तार करने से पहले त्वचा पर स्थित ट्यूमर एडिंग करना
- बाद में त्वचा की चीरा जारी रखें (ट्यूमर के बाद), फिर बेहतर त्वचा छांटना (ट्यूमर के पार्श्व), और औसत दर्जे का ट्यूशन (ट्यूमर से बेहतर) ( चित्रा 1 सी ) करें।
- ट्यूमर ( चित्रा -1 सी ) के चारों ओर त्वचा को परिशोधित करने के बाद त्वचा को संदंश का उपयोग करके ट्यूमर से जुड़ा हुआ त्वचा को ऊपर उठाना होता है, जबकि ऊतक दीवार की मांसपेशियों से दूर ट्यूमर को विदारक करना और स्तन ग्रंथियों को बरकरार रखना।
- पहचानें (कुंद विच्छेदन से) और 4 वें और 5 वीं स्तन ग्रंथियों के माध्यम से चलने वाले बड़े जहाजों को डालना।
- ट्यूमर, ओवरलाइनिंग त्वचा, और स्तन ग्रंथियों ( चित्रा 1 सी ) के खंड को मुक्त करने के लिए दबाने वाली साइट पर 4 वें और 5 वें स्तन ग्रंथियों का आधा हिस्सा।
- खून बह रहा होने की स्थिति में सक्रिय रक्तस्राव की पहचान करेंजहाजों और तुरंत उन्हें दबाना यदि 250 से अधिक μL रक्त खो दिया है, तो अध्ययन से माउस को बाहर निकालें और इसे ठीक करें।
- एक घाव क्लिप सेपरियर ( चित्रा -1 सी ) का उपयोग करके घाव क्लिप के साथ छांटना बंद करें।
नोट: घाव क्लिप हटानेवाला के साथ 10 दिनों के बाद शल्य चिकित्सा के घाव क्लिप निकालें - गर्म बाँझ खारा subcutaneously (जानवर के शरीर के वजन का 4%) प्रशासन और एक गर्मी दीपक के साथ गर्म जानवर रखो। संज्ञाहरण से वसूली के दौरान हर 5-10 मिनट जानवरों की जांच करें
नोट: बिपिवैकाइन या लिडोकेन का प्रशासन पोस्ट-ऑपरेटिव मृत्यु दर में वृद्धि (डेटा नहीं दिखाया गया)। चूहों ने दिखाया कि दर्द के लक्षण (हचने, आगे बढ़ने के लिए तैयार नहीं, दूल्हे की असफलता) शल्य चिकित्सा के बाद 1 घंटे का सफाया किया गया।- एक बार जब माउस पूरी तरह से ठीक हो जाए, तो इसे अन्य चूहों की कंपनी में लौटा दें।
4. फ्लो साइटोमेट्री और हिस्टोलॉजी के लिए रक्त और फेफड़े के अलगाव और प्रसंस्करण
<ol>नोट: भंग ब्रोमोडायकोरुइडिन के जमे हुए स्टॉक तैयारी के 1 महीने के भीतर उपयोग किया जाता है।
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Representative Results
एमएमटीवी-पीईएमटी चूहों से प्राप्त प्राथमिक स्तनपायी ट्यूमर से 1 एक्स 10 6 कोशिकाओं को प्राप्त करने वाले 75% से अधिक प्राप्तकर्ता चूहों, एक स्तनधारी एडेनोकार्किनोमा को 172 से 450 मिमी 3 तक 38-60 दिनों के भीतर विकसित (डेटा नहीं दिखाया गया है)। यादृच्छिकीकरण के लिए योग्य चूहे को फिर से दिखाया गया है ( चित्रा -1 सी ) के रूप में प्राथमिक ट्यूमर के शल्य चिकित्सा लसीकरण के बाद अध्ययन समूहों में दाखिला लिया। प्राथमिक ट्यूमर regrowth 2% से कम चूहों कि प्राथमिक ट्यूमर ( पूरक चित्रा 1 ) के शल्य चिकित्सा लसीकरण के अंतर्गत कम से कम में पहचान की थी। इस प्रोटोकॉल द्वारा मूल्यांकन किए गए प्राप्तकर्ता चूहों का 45% दिन 115 पोस्ट-ट्यूमर लसीकरण ( चित्रा 1 बी ) द्वारा हिस्टोलिक रूप से डिटेक्टीबेट करने योग्य मेटास्टेटिक फौको विकसित किया था। एचएंडई स्टेनिंग द्वारा मेटास्टैटिक कोशिकाओं वाले पहचाने वाले क्षेत्रों में मेटास्टेस के हिस्टोलोजी को पक्का करने के लिए, आसन्न ऊतक वर्गों का मूल्यांकन पीईएमटी पीसीआर (डेटा नहीं) द्वारा किया गया थादिखाया गया है)।
चित्रा 1 : प्राथमिक ट्यूमर के बाद सर्जिकल शल्यक्रिया और नए फुफ्फुसीय मेटास्टेसिस के विकास ( ए ) मूरीन मार्मिक एडेनोकार्किनोमा मेटास्टेसिस मॉडल की प्रायोगिक स्कीमा। † यह दर्शाता है कि सभी चूहों को हृदय रोगी के दौरान हृदय रोग से पीड़ित किया गया था और बीआरडीयू के साथ इंजेक्ट किया गया था। ( बी ) प्रतिनिधि एच एंड ई जहां मेटास्टेटिक फ़ॉसी का पता लगाया गया था एफओएफईई फेफड़े के ऊतक के सीरियल सेक्शनिंग द्वारा लोब अलग किए गए। मेटास्टेटिक फॉसी (> 5 कोशिकाएं) एचएंडई द्वारा प्रति 100 माइक्रोन प्रतिजनों को 1,300 माइक्रोन के ऊतक को दर्शाती है। 11 चूहों से फेफड़े का विश्लेषण किया गया। ( सी ) प्राथमिक स्तन कैंसर की शल्य चिकित्सा के लसीकरण की स्कीमा। लाल संख्याएं और तीर त्वचा चीरों के आदेश और दिशा को दर्शाती हैंप्राथमिक ट्यूमर की सीमा (बाएं) प्रमुख जहाजों वाला सही 4 वें और 5 वें स्तन ग्रंथियां प्राथमिक ट्यूमर (मध्य) से जुड़ी होती हैं, जिसके बाद घाव क्लिप (दाएं) के साथ घाव बंद हो जाता है। इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें
चित्रा 2 : फेफड़े के अलगाव, छिड़काव और निर्धारण। चित्र (बाएं) और संबंधित कार्टून (दाएं) फेफड़ों के अलगाव, छिड़काव और निर्धारण का दिखाया गया है। ( ए ) एक मिडलाइन चीरा सही 4 वें और 5 वें स्तन ग्रंथियों (तीर) को उजागर करते हुए वापस लेने वाली त्वचा को प्रदर्शित करने वाली इनसेट छवि के साथ दिखाया गया है। ( बी ) डायाफ्राम के लिए पेट की दीवार को दिखाया गया है ( सी ) वापसी के बाद ओच आंत, पेट की महाधमनी (तीक्ष्म) की पहचान की जाती है और खुली होती है। ( डी ) छाती पिंजरे के डायाफ्राम और पार्श्व पक्षों को छाती पिंड का पर्दाफाश करने के लिए कटौती की जाती है। ( ई ) फेफड़ों को दिल के दाएं वेंट्रिकल के माध्यम से फेफड़ों तक घुमाया जाता है जब तक कि फेफड़ों को पूरी तरह से सफेद ( एफ ) न हो। ( जी ) उजागर ट्रेकिआ की पहचान तब हुई जब फेफड़े फैलाने तक ( आई ) फैलाने के बाद फारेरलिन ( एच ) को इंजेक्शन लगाने लगे। इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें
अनुपूरक चित्रा 1 : सर्जिकल साइट पर प्राथमिक ट्यूमर regrowth। प्रतिनिधि एच एंड ई (शीर्ष) और शेष दाएं 4 वें और 5 वीं स्तन ग्रंथि पोस्ट सर्जरी की सकल (नीचे) छवियों, तुप्राथमिक ट्यूमर रेग्रोथ ( सीई ) के साथ इंजिनल लिम्फ नोड ( एबी ) और स्तन ग्रंथि के साथ फिर से विकसित होता है। कृपया इस आंकड़े को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।
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Discussion
संशोधन और समस्या निवारण:
पेट की दीवार से ट्यूमर को विदारक करते समय, ट्यूमर पेट की दीवार के अनुयायी रह सकता है। यह <5% ट्यूमर के साथ इंजेक्ट किया गया चूहों (डेटा नहीं दिखाया गया) में देखा गया था। पेट की दीवार के अनुरुप ट्यूमर के साथ चूहों के लिए, चूहे को प्राथमिक रूप से ट्यूमर रेगोरथ के बिना कठोरता से निकालना मुश्किल होता है।
मॉडल / तकनीक की सीमाएं:
जबकि अन्य जांचकर्ताओं ने फ्लोरोसेंटली लेबल वाले एकल मेटास्टेटिक कोशिकाओं की उपस्थिति की जानकारी ली है, फेफड़े के अलावा, एमएमटीवी-पीईएमटी चूहों 7 से ली गई स्तनमय टर्मिनल अंत की कलियों के पुनर्निर्माण के बाद, फेफड़ों के अलावा जिगर, गुर्दा, प्लीहा और मस्तिष्क में फैलता है, हम फेफड़े से एक तरफ देखते हैं यकृत में मेटास्टाटिक फॉइस के साथ चूहों, जिसकी पहुंच अभी तक निर्धारित नहीं की गई है संभावित मेटास्टात्मक बोझ की अन्य साइटें, जैसे कि लिम्फ नोडएस, प्लीहा, हड्डी और मस्तिष्क का मूल्यांकन नहीं किया गया था। सर्जिकल साइट को शेविंग करते समय इस तकनीक की एक सीमा में पोस्ट-ऑपरेटिव उत्तेजनाएं और त्वचा का संक्रमण भी शामिल था। इस वजह से सर्जिकल साइट की बाहृदयता 70% इथेनॉल के आवेदन के लिए सीमित थी, उसके बाद पाली (विनीलपीरॉरिडोन) -इदोनीन
प्रोटोकॉल के भीतर महत्वपूर्ण कदम:
पेट की दीवार से ट्यूमर के बंट विच्छेदन एक महत्वपूर्ण कदम है (चरण 3.7) जहां स्तन ग्रंथि के भीतर के जहाजों का बचाव किया जाना चाहिए। चरण 3.8 और 3.9 भी महत्वपूर्ण कदम हैं जहां अनियंत्रित रक्तस्राव के लिए सबसे बड़ा खतरा होता है। रक्तस्राव के स्रोतों को सहज रूप से कल्पना करने के लिए पोषण के बिना समेकित समीपस्थ और बाहरी हिस्से को पोस्ट-कॉटरराइज़ेशन की पहचान करनी चाहिए।
मौजूदा तरीकों के संबंध में महत्व:
मानव कैंसर के माउस मॉडल रोग के चरणों की नकल कर रहा हैप्रगति, कैनेटीक्स और हिस्टोपैथोलॉजी अमूल्य उपकरण प्रदान करते हैं जिसमें चिकित्सा के नए लक्ष्यों की पहचान और मूल्यांकन किया जाता है, साथ ही उन अणुओं / पथों को लक्षित करने वाले नए चिकित्सीय एजेंटों की संभावित प्रभावकारिता प्रदान करते हैं। जबकि स्थापित कैंसर सेल लाइनों की पूंछ-नस और / या कार्डियक इंजेक्शन को अक्सर मेटास्टेसिस के प्रयोगात्मक मॉडल के रूप में उपयोग किया जाता है, ये मेटास्टैटिक प्रक्रिया में महत्वपूर्ण कदमों को पुनरावृत्ति करने में विफल रहते हैं, और इसके बजाय एक्टोपिक ऑर्गन बेनिगनेशन एशेज को प्रतिबिंबित करते हैं जहां ट्यूमर सेल के अस्तित्व का पहल मूल्यांकन किया जा सकता है 8 इसके अलावा, जबकि नए स्तन कैंसरजनन विकास के कुछ मौजूदा ट्रांसजेनिक माउस मॉडल मेटास्टेसिस में शामिल कदमों के अध्ययन को सक्षम करने वाले मॉडल सिस्टम प्रदान करते हैं, महत्वपूर्ण प्राथमिक ट्यूमर का बोझ आमतौर पर अध्ययन की अवधि सीमित करता है। इस प्रकार समूह ने एमएमटीवी-पीईएमटी प्राथमिक ट्यूमर से प्राप्त सभ्य नवोप्लास्टिक कोशिकाओं को सर्जिकल रिक्शा 9 की अनुमति देने के लिए इंजेक्शन किया है। हमारी पद्धति इन तकनीकों से विस्तार करती है क्योंकि यह डीइन विट्रो में ट्यूमर से उगने वाली नियोप्लास्टिक सेल लाइनों के लिए चयन नहीं है और सीधे प्राप्तकर्ता चूहों को पूर्ण, विषम प्राथमिक ट्यूमर का परिचय देता है। इसके अतिरिक्त, हमारे मॉडल में फेफड़े के मेटास्टेसिस गठन की लंबी विलंब से विभिन्न उपचार अध्ययनों के लिए बेहतर चिकित्सीय खिड़की की अनुमति मिलती है।
भविष्य के अनुप्रयोग:
इन मॉडलों में चिकित्सा विज्ञान की प्रभावकारिता के मूल्यांकन के बारे में, क्योंकि प्राथमिक ट्यूमर आम तौर पर सभी स्तन ग्रंथियों में विकसित होते हैं, सभी प्राथमिक ट्यूमरों के शल्यचिकित्सा की ढालना और मेटास्टाक कॉलोनियों के विकास को कम करने के उद्देश्य से चिकित्सकों के सहायक मूल्यांकन के लिए संभव नहीं है। इन मुद्दों के कारण, हम मेटास्टेटिक प्रसार के मूल निवासी मॉडल विकसित किया है जिसमें ट्यूमर कोशिकाओं के मेटास्टेटिक प्रसार नए सिरे से होता है, और प्राथमिक ट्यूमर के में सर्जरी, एक विस्तारित विलंबता अवधि से स्थापित है कि फेफड़ों में मेटास्टेसिस की पहचान के लिए अनुमति देता है के बाद। इस प्रकार, यह मॉडलमानव स्तन कैंसर मेटास्टेसिस दर्पण करते हैं और प्रति IACUC दिशानिर्देश प्रति परिभाषित अंत बिंदुओं के साथ बीमारी मुक्त जीवित रहने और / या समग्र अस्तित्व को नियंत्रित करने के लिए सहायक चिकित्सकों की प्रभावकारीता का मूल्यांकन करने के लिए एक अनूठी प्रणाली प्रदान करती है।
के बाद से स्तन कैंसर के साथ महिलाओं का एक बड़ा हिस्सा प्राथमिक ट्यूमर 10, और उन प्रगति की है कि बाद में बाहर का मेटास्टेसिस विकसित की में सर्जरी से इलाज कर रहे हैं, यह संकेत मिलता है कि प्रसार और बोने में सर्जरी से पहले हुआ था। बाहर का अंग microenvironments जीवित और / या proliferating मेटास्टेटिक कोशिकाओं 11 के लिए अद्वितीय आलों प्रदान करते हैं। इस प्रकार, यह आवश्यक है कि मॉडल प्रणालियां इन पहलुओं की नकल करें जैसे कि माध्यमिक स्थलों में संचालित अणुओं और रास्ते, जो कि प्राथमिक ट्यूमर से भिन्न होते हैं, पहचाने जा सकते हैं, अध्ययन कर सकते हैं, और प्रभावकारीता के लिए सही तरीके से मूल्यांकन करने वाले चिकित्सकों को लक्षित कर सकते हैं। यहां विकसित हुए मॉडल अध्ययन के लिए इन पहलुओं को प्रदान करता है।
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Disclosures
लेखकों के यहां प्रस्तुत आंकड़ों के साथ संघर्ष का कोई खुलासा नहीं है।
Acknowledgments
लेखकों ने हिस्टोपैथोलॉजी सहायता, डॉ। जॉन ग्लेस्टीन के लिए सर्जिकल तकनीक में शिक्षा के लिए, टेसा डायबेल के लिए वीडियोग्राफी सहायता, महत्वपूर्ण जानकारी और चर्चा के लिए वोंग और क्यूसेंस प्रयोगशालाओं के सभी सदस्यों और वित्तीय सहायता के लिए ओएचएसयू नाइट कैंसर संस्थान के लिए जो हिल का धन्यवाद किया है। लेखक T32GM071388-10 और T32CA106195-11 से सीईजी, एनसीआई / एनआईएच, डिफेन्स ऑफ डिफेन्स ब्रेस्ट कैंसर रिसर्च प्रोग्राम, सुसान जी कॉमन फाउंडेशन, ब्रेस्ट कैंसर रिसर्च फाउंडेशन, और कैंसर के लिए खड़े हो जाओ - Lustgarten फाउंडेशन से समर्थन स्वीकार करते हैं एलएसी के लिए अग्नाशयी कैंसर अभिसरण सपना टीम ट्रांसलेशनल रिसर्च अनुदान (एसयूसीसी-एएसीआर-डीटी 14-14), एमएचडब्ल्यू को महिला स्वास्थ्य सर्किल ऑफ गिविंग फाउंडेशन पुरस्कार और एमएचडब्ल्यू और एलएमसी के लिए अग्नाशयी स्वास्थ्य के लिए ब्रेंडेन-कोलन सेंटर।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isofluorane | Piramal Healthcare | N/A | Prescription order |
| Collagenase A | Roche | 11088793001 | |
| DNase I | Roche | 10104159001 | |
| DMEM | ThermoFisher | 12634010 | |
| 25 mL Pyrex bottle | Sigma-Aldrich | CLS139525 | |
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Bio | S11150 | |
| 0.7 µm nylon strainer | Corning | 352350 | |
| 50 mL conical tube | VWR | 89039-658 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| Growth factor-reduced Matrigel | BD | 354230 | Growth factor-reduced solubilized basement membrane preparation extracted from the Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma |
| Poly(vinylpyrrolidone)–Iodine complex | Sigma-Aldrich | PVP1 | |
| 29 gauge 0.3 mL insulin syringe | BD | 324702 | |
| Small Vessel Cauterizer Kit | FST | 18000-00 | |
| Wound clips | Texas Scientific | 205016 | |
| AutoClip wound clip applier | BD | 427630 | |
| AutoClip wound clip remover | BD | 427637 | |
| Bromodeoxyuridine | Roche | 10280879 | |
| Heparinized capillary tubes | Fisher | 22362566 | |
| Microtainer tubes with dipotassium EDTA | BD | 365974 | |
| 20 mL syringe | BD | 309661 | |
| DPBS | Thermo-Fisher | 14190-250 | |
| OCT-freezing medium | VWR | 25608930 | |
| Formalin, Buffered, 10% (Phosphate Buffer) | Fisher | SF100-4 | |
| 23g needle | Fisher | 14-826-6B | |
| FVB/n mouse | Jackson Laboratories | 001800 |
References
- Fantozzi, A., Christofori, G. Mouse models of breast cancer metastasis. Breast Cancer Res. 8, 212 (2006).
- SEER Cancer Statistics Review 1975-2008. Howlader, N. N. A., Krapcho, M. , National Cancer Institute. Bethesda, MD. based on November 2010 SEER data submission, posted to the SEER web site. http://seer.cancer.gov/csr/1975_2008/ (2011).
- National Comprehensive Cancer Network. Breast Cancer (Version 3.2014). , Accessed November 25. http://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/breast.pdf (2016).
- Kataja, V., Castiglione, M., Group, E. G. W. Locally recurrent or metastatic breast cancer: ESMO clinical recommendations for diagnosis, treatment and follow-up. Ann Oncol. 19 Suppl 2, 11-13 (2008).
- Margolese, R. G., Hortobagyi, G. N., Buchholz, T. A., et al. Management of Metastatic Breast Cancer. Holland-Frei Cancer Medicine. Kufe, D. W., Pollock, R. E., Weichselbaum, R. R., et al. , 6th, BC Decker. Hamilton (ON). (2003).
- Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease. Mol Cell Biol. 12, 954-961 (1992).
- Kouros-Mehr, H., et al. GATA-3 links tumor differentiation and dissemination in a luminal breast cancer model. Cancer Cell. 13, 141-152 (2008).
- Minn, A. J., et al. Genes that mediate breast cancer metastasis to the lung. Nature. 436, 518-524 (2005).
- Qian, B. Z., et al. FLT1 signalling in metastasis-associated macrophages activates an inflammatory signature that promotes breast cancer metastasis. J Exp Med. 212 (9), 1433-1448 (2015).
- Verkooijen, H. M., et al. Patients' refusal of surgery strongly impairs cancer survival. Ann Surg. 242 (2), 276-280 (2005).
- Peinado, H., et al. Pre-metastatic niches: organ-specific homes for metastasis. Nat Rev Cancer. 17 (5), 302-317 (2017).
