Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Developmental Biology

Социальный стресс-тест измененного уровня для уязвимых мексиканских американских подростков

Published: July 10, 2017 doi: 10.3791/55393

Summary

Здесь мы представляем протокол, который вызывал реактивность кортизола в уязвимом подростковом мексиканском американском образце с использованием модифицированной версии социального стресс-теста Триера (TSST). Образцы слюны были собраны на начальном этапе, 15, 30 и 45 минут после начала TSST. Будущие исследования могут использовать этот модифицированный TSST с уязвимой молодежью.

Abstract

Социальный стресс-тест Триера (TSST) является хорошо подтвержденным и широко распространенным социальным стрессором, который, как было показано, вызывает увеличение кортизола в 2-4 раза, биологический выход, продуцируемый осью гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой (HPA) у людей. Хотя исследования изучали, как изменения TSST влияют на стресс-реакцию, в немногих исследованиях был создан модифицированный TSST, подходящий для уязвимой молодежи, который вызывает значительную реакцию стресса кортизола. Таким образом, в текущем исследовании было предложено модифицировать или корректировать TSST в культурном отношении для уязвимого образца 14-летних подростков. Настоящее исследование имело место в контексте продольного когортного исследования мексиканских американских семей в Калифорнии, называемого Центром оценки состояния здоровья матерей и детей Салины (CHAMACOS). Образец CHAMACOS был оптимальным для проверки эффективности модифицированного культурно-подходящего TSST, так как он состоит из мексиканской американской молодежи, которыеДесять исключены из исследования. Эти молодые люди также испытали значительные трудности в ранней жизни. Примерные модификации включали приуроченные подсказки, альтернативные математические задачи, использование одноэтничных сверстников в качестве конфедератов, дебрифинг сразу после завершения TSST и использование неизвестного молодого экзаменатора для администрирования опроса. Образцы слюны собирали на базовом уровне (после фазы отдыха), а затем снова на 15, 30 и 45 минут после начала TSST для оценки концентрации кортизола. Экспериментальное исследование 50 участников (50% женщин) было проанализировано на реакцию кортизола на TSST. Результаты подтвердили, что эта модифицированная версия TSST была успешной при выявлении значительной реакции кортизола с широким диапазоном вариабельности, вероятно, из-за индивидуальных различий. Обсуждаются цели изменений и соображения этнической принадлежности. Это исследование дает основание для будущих исследований использовать модифицированный TSST с уязвимой молодежью.

Introduction

Третий социальный стресс-тест (TSST) 1 стал золотым стандартом для стимуляции стресса в лабораторных условиях 2 . Показано, что это хорошо подтвержденный и широко используемый социальный стресс, который, как было показано, вызывает увеличение кортизола в 2-4 раза, биологический выход, продуцируемый осью 1 , 3 гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой (HPA). Мета-анализ пришел к выводу о том, что два ключевых аспекта являются неотъемлемой частью для создания наиболее устойчивой реактивности HPA на протяжении всей жизни: непредсказуемость / неконтролируемость и социальная оценочная угроза (SET), которые характеризуют TSST 3 .

Подростковый возраст может быть ключевым периодом времени, когда СЕТ является особенно напряженным, отмеченным чувствительным периодом развития, благодаря чему социальные взаимодействия облегчают обучение 4 . Например, во время раннего полового созревания и юности интеграция с группой сверстников S становится мотивировочным. 5 . Быстрое повышение уровня гормонов в начале полового созревания влияет на развитие лимбических схем, что приводит к увеличению обработки статусных социальных стимулов ( то есть восхищение) как увеличению мотивационной значимости 6 . Это увеличение социальной аффективной активности не только влияет на мотивацию и поведение в данный момент, но также влияет на модели поведения и мотивационное обучение на длительные интервалы. Со временем это изменение приоритетности социальных стимулов может привести к разведке и риску здоровья, что может способствовать социальному и аффективному обучению и навыкам, которые лежат в основе социального функционирования взрослых. Таким образом, неудивительно, что аспекты социального функционирования, участвующие в речевой фазе TSST, являются мощной формой стресса для подростков, то есть темы «хорошего друга» 7 , 8 ,Ref "> 9. Однако люди, сенсибилизированные историей травм или стрессовых жизненных событий, могут быть запущены, чтобы плохо реагировать на социально-оценочные или непредсказуемые ситуации из-за плохого эмоционального контроля или усиленной чувствительности к стрессу, и эта картина отрицательного ответа может способствовать Отрицательные здоровые результаты, такие как употребление наркотиков или опасный поиск острых ощущений. Таким образом, понимание биологических реакций на SET имеет первостепенное значение для уязвимой молодежи.

В нескольких исследованиях изучалось, как вариации SET и неконтролируемости влияют на стресс-реакцию. SET может быть увеличено или уменьшено в зависимости от количества судей-конфедератов. TSST требует 2 конфедератов, но он более эффективен с четырьмя 10 и менее эффективен с 1 - 2 конфедератами 11 , 12 , 13 или с виртуальной или отдаленной аудиторией 14 , , 16 . Добавление большего количества негативных комментариев возрастает на уровне SET и респондентов 11 , 17 , тогда как положительный комментарий уменьшает ставки SET и респондента 18 . На уровень чувствительности влияет изменение неконтролируемости: (а) изменение продолжительности времени участники должны подготовить речь 14 (b) увеличить психосоциальные ресурсы участников 19 , 20 , 21 или (c) повысить уверенность TSST 22 . Модификации, которые усиливают подавление эмоций 23 , бдительность или внимание к стрессору 24 , 25 или мысли о себе, все увеличивают чувствительность TSST. Наконец, пол и возрастФедерал может влиять на реактивность стресса на SET 27 , 28 . Эти исследования показывают, что показатели чувствительности могут быть экспериментально увеличены или уменьшены. В текущем исследовании TSST был изменен путем включения срочных подсказок, альтернативных математических задач, использования одноэтничных сверстников в качестве конфедератов, дебрифинга сразу после завершения TSST и использования неизвестного экзаменатора для управления процессом опроса.

Недавний обзор парадигм стресса продемонстрировал особенно сильное воздействие социальной оценочной угрозы на повышение кортизола (ответ HPA) во время среднего подросткового возраста 29 . Тем не менее, существуют веские опасения по поводу использования TSST с уязвимой молодежью. В частности, проблемы защиты людей могут быть подняты для обеспечения того, чтобы выгоды перевешивали риски, так как существует потенциальная травма, связанная с переносом TSST, когда молодежь уже уязвима ( например, 30 , 31 . Кроме того, возможно, потребуется внести изменения, чтобы сделать TSST более культурно чувствительным и подходящим. Например, существует литература, которая предполагает, что взаимодействие с людьми разных рас может вызвать реакции стресса и угрозы 32 . Было показано, что разница в расовом составе участника и комитета TSST не влияет на реактивность кортизола на TSST 33 , а скорее на имплантациюВызывают восстановление кортизола из TSST 34 . Таким образом, использование одноранговых / этнических конфедератов для TSST может устранить любую ненужную путаницу гонки конфедератов по предполагаемой угрозе стереотипов и восстановлению кортизола из TSST.

Настоящее исследование имело место в контексте продольного когортного исследования мексиканских американских семей в Калифорнии, называемого Центром оценки состояния здоровья матерей и детей Салины (CHAMACOS). Этот образец характеризуется как очень уязвимый из-за высокого уровня бедности (76% семей были на уровне или ниже федерального уровня бедности) и большого количества неблагоприятных ранних событий жизни (среднее количество событий жизни = 4,5 для выборки, SD = 3.3). Для сравнения, большое ретроспективное исследование, проведенное партнерством между Центрами США по контролю и профилактике заболеваний и Kaiser Permanente на основе тысяч или респондентов, показало, что только 13% сообщили о 4 или более неблагоприятных циСобытия ldhood 35 .

TSST было проведено для молодежи в этом исследовании в рамках гранта NIH, направленного на исследование взаимосвязи между неблагоприятными событиями ранней жизни, биологической реактивностью к социальной оценочной угрозе в возрасте 14 лет (при администрировании TSST) и рискованным поведением (В возрасте 16 лет, сбор данных все еще продолжается, grant1R01DA035300). На ранних этапах пилотирования TSST мы заметили, что подход необходимо сместить, чтобы он стал контекстно-зависимым к уникальным потребностям этого населения и смягчил плохие ответы ( то есть , плакал, злился, разъединялся с TSST). Если быть точным, у нас был 20% -ный уровень плохой поведенческой реакции на TSST до внесения изменений ( т. Е. 4 из 20 участников TSST либо кричали, либо реагировали с гневом), тогда как только 5% ответили слабыми ответами после того, как были внесены изменения. Исследовательский персонал также остро осознавал важность ретаВ молодости в этом продольном исследовании. Следует отметить, что на пилотном этапе лица, которые ответили на ТССТ с реакциями на экстремальные стрессы поведенчески во время разбора, были на биологическом уровне «не ответившими», т. Е. Не демонстрировали роста кортизола. Это эмоциональное / биологическое сопоставление от этих первоначальных результатов также подчеркнуло необходимость изменения TSST для создания оптимальных условий для побуждения к соответствующей биологической реакции на TSST. Таким образом, это исследование дает предварительные данные из подвыборки молодости об эффективности модифицированного TSST для индукции реактивности кортизола.

Protocol

Это исследование было одобрено Советом по институциональному обзору из Калифорнийского университета, Беркли и Калифорнийского университета в Сан-Франциско. Участники должны были прибыть в лабораторию между 4: 30-5: 00 PM.

1. Промыть рот

  1. Попросите участника пойти в туалет и промойте рот только водой. Попросите участника закинуть холодной водой в течение 5-10 с и плюнуть в раковину. Сделайте это только один раз.
  2. Скажите участнику: «Это нужно, чтобы в ваших зубах не было еды или крошек для сбора слюны».

2. Период отдыха

  1. Участвуйте в одиночной комнате и позволяйте им сидеть не менее 10 минут. Попросите участника заполнить неинвазивные или не провоцирующие вопросники, такие как контактный информационный листок и ежедневные опросные листы, а также посмотреть трехминутное видеоролик о морской жизни.

3. Коллекция слюны № 1 (Pповторный стресс)

  1. Поместите линию, чтобы указать 1 мл слюны на криолиальную 2 мл, и сообщите участнику заполнить криолиальную линию этой линии. Соберите слюну участника через пассивную слюни через двухдюймовую соломинку в 2-миллилитровую криовиальную 36 и немедленно замораживайте (-80 ° C).
  2. Скажите участнику: « Я попрошу вас заполнить этот флакон слюной вплоть до этой линии. Способ сделать это - позволить слюне собираться во рту, а затем позволить ей пробежать солому во флаконе. Лучше всего, если вы Не плюйте, потому что у вас есть пузыри в вашем образце - просто дайте слюне пробежать по соломе. Это поможет, если вы не будете говорить, пока вы это делаете. Пожалуйста, постарайтесь не кашлять с мокротой, мы просто хотим нормальной слюны Следите за своим флаконом на слюну и насколько она полна. Если в верхней части слюны есть пузыри, они должны пройти по линии, так что есть только жидкая слюна вплоть до линии. Скажите мне, когда она заполняется К линии.Некоторые фотографии еды, размещенные на стене (POINT OUT PICTURES), так как размышление о любимых продуктах заставляет народы глотать воду ».
  3. Предложите воду после того, как участник завершил пробу слюны. Не позволяйте участнику поддерживать воду; Верните его, когда он / она закончит.

4. Период подготовки

  1. Скажите участнику: «Через несколько минут мы хотели бы, чтобы вы дали пятиминутную речь о том, как вы хороший друг. Существует комитет двух обученных рецензентов, которые находятся в соседней комнате, которые будут слушать К вашей речи. Ваша задача - заставить рецензентов полагать, что вы хороший друг. Они хотят, чтобы вы объяснили, что делает вас хорошим другом для других. Вы конкурируете с множеством других людей за то, насколько вы хороши Ваша речь и убеждающие люди, что вы хороший друг. Рецензенты - эксперты в оценке выражения лица и движения тела, и они собираютсяРасскажите о своей речи другим людям в кабинете. Вы можете заметить, что рецензенты делают заметки. Это значит, что мы можем просмотреть их заметки позднее. Вы также будете сниматься на видео, чтобы мы могли оценить вашу производительность позже.

    У вас будет 3 минуты, чтобы подготовиться к вашей речи. Помните, ваша речь должна объяснить, что именно вы делаете, что делает вас хорошим другом, и вы конкурируете с другими людьми за то, насколько вы правдоподобны. После этого я отведу вас в следующую комнату, где вы представитесь рецензентам и дадите свою 5-минутную речь. Будет еще одна задача, которая возникнет после речи, но рецензенты расскажут вам, что стоит за речью. У вас есть вопросы? Вы можете писать заметки, если хотите, но вы не сможете забрать их в комнату вместе с вами. Хорошо, начните готовиться. Я вернусь через несколько минут.
  2. Ручная бумага участника, ручка и буфер обмена, чтобы они могли делать заметки.
  3. Оставьте участника в покое.
  4. Подождите 3 минуты, а затем вернитесь в комнату.

5. Настройка TSST

  1. Скажите участнику: «Ладно, пришло время идти по соседству и начать». Если участник записал заметки, возьмите их у участника. Скажи: « Я могу взять их у тебя сейчас. Спасибо.»
  2. Пройдите участника в комнату TSST и укажите, что они должны встретиться с конфедератами и видеокамерой.
  3. Начните запись видео до того, как участник войдет в комнату. Запишите все речевые и математические задачи (приблизительно 10 минут).
  4. Попросите молодежного интервьюера представить комитет. «Это is_ (имя участника) _. _ (Участник) _, вы знаете любого из этих людей?»
    1. Если участник ответит «нет», попросите молодежного интервьюера «Хорошо, вы можете начать».
    2. Если участник отвечает да, hAve Участник указывает, кого он / она знает, и попросите Молодого Интервьюера сказать «Ладно, _ (конфедерация) __, пожалуйста, извините себя. Судьи должны быть людьми, которые вас не знают ».

6. Задача речи TSST

  1. Пусть Конфедерация 1 скажет: « Пожалуйста, расскажите нам, почему вы хороший друг. Начните говорить сейчас ».
  2. Установите таймер на 5 мин. Таймер запуска.
  3. После 30 секунд молчания используйте одно из следующих приглашений, чтобы поговорить с участником. Используйте подсказки в порядке каждый раз, когда есть пауза в 30 секунд.
    1. Скажите: «У вас еще есть время, пожалуйста, продолжайте».
    2. Скажи: «Почему еще ты хороший друг?»
    3. Скажите «Пожалуйста, приведите пример, когда вы были хорошим другом».
    4. Скажи: «Будь такой креативный, как хочешь. Зачем ты хороший друг?»
    5. После того, как все приведенные выше подсказки были использованы, продолжитеПродолжайте: «У вас еще есть время. Пожалуйста, продолжайте».
  4. Через 5 минут, если Конфедерация 1 скажет: «Пожалуйста, остановитесь. Время ваше». (Переходите к математической задаче.)

7. Задача TSST Math

  1. Пусть Конфедерация 1 скажет: «Мы сейчас попросим вас посчитать в обратном направлении. Начните с 423 и отсчитайте назад на 7. Продолжайте считать назад 7 вслух, пока мы не скажем вам остановиться. Если вы допустили ошибку, мы Сообщит вам об этом и попросит вас начать все заново. Пожалуйста, будьте как можно быстрее и точнее. Теперь мы хотели бы, чтобы вы начали отсчет назад - начинайте с 423 и вычтите 7. Продолжайте вычитать 7 вслух, пока мы не скажем вам остановиться. "
  2. Установите таймер на 5 мин. Таймер запуска.
  3. Если участник выглядит смущенным, попросите Конфедерата 1 сказать: «Хочешь, чтобы я повторил это?»
  4. Если участник совершит ошибку, попросите Конфедерата 1 сказать: «Это»,S неверно. Пожалуйста, начните снова. 423 минус 7. "
  5. Если участник не начнет считать громким через 30 секунд, перейдите к следующей более простой математической проблеме, используя те же инструкции, что и выше, с теми же подсказками.
  6. Используйте следующее, поскольку более простые математические проблемы включают (в этом порядке):
    423 - 5 =?
    95 - 5 =?
    66 - 3 =?
    6 + 3 =?
  7. Если участник останавливается после каждого правильного ответа, чтобы ждать подтверждения, попросите Confederate 1 сказать: «Продолжайте считать назад на 7. Мы исправим вас, только если вы допустите ошибку, иначе продолжайте движение ».
  8. Через 5 минут, Confederate 1 скажите: «Время вверх. Пожалуйста, пойдите рядом, чтобы дать следующий образец слюны».
  9. Сопровождайте участника обратно в одиночную комнату.

8. Протокол остановки

  1. Уполномочивайте обоих конфедератов, чтобы остановить протокол раньше. Перед тем как сделать это, оба конфедерата не обязаны консультироваться друг с другом.
  2. ЕслиУчастник плачет или кажется слезливым, становится явно злым или агрессивным или иным образом проявляет дискомфорт, или если участник начинает осанки таким образом, чтобы он выглядел агрессивным или нечетным, немедленно прекратите протокол, но, как обычно, насколько это возможно.
  3. Скажите: « Время вверх. Пожалуйста, пойдите рядом, чтобы дать следующий образец слюны ».
  4. Прямой участник в следующую комнату.

9. Образец слюны № 2 (15 минут после начала стрессора)

  1. Когда молодежь снова входит в следующую комнату, установите таймер на 15 мин.
  2. Скажите участнику: «Это самая сложная часть вашего визита, спасибо за это, и мы поговорим об этом через секунду. Пришло время собирать еще одну слюну».
  3. Если участник упоминает TSST, скажите участнику: «Мы можем поговорить об этом через минуту, но сначала попробуйте образец слюны.
  4. Поместите линию, чтобы указать 1 мл слюны на криолиальную 2 мл, и скажите парЧтобы заполнить криовию этой линии. Соберите слюну участника через пассивную слюни через двухдюймовую соломинку в 2-миллилитровую криовиальную 36 и немедленно замораживайте (-80 ° C).
  5. Предложите воду, чтобы выпить после того, как участник завершил пробу слюны. Не позволяйте участнику поддерживать воду; Верните его, когда он / она закончит.

10. Подведение итогов

  1. Скажите участнику: «Хорошо, давайте поговорим о речевой и математической деятельности. Возможно, вы уже догадались об этом, но вся цель этих действий заключалась в создании стресса. Возможно, вы заметили, что« рецензенты »были не совсем дружелюбны В мире, не так ли? "

    «Прежде всего, я хочу сказать вам, что« рецензенты »- это просто ассистенты-исследователи. Их работа заключается в том, чтобы подростки проводили мероприятия, но не давали никаких положительных отзывов независимо от того, насколько вы здоровы. Поэтому их поведение тамНе имеет ничего общего с вашей работой по этим задачам - они действуют одинаково с каждым участником, с которым они встречаются. "

    «Вы, наверное, задаетесь вопросом, почему мы это сделали. У нас была научная причина для этого. Мы изучаем, влияет ли количество стресса, которое вы испытываете в своей повседневной жизни, на то, насколько сильно вы реагируете на стрессовую ситуацию, подобную этой. Исследование должно понять, почему подростки по-разному реагируют на стресс. Мы измеряли что-то, называемое кортизолом в ваших образцах слюны, как способ увидеть ваш ответ на стресс ».

    «Если вы обнаружили, что речь и математика стрессовые, вы не одиноки! Мы решили делать речи и делать математику, потому что знаем, что, хотя они и безопасны, они очень нервничают. Позвольте мне сказать вам, мы Нужно было делать эти действия сами, и все мы находили это очень тяжелым! Даже ученые из Беркли испортили математику. И мы все говорили: «Это были долги10 минут моей жизни! Вы чувствовали себя так?

    «Еще несколько вещей, которые я хочу упомянуть ...»

    [IF VIDEOTAPED] «Мы сняли видеокассету по двум причинам: основная причина заключается в том, чтобы наши боссы могли убедиться, что WE работает правильно. В будущем мы также можем посмотреть видео, чтобы получить больше информации о выражениях лиц. Это просто еще один способ взглянуть на то, как подростки по-разному реагируют на стресс ».

    [ЕСЛИ НЕ ВИДЕОТОПЕДИРОВАНО] «Правда в том, что мы на самом деле не снимали на вас видео. Камера не была включена. Это была другая роль в действии, чтобы сделать ее более напряженной».

    «Люди там не писали записки о вашей работе, они просто писали бессмысленные ноты в рамках своей деятельности.

    «Мы хотели бы попросить вас не упоминать об этом мероприятии всем, кто может быть вИсследование, даже если они твой лучший друг, брат, сестра, кузен или что-то еще. Если другие люди узнают об этой деятельности до того, как они придут в гости, они могут практиковать свою речь дома или нервничать, прежде чем они даже придут сюда, и у них будет совершенно другой опыт, чем вы только что сделали. Мы не хотим, чтобы это произошло. Имеет ли это смысл? По той же причине, если вы поговорите с родителями об этом, попросите их не сообщать друзьям или родственникам в кабинете ».

    "У вас есть вопросы?"

11. Образец слюны № 3 (30 минут после начала стрессора)

  1. Поместите линию, чтобы указать 1 мл слюны на криолиальную 2 мл, и сообщите участнику, чтобы он заполнил криолиальную линию. Соберите слюну участника через пассивную слюни через двухдюймовую соломинку в 2-миллилитровую криовиальную 36 и немедленно замораживайте (-80 ° C).
  2. Установите таймер на 15 мин.
  3. Предложить воду для drinK после того, как участник завершил пробу слюны. Не позволяйте участнику поддерживать воду; Верните его, когда он / она закончит.

12. Образец слюны №4 (45 минут после начала стрессора)

  1. Поместите линию, чтобы указать 1 мл слюны на криолиальную 2 мл, и сообщите участнику, чтобы он заполнил криолиальную линию. Соберите слюну участника через пассивную слюни через двухдюймовую соломинку в 2-миллилитровую криовиальную 36 и немедленно замораживайте (-80 ° C).
  2. Предложите воду, чтобы выпить после того, как участник завершил пробу слюны. Не позволяйте участнику поддерживать воду; Верните его, когда он / она закончит.

Representative Results

Образец состоял из 14-летних, которые были частью богато охарактеризованного, установленного когортного исследования, Центра оценки здоровья матерей и детей Салины (CHAMACOS). Это исследование состоит из первой когорты из 325 мексиканских американских семей, живущих в сообществе фермеров в Калифорнии и последовавших за ней, поскольку они были в утробе. TSST не вводили во вторую когорту из CHAMACOS 300 детей, которых придерживались с 9-летнего возраста. Подростки проходили скрининг от участия в TSST, если их полномасштабный IQ был <70 от предыдущего посещения (возраст 12 лет), если у подростка когда-либо был диагностирован аутизм по материнскому отчету, если экстремальное атипичное поведение, проявленное в клинике при прошлых посещениях ( то есть выраженное Недоверие / паранойя об учебе, наблюдение за вещами или людьми, которых там нет - по материнскому отчёту), если оценка их депрессии была ≥3 SD выше среднего для возраста и пола, и если tОн подросток сообщил о причастности к групповому бою в предыдущем году. Эти критерии исключения были добавлены на основе чрезмерного ответа на TSST, но неясно, повлияли ли эти критерии исключения на окончательные результаты. Помимо этих критериев исключения, участники были зачислены независимо от их психологического и физического здоровья. В конце концов, 264 подростка полностью завершили TSST либо без проблем, либо без проблем до разбора. В таблице 1 указано количество участников, которые были исключены, и почему они были исключены. Не было никаких демографических различий между теми, кто закончил или не завершил TSST.

Образцы слюны хранили при -80 ° C до тех пор, пока они не были отправлены на сухой лед коллегам из Университета штата Айова ( т.е. лаборатория II уровня биобезопасности). По прибытии образцы замороженной слюны были каталогизированы и снова помещены в морозильную камеру -80 ° C. НаВ день анализа каждый образец слюны оттаивали и анализировали в течение 24 часов в двух экземплярах с использованием хорошо зарекомендовавших себя высокочувствительных наборов иммуноферментных ферментов. Средние коэффициенты вариации (CVs) внутри анализов были менее 2,25%, а среднее CV для сравнения - 5,13% для кортизола. Образец анализировали, если CV для повторных измерений превышала 7%.

Описательная статистика для измерений кортизола наряду со стандартными отклонениями по каждому образцу представлена ​​в таблице 2 и показана на рисунке 1 . Для проверки влияния секса на четыре образца слюны проводили 2 x 4 повторных измерения ANOVA. Был основной эффект для ответа кортизола на TSST ( F = 9,09, p <0,001), но пол не был значимым предиктором реакции кортизола на стресс ( F = 1,03, p = 0,39). Средний индекс массы тела составлял 23,53, а также не был значительным предиктором реплики( F = 1,03, p = 0,38). Как и следовало ожидать, спаренные t-тесты образцов (представленные в таблице 3 ) выявили значительные изменения в кортизоле от начала стресса до 15 минут после начала стрессора, с 15 минут после стрессового начала до 30 минут после стрессорного начала, и из 30 мин после стресса до 45 мин после стрессора. Наибольшее изменение кортизола наблюдалось при сравнении концентрации до начала стресса кортизола до 30-минутной концентрации после стрессора в соответствии с предшествующими исследованиями (Коэн d = 0,80) 1 , 3 . Лица, которые были отмечены как имеющие трудное время с TSST, как правило, сообщали о повышенной реактивности стресса к стрессору, но сообщали о возвращении в нормальное состояние до окончания исследования. Хотя 30-минутная концентрация после стрессора была самой высокой концентрацией из этих образцов, 45-минутная концентрация посткристалла в кортизоле после стресса подсказывает, что люди началиДля восстановления после стрессора, поскольку 45-минутная концентрация после стрессора была значительно ниже, чем 30-минутная концентрация (см. Таблицу 3 ).

Рисунок 1
Рисунок 1: Реакция кортизола на TSST. Показатели реактивности кортизола нанесены со стандартными отклонениями. Нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Таблица 1
Таблица 1: Причины исключения. Участники были исключены из исследования, если они начали TSST, но прекратили рано, отказались от участия, были исключены из проекта или были пропущены из-за проблем, связанных с проектом.


Таблица 2: Средние концентрации кортизола и стандартные отклонения. Кортизол увеличивался из образцов 1-3, а затем уменьшался по образцу 4.

Таблица 3
Таблица 3: Т-тесты парных образцов. Сравнивает образцы друг с другом в концентрации кортизола (мкг / дл) и стандартных отклонениях (SD) для изменения кортизола. Значительное увеличение кортизола наблюдалось от исходной выборки до постстрессовых образцов.

Discussion

В текущем исследовании была предпринята попытка подтвердить эффективность модифицированной версии TSST с уязвимой молодежью. Проект CHAMACOS представил оптимальную выборку для проверки эффективности модифицированного контекстно-зависимого TSST, поскольку он является уникальным (мексиканские американские образцы часто исключаются из исследования) и представляет собой образец молодежи, пережившей значительные трудности в ранней жизни 37 . Результаты подтверждают успех модифицированного TSST в провоцировании значительного увеличения кортизола от образцов до стресса до постстресса, а также нормального относительного восстановления из TSST к моменту, когда был собран последний пробу слюны. Это исследование представляет собой ценный инструмент для работы на местах с использованием как контекстно-зависимого протокола TSST, так и исследования факторов, влияющих на модификации исходного TSST.

Существует несколько критических шагов для настройки и администрирования TSSTКоторые должны быть учтены. Во-первых, обе конфедераты должны носить белые лабораторные халаты, сидеть за столом и записывать видеокамеры и указывать на то, где участник будет стоять перед тем, как участник войдет в комнату. Участник выступает на протяжении всего TSST, в то время как комитет сидит. Во-вторых, для каждого пола должно быть 1 конфедерация, и участники должны иметь сходную расу / этническую принадлежность для участника и появляться с аналогичным возрастом как участник (в этом исследовании использовалась немного старшая молодежь, которая была похожа на возраст участников ). В-третьих, конфедераты должны демонстрировать плоский аффект, с небольшой скукой по всему протоколу. Конфедераты должны смотреть на участника как можно больше, не проявляя интереса во время TSST. Confederate 2 пишет заметки, тогда как Confederate 1 отвечает за администрирование подсказок и инструкций.

Следует отметить, что проведение TSST в эмоциональном «нейтральном & #34; Государство принимает навыки и практику. Некоторые лица могут не соответствовать роли конфедератов, если они не могут поддерживать нейтральное лицо. Конфедераты в этом исследовании были выбраны вручную для того, чтобы поддерживать нейтральную позицию во время всего TSST. Однако, если участник становится слезливым, грустным или агрессивным, эти сотрудники должны знать, как и когда вмешаться, чтобы остановить протокол. Целостность TSST также должна периодически оцениваться на протяжении всего исследования, чтобы гарантировать, что в эмоциональном манере или сценарии нет дрейфа. В этом исследовании еженедельные проверки были предоставлены конфедератам, когда они смогли устранить любые необычные случаи с экспертами в администрации TSST и зарегистрироваться с вопросами. TSST «освежители» также предоставлялись каждые несколько месяцев для переподготовки конфедератов на TSST. Видеоролики были записаны во время TSST для участников, чьи матери предоставили согласие, и эти видео были просмотрены для обеспечения достоверности сценария TSST, Наконец, некоторые исследователи могут подумать, что участники, которые выразили предательство или гнев в ответ на TSST, будут иметь высокий ответ на кортизол. Однако это исследование исключило это понятие в данных, так как оказалось, что эти молодые люди, скорее всего, были не ответившими ( т.е. индивидуумы, кортизол которых либо уменьшался, либо оставался стабильным по всей задаче), что оценивалось по их реакциям кортизола. Таким образом, строгое соблюдение чувствительного протокола не подрывало общую частоту реактивности, а скорее обеспечивало, чтобы задача стрессора была титрована до соответствующего уровня для этой молодежи. Таким образом, стандартный протокол TSST был бы неуместным и этически, но также научно, поскольку истощение, неответность и «отказ от работы» были преобладающим ответом.

После запуска нескольких участников через исходный TSST исходный TSST был изменен, чтобы лучше соответствовать контекстуальным факторам этой совокупности из-за неоптимальной реакции( Т. Е. Плач, отстранение от задачи, агрессивное позывание). Исследовательский персонал консультировался с многочисленными исследователями, которые использовали TSST с уязвимыми группами населения ( например , детские дома, ювенальные юстиции, люди, подвергшиеся насилию), но ни одна из этих модификаций не соответствовала потребностям этого исследования - некоторые из них слишком сильно отклонялись от протокола, и мы были обеспокоены тем, что эти Изменения не вызвали бы ответ кортизола 12 , 27 . Таким образом, три основных модификации были применены к TSST в нашем исследовании, а модификации и мотивации для этих модификаций освещены ниже.

Во-первых, важно не отчуждать участников. Администрация стрессовой задачи была важна для этого исследования, однако было крайне важно, чтобы участники не потерялись до истощения, поскольку молодежь следовала в продольном направлении, так как их матери забеременели от них. В этом исследовании участниками были dПосле того, как TSST предоставил информацию, чтобы убедиться, что стресс прекратился для участников после завершения TSST. Для этого образца персонал, управляющий дебрифингом, должен был быть кем-то как можно более незнакомым, но все же эмпатическим, без эмоциональной связи с молодежью. Хотя это может показаться нелогичным, когда сотрудники, которые были знакомы и эмоционально связаны с молодежью, освещали их на TSST, молодежь имела тенденцию проявлять большую склонность к разгадке над TSST и больше об этом говорить, что иногда заканчивалось криком или чувством обиды К тому, чтобы быть «обманутым». Незнакомые сотрудники, проводящие дебрифинг, помогли обеспечить, чтобы мы не разорвали продольные связи, которые когорта сделала со знакомым персоналом, внедряя TSST. Это отмечено как важное в латиноамериканском сообществе, но это то, что следует учитывать во многих продольных исследованиях, которые вызывают сильную связь с участниками. Использование незнакомого стаFf также уменьшило вероятность того, что обследование помогло еще больше подчеркнуть молодость, учитывая более оптимальные поведенческие реакции, которые мы наблюдали с использованием незнакомого персонала. В то время как дебрифинг перед сбором еще двух образцов слюны может касаться исследователей, использующих эту модификацию, следует отметить, что в этом исследовании наблюдалась прототипная характеристика ответа кортизола после завершения TSST (с максимальной концентрацией, достигающей 15 минут после завершения стрессора , И восстановление через 30 мин после завершения стрессора). Эта модификация была сделана для того, чтобы быть более культурно чувствительной к молодежи, которая, возможно, продолжала испытывать стресс после TSST из-за их уязвимого состояния.

Во-вторых, протокол TSST должен быть гибким по отношению к отдельным факторам участника. Мексиканская американская молодежь в этом исследовании проживает в малообеспеченных и обедневших сельскохозяйственных сообществах в долине Салинас. Семьи CHAMACOS трудятся в трудных условияхУсловий, особенно низкой заработной платы, прерывистой сезонной занятости и продолжительных рабочих часов, которые обходят возможности для положительных семейных взаимодействий в период быстрого и значительного развития подростков. Стрессоры, связанные с низкой SES / бедностью в когорте, способствуют отсутствию продовольственной безопасности, переполненному жилью, некачественным условиям жизни и неадекватным медицинским услугам для решения проблем, связанных с когнитивными нарушениями и психическим здоровьем. Усугубляет это то, что молодежь в долине Салинас непропорционально подвержена семейным потрясениям и насилию среди молодежи, которые попадают в местные школы и районы. Эти факторы риска становятся все более акцентированными, поскольку молодежь либо учится адаптироваться к быстро меняющимся социальным и экономическим проблемам, либо постепенно становится сенсибилизированной (или в некоторых случаях десенсибилизированной) до непредсказуемого характера их повседневной жизни. Одним из примеров повышения TSST для этой группы населения было изменение сложности математического раздела. Учитывая, что эта стуDy был посвящен к предыдущему когнитивному тестированию и знал об экспоненциальном воздействии на окружающую среду, что может повлиять на IQ 38 , было ясно, что математическая задача «один размер подходит всем», обычно связанная с TSST, не собиралась вмещать эту популяцию. Следуя другим стрессорам 39 , 40 , математическая трудность была поэтому титрована, чтобы быть сложной, но не невозможной для молодежи.

В-третьих, протокол TSST должен признать и опираться на высокий уровень общения и социальной связи в определенных культурных условиях. Важно использовать конфедератов, с которыми связаны молодежные участники, поэтому в этом исследовании набирались конфедераты, которые были немного старше участников, чтобы проявлять сходный возраст и этническую принадлежность и происходили из одного и того же сообщества, поэтому СЕТ пришел из «своих сверстников». С другой стороны, слишком много социальной связи было проблематичным. Важно обеспечить, чтобыКонфедераты являются соответственно нейтральными и что участники конфедерации были неизвестны участникам. Это имело решающее значение для нынешнего исследования, потому что хотя Салинасская долина является относительно большим регионом, молодежное сообщество может быть очень маленьким и взаимосвязанным. Таким образом, может быть полезно обеспечить до того, как TSST начнет, чтобы участники и конфедераты не знали друг друга. Если участник или конфедерат признал другого в этом исследовании, TSST был запущен только с одним конфедератом. Тот факт, что конфедераты этого исследования пришли из одной и той же общины, важно отметить в этом контексте (Салинас), что далека от университетских условий и сложно найти сотрудников, которые могут работать час или два одновременно. Исследователи полевого отделения этого исследования были очень опытными и высококвалифицированными в области исследований, которые не должны восприниматься как должное в плане поддержания протокола.

Хотя эти результаты являются перспективными для проверки использования модифицированного TSSTС уязвимыми подростками требуется больше исследований для подтверждения воспроизводимости этих эффектов по различным образцам. Во-первых, хотя этому проекту повезло иметь доступ к такой уникальной и уязвимой выборке мексиканских американских подростков, эти результаты необходимо тиражировать в других уязвимых этнических группах, чтобы подтвердить, что этот модифицированный TSST является достаточно сильным, чтобы вызвать ответ кортизола в Другие популяции. Во-вторых, этот образец был ограничен 14-летними. В то время как узкая выборка, контролируемая для воздействия возраста на ответ TSST в этом образце, будущие исследования могут попытаться воспроизвести эти эффекты в разных подростковых и детских возрастов и, возможно, в пубертатном развитии. Наконец, следует отметить, что данные не собирались из группы сравнения с использованием немодифицированного TSST, так как было бы неэтично с этим образцом, учитывая высокий уровень слабых поведенческих и эмоциональных ответов, которые мы испытывали вначале с менее измененными Версия oF TSST.

Существуют также ограничения техники TSST в целом. Как упоминалось ранее, для единомышленников требуется значительная практика поддерживать нейтральную позицию на протяжении всего TSST. Для запуска TSST необходимо как минимум 3 человека (2 конфедерата и 1 экспериментатор), а TSST работает лучше, если эти люди неизвестны для участника. Таким образом, этот протокол легче запускать в университетских условиях колледжа, где студенты могут работать в лаборатории по 1-2 часа за один раз, но менее легко в удаленных настройках или в настройках, где конфедераты оплачиваются как работа (поскольку они оплачиваются только За 1 час работы за TSST). Этот метод также может быть препятствием для продольных исследований с персоналом, который работает над проектом с течением времени - этот известный персонал не должен быть тем, кто управляет TSST. Кроме того, существенные накладные расходы с точки зрения поддержания целостности TSST с течением времени - эксперты необходимы для просмотра видеолентыS TSST, поддерживать еженедельные проверки с участием конфедератов и предоставлять периодические «переподготовки» для обеспечения отсутствия дрейфа в технике. Кроме того, TSST трудно повторить для определенного участника, поскольку он полагается на незначительный обман, и участники могут привыкнуть к этой технике. Речевые и математические части не уравновешиваются, что было бы более оптимальным для других методологий, таких как функционирование автономной нервной системы. Для TSST нет частей, которые не являются стрессовыми, поэтому для проведения сравнения без стресса требуется другой сеанс ( т. Е. Дружественный TSST или плацебо TSST) или что-то еще ( то есть базальный день). Наконец, стресс-фактор, не основанный на лабораторных условиях, может быть более эффективным ( например , караоке, роликовые подставки или дома с привидениями) или более экологичным 41 .

Это исследование дает основание для будущих исследований использовать модифицированный TSST с уязвимой молодежью. Будущее продольноеИсследования, направленные на то, чтобы удержать участников во множестве волн сбора данных, также могут изменить их подход, используя некоторые из этих модификаций, чтобы ограничить потерю. Кроме того, это исследование показывает, что действительно возможно создать модифицированную версию TSST, которая чувствительна к культуре, но при этом титровать реактивность стресса на соответствующий уровень, чтобы фиксировать отдельные различия в чувствительности кортизола.

Acknowledgments

Авторы хотели бы поблагодарить родителей и подростков, которые участвовали в исследовании CHAMACOS. Мы также хотели бы поблагодарить персонал CHAMACOS, который работал над исследованием, особенно Кэтрин Когут, MS, за всю работу, которую она выполняла в качестве руководителя проекта для этого исследования. Авторы также хотели бы признать Национальный институт по борьбе со злоупотреблением наркотиками 1R01DA035300.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
TSST
2 white lab coats Dickies 83403 For confederates
2 clip boards Staples 21423 For confederates
2 pens BIC GSM609-Blk For confederates
Table Ikea B00EYU3E7I For confederates to sit behind
Video Camera & Tripod Sony K-86674-05
Paper  Generic For participant's preparation period
Saliva samples
Latex gloves Fisher Scientific 19041171C To collect saliva samples
2 mL cryovials Wheaton W985872-100 4 per participant
80 °C freezer So-Low U85-13
2'' straws  Genuine Joe GJO58925

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kirschbaum, C., Pirke, K. M., Hellhammer, D. H. The 'Trier Social Stress Test'--a tool for investigating psychobiological stress responses in a laboratory setting. Neuropsychobiology. 28 (1-2), 76-81 (1993).
  2. Yim, I. S., Quas, J. A., Rush, E. B., Granger, D. A., Skoluda, N. Experimental manipulation of the Trier Social Stress Test-Modified (TSST-M) to vary arousal across development. Psychoneuroendocrinology. 57, 61-71 (2015).
  3. Dickerson, S. S., Kemeny, M. E. Acute stressors and cortisol responses: a theoretical integration and synthesis of laboratory research. Psychol Bull. 130 (3), 355-391 (2004).
  4. Nelson, E. E., Leibenluft, E., McClure, E. B., Pine, D. S. The social re-orientation of adolescence: a neuroscience perspective on the process and its relation to psychopathology. Psychol Med. 35 (2), 163-174 (2005).
  5. Nelson, H. J., Kendall, G. E., Shields, L. Neurological and biological foundations of children's social and emotional development: an integrated literature review. J Sch Nurs. 30 (4), 240-250 (2014).
  6. Crone, E. A., Dahl, R. Understanding adolescence as a period of social-affective engagement and goal flexibility. Nature. 13, 636-650 (2012).
  7. Rith-Najarian, L. R., McLaughlin, K. A., Sheridan, M. A., Nock, M. K. The biopsychosocial model of stress in adolescence: self-awareness of performance versus stress reactivity. Stress. 17 (2), Amsterdam, Netherlands. 193-203 (2014).
  8. Ho, S. S., Konrath, S., Brown, S., Swain, J. E. Empathy and Stress Related Neural Responses in Maternal Decision Making. Front Neuro. 8, (2014).
  9. Wager, T. D., et al. Brain mediators of cardiovascular responses to social threat: Part I: Reciprocal dorsal and ventral sub-regions of the medial prefrontal cortex and heart-rate reactivity. NeuroImage. 47 (3), 821-835 (2009).
  10. Bosch, J. A., et al. A general enhancement of autonomic and cortisol responses during social evaluative threat. Psychosom Med. 71 (8), 877-885 (2009).
  11. Dickerson, S. S., Mycek, P. J., Zaldivar, F. Negative social evaluation, but not mere social presence, elicits cortisol responses to a laboratory stressor task. Health Psychol. 27 (1), 116-121 (2008).
  12. Het, S., Rohleder, N., Schoofs, D., Kirschbaum, C., Wolf, O. T. Neuroendocrine and psychometric evaluation of a placebo version of the 'Trier Social Stress Test'. Psychoneuroendocrinology. 34 (7), 1075-1086 (2009).
  13. Bouma, E. M., Riese, H., Ormel, J., Verhulst, F. C., Oldehinkel, A. J. Adolescents' cortisol responses to awakening and social stress; effects of gender, menstrual phase and oral contraceptives. The TRAILS study. Psychoneuroendocrinology. 34 (6), 884-893 (2009).
  14. Westenberg, P. M., et al. A prepared speech in front of a pre-recorded audience: subjective, physiological, and neuroendocrine responses to the Leiden Public Speaking Task. Biol Psychol. 82 (2), 116-124 (2009).
  15. Kelly, O., Matheson, K., Martinez, A., Merali, Z., Anisman, H. Psychosocial stress evoked by a virtual audience: relation to neuroendocrine activity. Cyberpsychol Behav. 10 (5), 655-662 (2007).
  16. Wadiwalla, M., et al. Effects of manipulating the amount of social-evaluative threat on the cortisol stress response in young healthy women. Stress. 13 (3), 214-220 (2010).
  17. Schwabe, L., Haddad, L., Schachinger, H. HPA axis activation by a socially evaluated cold-pressor test. Psychoneuroendocrinology. , (2008).
  18. Taylor, S. E., et al. Effects of a supportive or an unsupportive audience on biological and psychological responses to stress. J Pers Soc Psychol. 98 (1), 47-56 (2010).
  19. Taylor, S. E., et al. Neural bases of moderation of cortisol stress responses by psychosocial resources. J Pers Soc Psychol. 95 (1), 197-211 (2008).
  20. Britton, W. B., Shahar, B., Szepsenwol, O., Jacobs, W. J. Mindfulness-based cognitive therapy improves emotional reactivity to social stress: results from a randomized controlled trial. Behav Ther. 43 (2), 365-380 (2012).
  21. Brown, K. W., Weinstein, N., Creswell, J. D. Trait mindfulness modulates neuroendocrine and affective responses to social evaluative threat. Psychoneuroendocrinology. 37 (12), 2037-2041 (2012).
  22. Creswell, J. D., et al. Affirmation of personal values buffers neuroendocrine and psychological stress responses. Psychol Sci. 16 (11), 846-851 (2005).
  23. Lam, S., Dickerson, S. S., Zoccola, P. M., Zaldivar, F. Emotion regulation and cortisol reactivity to a social-evaluative speech task. Psychoneuroendocrinology. 34 (9), 1355-1362 (2009).
  24. Pilgrim, K., Marin, M. F., Lupien, S. J. Attentional orienting toward social stress stimuli predicts increased cortisol responsivity to psychosocial stress irrespective of the early socioeconomic status. Psychoneuroendocrinology. 35 (4), 588-595 (2009).
  25. Cavanagh, J. F., Allen, J. J. Multiple aspects of the stress response under social evaluative threat: an electrophysiological investigation. Psychoneuroendocrinology. 33 (1), 41-53 (2008).
  26. Denson, T. F., Fabiansson, E. C., Creswell, J. D., Pedersen, W. C. Experimental effects of rumination styles on salivary cortisol responses. Motivation Emotion. 33, 42-48 (2009).
  27. Wiemers, U. S., Schoofs, D., Wolf, O. T. A friendly version of the trier social stress test does not activate the HPA axis in healthy men and women. Stress. 16 (2), 254-260 (2013).
  28. Halpern, C. T., Campbell, B., Agnew, C. R., Thompson, V., Udry, J. R. Associations between stress reactivity and sexual and nonsexual risk taking in young adult human males. Horm Behav. 42 (4), 387-398 (2002).
  29. Gunnar, M. R., Talge, N. M., Herrera, A. Stressor paradigms in developmental studies: what does and does not work to produce mean increases in salivary cortisol. Psychoneuroendocrinology. 34 (7), 953-967 (2009).
  30. Gunnar, M. R., Frenn, K., Wewerka, S. S., Van Ryzin, M. J. Moderate versus severe early life stress: associations with stress reactivity and regulation in 10-12-year-old children. Psychoneuroendocrinology. 34 (1), 62-75 (2009).
  31. Martel, F. L., et al. Salivary cortisol levels in socially phobic adolescent girls. Depress Anxiety. 10 (1), 25-27 (1999).
  32. Mendes, W. B., Blascovich, J., Lickel, B., Hunter, S. Challenge and threat during social interactions with white and black men. Pers Soc Psychol Bull. 28 (7), 939-952 (2002).
  33. Mendes, W. B., Gray, H. M., Mendoza-Denton, R., Major, B., Epel, E. S. Why egalitarianism might be good for your health: physiological thriving during stressful intergroup encounters. Psychol Sci. 18 (11), 991-998 (2007).
  34. Page-Gould, E., Mendoza-Denton, R., Tropp, L. R. With a little help from my cross-group friend: reducing anxiety in intergroup contexts through cross-group friendship. J Pers Soc Psychol. 95 (5), 1080-1094 (2008).
  35. Felitti, V. J., et al. Relationship of childhood abuse and household dysfunction to many of the leading causes of death in adults. The Adverse Childhood Experiences (ACE) Study. Am J Prev Med. 14 (4), 245-258 (1998).
  36. Schwartz, E. B., Granger, D. A., Susman, E. J., Gunnar, M. R., Laird, B. Assessing salivary cortisol in studies of child development. Child Dev. 69 (6), 1503-1513 (1998).
  37. Alkon, A., et al. Prenatal adversities and Latino children's autonomic nervous system reactivity trajectories from 6 months to 5 years of age. PLoS One. 9 (1), e86283 (2014).
  38. Bouchard, M. F., et al. Prenatal exposure to organophosphate pesticides and IQ in 7-year-old children. Environ Health Perspect. 119 (8), 1189-1195 (2011).
  39. Pruessner, J. C., et al. Stress regulation in the central nervous system: evidence from structural and functional neuroimaging studies in human populations - 2008 Curt Richter Award Winner. Psychoneuroendocrinology. 35 (1), 179-191 (2010).
  40. Dedovic, K., et al. The Montreal Imaging Stress Task: using functional imaging to investigate the effects of perceiving and processing psychosocial stress in the human brain. J Psychiatry Neurosci. 30 (5), 319-325 (2005).
  41. Shirtcliff, E. A., Peres, J. C., Dismukes, A. R., Lee, Y., Phan, J. M. Riding the physiological roller coaster: Adaptive significance of cortisol stress reactivity to social contexts. J Pers Disord. 28 (1), 65-76 (2014).

Tags

Биология развития выпуск 125 TSST стресс молодежь подростки кортизол мексиканская американка
Социальный стресс-тест измененного уровня для уязвимых мексиканских американских подростков
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Johnson, M. M., Deardorff, J.,More

Johnson, M. M., Deardorff, J., Parra, K., Alkon, A., Eskenazi, B., Shirtcliff, E. A Modified Trier Social Stress Test for Vulnerable Mexican American Adolescents. J. Vis. Exp. (125), e55393, doi:10.3791/55393 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter