Summary
Kısa süreli direnç eğitiminin yaşlı insanlara etkisi, çeşitli yöntemlerin eşzamanlı kullanımı yoluyla araştırılmıştır. Bir kontrol grubuyla kıyaslandığında, kas aerobik kapasitesi, glikoz toleransı, mukavemet, güç ve kas kalitesi ( yani, hücre sinyallemesinde ve kas lifi tipli kompozisyonda yer alan protein) de dahil olmak üzere birçok iyileşme görülmüştür.
Abstract
Bu protokol, kısa süreli direnç eğitimi (RET) gerçekleştiren yaşlı insanlarda kas aerobik kapasitesini, glukoz toleransını, gücünü ve gücünü incelemek için geniş çaplı yöntemlerin eşzamanlı kullanımını açıklamaktadır. RET katılımcıları tarafından haftada üç kez 8 hafta boyunca 1 saat süreyle denetlenen ilerleyici direnç eğitimi (71 ± 1 yıl, aralık 65-80) gerçekleştirildi. Eğitimsiz bir kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, RET, kuvvet, güç, glikoz toleransı ve kas aerobik kapasitesinin çeşitli parametrelerini belirtmek için kullanılan önlemlerin geliştirildiğini gösterdi. Güçlendirme eğitimi, yalnızca sağlam bir fitness aleti bulunan bir spor salonunda yapıldı. Diz ekstansör kuvvet için bir izokinetik dinamometre, konsantre, eksantrik ve statik mukavemetin ölçülmesine izin verdi ve RET grubu için arttı (ön test karşısında% 8-12). Başlangıçtaki 0-30 ms'deki güç (kuvvet geliştirme hızı, RFD) de RET grubunda (% 52) bir artış gösterdi. Bir glikoz tolerans testi ile sıklıkKan glikozu ölçümleri, 2 saat sonra (% 14) ve eğri altındaki alanda (% 21) kan glikozu değerleri açısından RET grubunda yalnızca iyileşme gösterdi. Kan lipid profili de gelişti (% 8). Histokimyayı kullanarak hazırlanan kas biyopsilerinden lif türü IIa miktarı artmış ve RET grubunda IIx'de bir düşüş eğilimi, lif kompozisyonu açısından daha oksidatif bir profile yapılan bir değişimi yansıtıyordu. Batılı leke (kas protein sentezi için sinyalleme ile ilgili protein içeriğini belirlemek için) Akt ve mTOR'da RET grubunda% 69'luk bir artış gösterdi; OXPHOS kompleksi II ve sitrat sintazı (her ikisi de ~% 30) için ve sadece RET grubunda kompleks IV (% 90) için mitokondriyal proteinlerde bir artış gösterdi. Bu tür ilerleyici direnç eğitiminin çeşitli gelişmeler ( örneğin, güç, güç, aerobik kapasite, glukoz toleransı ve plazma lipid profili) sunduğunu gösteriyoruz.
Introduction
Yaşlanma, kas kütlesi (sarkopeni), güç ve güç kaybıyla ilişkilidir. Azaltılmış güç ve muhtemelen daha da önemlisi güç, hareketsizlik, artmış bir yaralanma riski ve düşük bir yaşam kalitesi ile sonuçlanır. Direnç eğitimi, sarkopeni ve kas işlevini kötüleştiren iyi bilinen bir stratejidir. Başarılı tekrarların yükünden veya sayısından kaba bir kas kuvveti tahmini elde edilebilir. Bununla birlikte bu çalışma, izometrik, konsantrik ve eksantrik kasılma sırasında tork üzerine bilgi toplamak ve kuvvet gelişiminin kinetiği hakkında izokinetik bir dinamometre kullanarak kas fonksiyonu hakkında daha detaylı ve doğru bilgi elde etmiştir.
Hem tüm vücut seviyesindeki (VO 2max ) hem de iskelet kasında aerobik kapasite, yaşlı insanlarda azalır. Yaşla birlikte kalp atım hızındaki azalma, VO 2max 1'deki azalmanın büyük bir bölümünü açıklamaktadır, ancak azaltılmış musKuvvetli oksidatif kapasite, azalmış fiziksel aktivite 2 ile büyük oranda ilişkili, katkıda bulunuyor. Bozulmuş mitokondriyal fonksiyon da sarkopeninin ve insülin direncinin gelişmesinde rol oynayabilir 3 . Kas aerobik kapasitesi, kas biyopsilerinde hem matriksteki ( yani sitrat sintazı) hem de mitokondriyal membranda bulunan mitokondriyal enzimlerin ve protein komplekslerinin içeriğinin biyokimyasal analizleri ile değerlendirildi. Buna ek olarak, histokimyasal teknikler direnç eğitiminin kas morfolojisi üzerindeki etkisini ölçmek için kullanıldı ( örn. Lif türü bileşim, lif kesit alanı ve kılcal yoğunluk). Kas aerobik kapasitesini değerlendirmek için alternatif bir yöntem, egzersiz kaynaklı tükenme sonrasında kreatin fosfat resynthesis oranını ölçmek için manyetik rezonans spektroskopisini kullanmak olacaktır 4 . Bu yöntem in vivo kas aerobik kapasitesinin bir tahmini sağlarAncak mitokondriyal disfonksiyon ve dolaşım bozuklukları arasında ayrım yapamaz. Üstelik, teçhizatın yüksek maliyetleri, bu tekniği çoğu laboratuarda sınırlar. Aerobik kapasite (VO 2max ve mitokondriyal yoğunluk), hem genç hem yaşlı insanlarda dayanıklılık egzersiziyle iyileştirilebilir 5 , 6 . Bununla birlikte, direnç eğitiminin bu parametrelere etkisi, özellikle yaşlı bireylerde daha az araştırılmıştır ve sonuçlar 7 , 8 , 9 , 10 ile çelişkilidir.
Tip 2 diyabet, yaşlı nüfusta yaygın bir hastalıktır. Fiziksel hareketsizlik ve obezite, tip 2 diyabet insidansının arttığını açıklayan yaşam tarzıyla ilgili önemli faktörlerdir. Düşük yoğunluklu aerobik egzersiz genellikle glukoz toleransında azalma olan kişilere önerilir. Ancak, uncÖğrenmek yaşlı gç antrenmanının glukoz tolerans / insülin duyarlılığını nasıl etkilediğini 11,12. İnsülin duyarlılığını ölçmenin en doğru yolu, yüksek insülin koşulları sırasında glikoz infüzyonu ile kan glükozunun sabit tutulduğu glikoz kelepçesi tekniğini kullanmaktır13. Bu tekniğin dezavantajları, zaman alıcı ve invaziv (arteriyel kateterizasyon) olması ve özel laboratuvar imkânları gerektirmesidir. Bu çalışmada sağlık birimlerinde yaygın olan oral glikoz tolerans testi kullanılmıştır. Bu yöntem, birkaç konunun sınırlı bir süre araştırılması gerektiğinde uygundur.
Deneysel prosedürün test ve zaman çizelgesi aşağıdaki şekilde özetlenebilir. Aynı düzenleme ve yaklaşık zaman çizelgeleriyle (sekiz haftalık bir dönem öncesi ve sonrası test için üç ayrı gün kullanın (her gün arasındaki ≥24 saat, Strong> Şekil 1). İlk test gününde, yükseklik, vücut kütlesi, yağsız kütle (FFM) ve üst bacak çevresi ( örn. Rahat bir sırtüstü pozisyonda tepe patella'nın 15 cm üstünde) gibi antropometrik veriler; Submaksimal bisiklet kabiliyeti; Ve diz kaslarının kuvveti. 4. ve 5. basamaklarda açıklandığı gibi. İkinci test gününde uyluğun bir kas biyopsisi alın. Daha fazla açıklama için, adım 6.1'e bakın. Son test günü oral glikoz toleransını (OGTT) test edin. Diğer açıklamalar için, adım 7.1'e bakın. Tüm katılımcılardan, her test gününden önce 24 saat boyunca hızlı fiziksel aktiviteden kaçınmalarını isteyin. Bununla birlikte, OGTT test gününden 48 saat önce yorucu fiziksel aktivitelerden kaçmalarını isteyin. Normal günlük fiziksel aktivitelerini ve diyet alışkanlıklarını izlemelerini isteyin. Müdahale öncesi ve müdahale sonrası, her iki grubun kendi kendine bildirdiği besin alımının ve gıdaların türünün değişmediğini unutmayın.
Figimg "src =" / dosyalar / ftp_upload / 55518 / 55518fig1.jpg "/>
Şekil 1: Deneysel protokol. Şematik diyagram. Üç ön ve son test arasındaki zamanlama her bir hasta için benzerdi ve en az 24 saattir. Metinde daha ayrıntılı bilgiler verilmektedir. Bu rakam Frank ve ark. Scand. J. Med. Sci. Spor . 2016: 26, 764-73. 28 Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.
Bu çalışma, yaşlı insanlarda kısa süreli direnç eğitiminin kas oksidatif kapasitesi ve glikoz toleransı üzerine etkisini araştırmayı amaçlamıştır. İkinci amaç, mukavemet, güç ve kas kalitesindeki gelişmelere ( örn., Hücre sinyallemesinde ve kas lifi tipli kompozisyonda yer alan proteinlere) olan etkiyi incelemektir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
İsveç'in Stockholm Bölgesi Etik Kurulu, soruşturmayı tasarladı.
1. Malzeme
- BMI değeri 20-30 kg · m -2 olan 65-80 yaş arası nispeten sağlıklı kadın ve erkekleri işe alınız. Onları iki gruba rastgele oluşturun. Her iki gruptaki bireylerin göreceli olarak düşük fiziksel aktivite düzeylerine sahip olmalarını sağlayın ( yani, günlük ılımlı fiziksel aktivite ve düzenli egzersiz eğitimi yok).
- Beta bloker kullanıcılarını ve koroner arter hastalığı ve ciddi nörolojik veya eklem sorunları olanları hariç tutun.
- Test ve eğitim oturumlarındaki olası rahatsızlık ve riskleri bildirdikten sonra, konudan yazılı izin alınmasını isteyin.
- Dayanıklılık eğitimini (RET) ve eğitimsiz (CON) grupların yaş, cinsiyet ve BKİ açısından dengeleyin. Bir grubun haftanın üç günü sekiz hafta boyunca 1 saat boyunca bir eğitmen altında RET yapmasını isteyin; Diğer grup kontrol olarak görev yapacakLs (CON).
2. Test ve Eğitim
Not: Sekiz egzersiz, standart bacak egzersizi, oturmuş bacak basıncı, oturan abdominal sıkışma, sırtüstü göğüs basıncı, oturan sırt uzatması, oturmuş omuz baskısı, oturan kürek, oturmuş bacak uzatması (diz uzatması) ve eğilimli bacak kıvrımı (diz fleksiyonu) ; Temsilcilik Sonuçları bölümündeki Şekil 8'e bakınız.
- İlk antreman esnasında, her egzersiz egzersizi için bir maksimal tekrarlamada (1 RM) azami kuvveti değerlendirin.
NOT: 1 RM modeli yaygın olarak kullanılır ve nesnenin direnci yalnızca bir defa değil de iki kez kaldırması için yük olarak tanımlanır.- Başlamadan önce, test edilen egzersizin katılımcısından kısa bir ısınma (çok düşük ağırlık yüklerinde birkaç deneme ile) yapmasını isteyin. Ardından, muhtemel 1 RM değerinin hemen altına kadar yükü arttırın (çoğunlukla azami 3-4 artmıştır)reklamlar). Konunun yalnızca bir kez gerçekleştirebileceği maksimum yükü kaydedin (= 1 RM).
- Sekiz standart güç egzersizinde 1 RM'yi ölçün (Temsilcilik Sonuçlar bölümündeki Şekil 8'e bakın). Deneklerin test edilen her egzersiz arasında en az 2-3 dakika dinlenmelerini isteyin.
NOT: Her egzersizin egzersiz testleri de dahil olmak üzere tüm egzersiz egzersizleri için kuvvet antrenman ekipmanı kullanılmıştır.
- Tüm RET grubundan sekiz hafta boyunca haftada üç kez denetlenmiş 1 saat güç antrenmanı yapmasını isteyin. Katılımcılardan ısınma yaptıktan sonra sekiz adet yukarıda belirtilen standart eğitim egzersizlerini yapmalarını isteyin. Her kümede bir egzersizi 12 kere tekrarlamalı ve her egzersiz için üç takım gerçekleştirmelidirler. Her takım arasında 1 dakika dinlenmeye ve her egzersiz arasında 2-3 dakika dinlendirilmesine izin verin.
- Deneklere, konsantrik fazda ( yani, kas kısaltılması evresi) mümkün olan en kısa sürede her egzersizlerini yapmalarını veEksantrik faz ( yani kas uzatma fazı).
NOT: Alıcılar egzersizleri herhangi bir sırada yapabilirler. Bununla birlikte, bir bacak egzersundan başlayıp son bulmalarını ve ayrıca sunulan sekilde sekiz egzersiz yapmaya çalışmasını isteyin. Sekiz egzersizin tamamı için mukavemet egzersiz ekipmanı kullanın. - Her eğitim oturumu sırasında, katılımcılardan her egzersiz için 1 RM'den% 75-80 oranında üç set gerçekleştirmelerini isteyin. Bir katılımcının egzersizin her üç setinde de 12 tekrarlama yapması sonrasında yükü yaklaşık% 5 arttıracaktır.
- Deneklere, konsantrik fazda ( yani, kas kısaltılması evresi) mümkün olan en kısa sürede her egzersizlerini yapmalarını veEksantrik faz ( yani kas uzatma fazı).
3. Minimal Bisiklet Testi
Not: 1. testte alt maksimal bisiklet testi yapın (Giriş ve Şekil 1'e bakın ).
- Her biri 4 dak. 14 , 15 için olmak üzere iki alt-en üst seviyeyi içeren bir çevrim ergometresi testi uygulayın. İlk çalışma oranını düşük (30 W) ve ikincisini 60-120 W, çevrim ergometresi üzerindeki yükler arasında duraklama olmaz.
NOT: İlk yük tüm denekler için aynıdır, ancak ikinci ve son alt-üst seviye her bir özne için maksimum kalp atış hızının yaklaşık% 65-85'i olmalıdır. Her iki yük, 8 haftalık eğitimin müdahale periyodundan önce ve sonra aynı olmalıdır.- İnsanlardan fiziksel olarak ne kadar aktif olduğunu sorarak ve denek başlangıçta kısa bir süreliğine döngü yaparak denemeler öncesinde yapılan alıştırma testlerinde ikinci en yüksek yük düzeyini temel alın; Test lideri, son submaksimal yükün uygun olduğu konusunda konunun kalp atış hızına dayalı bir görüş oluşturacaktır.
- 3:15, 3:30, 3:45 saatlerinde gözlenen İK değerini alarak, düşük ve yüksek iş hızlarında son dakika boyunca bir göğüs kemeri aracılığıyla bir kalp hızı monitörü kullanarak ortalama sabit kalp atış hızını (KH) kaydedin. , Ve her iş gücünde 4: 00 dk.
- Gaz (O 2 ve CO 2) bileşimini bulmak için ergo-spirometrik bir cihaz kullanın yani CO 2 / O 2 ) kaydedin ve her iki iş yükü yükünde de son dakika boyunca (her 15 saniyede dört önlemden) RER ortalama değerlerini ölçün.
4. Diz Ekstansör Gücü: Statik, Eksantrik ve Konsantrik Tepe Torku ve Gücü Geliştirme Oranı.
Not: 1. test günü diz kuvveti ölçümleri yapın (Giriş ve Şekil 1'e bakın ).
- Kayıtlardan önce, submaksimal seviyede bir döngü ergometresi (yani, maksimum kalp frekansının yaklaşık% 65-85'i) üzerinden 8-10 dakika boyunca bisikletle ısınmasını bekleyiniz.
- Konunun, izokinetik bir dinamometre tezgâhında oturmasını isteyin. Kişinin gövdesini omuz ve kalçalar üzerinde kayışlarla sabitleyin. Konunun şaftını iki kayış yardımıyla dinamometre şaftına sıkıca sarın: biri diz altından ve diğeri sadece abovAyak bileği. Diz eklem eksenini dinamometre şaftının dönme merkezi ile hizalayın.
- Nesne güvenceye alındığında, maksimum volüntüre diz kuvveti, denek, izokinetik dinamometrede oturarak zirve torku olarak değerlendirilir. Başlangıçta denek, diz gücü donanımıyla (izokinetik dinamometre) alıştırmak için birkaç deneme gerçekleştirmesine izin verir.
- Bireye, sağ bacak 30 deg / s'lik sabit bir açısal hızla dört maksimum volünter eksantrik ve konsantrik diz ekstansiyonunu gerçekleştirmelerini isteyin. Hareket aralığını 90 ° ve 15 ° arasında ayarlayın (düz bacak = 0 °).
- Egzantrik görevde, denekten dinamometre miline, 15 ° ila 90 ° diz açılarına kadar tüm hareket boyunca maksimum çabayla direnmesini isteyin. Konsantrik görevde, denekten dinamometre şaftındaki alt bacağa tüm hareket aralığında olabildiğince sert bir diz uzatması isteyin.
- Dinamik kayıtların ardından 4 dakikalık dinlenmeye izin verin. Bundan sonra statik maksimal gönüllü kasılma torkunu (MVC) 65 ° diz açısında dört kez değerlendirin. Her statik denemede, aynı dinamometrede oturan kişilerin, şimdi sabit (65 ° 'de) olan dinamometre şaftına karşı mümkün olduğunca hızlı ve sert vurmasını isteyin ve taşınamazlar.
- Tork (güç) sinyallerinde, izokinetik dinamometreye bağlı bir analogdan dijitale çevirici kutusu kullanarak analog tork sinyallerini dijital olarak dönüştürün.
NOT: Dönüştürücü, analog sinyalleri otomatik olarak dinamometreden dijital sinyallere değiştirir; bunlar, daha sonra verilerin toplandığı bilgisayara otomatik olarak aktarılır.- Bilgisayarın yazılım analiz programında örnekleme frekansını 5 kHz'de ayarlayın. Yazılım analiz programı ile bir sonraki mukavemet değeri analizi için dijital sinyalleri bilgisayara kaydedin.
- Sonraki analizde,Eksantrik, konsantrik ve statik ölçümlerde her denek için dört denemeden elde edilen en yüksek değerdir. Yazılım programında, dört denemenin en yüksek değerine tıklayın ve bilgisayar ekranında gösterilen mukavemet değerini yazın.
- Her denek için eksantrik ve konsantrik kayıtlarda en yüksek pik torkunu ve dört statik deneme arasından en yüksek mukavemet değerini kaydedin.
NOT: Diz ekstansör kuvvetinin oturma pozisyonundaki izokinetik dinamometre testi, uygun güvenilirlik ve geçerliliğe sahiptir 16,17.
- Her denek için eksantrik ve konsantrik kayıtlarda en yüksek pik torkunu ve dört statik deneme arasından en yüksek mukavemet değerini kaydedin.
- Statik denemeler arasında bulunan 0-30 ms ve 0-200 ms boyunca en yüksek değerdeki kuvvet (tork) gelişim oranını (RFD) ölçün. Diz ekstansör kuvvetinde (zaman: 0 ms) kontraksiyon başlangıcı için 7.5 Nm düzeyinde sıfır değerini ayarlayın 18 , 19 . İmleci hareket ettirin (kas için yazılım programındaMukavemet analizi) 0-ms pozisyonunu elde etmek için y-skalasındaki "7.5 Nm" değerine getirin.
- Ön test değerlendirmesi için imleci 30 ms değerine (0 ms sonra) ayarlayın. Artışı gösteren değeri 30 ms'de Nm'ye yazın ( yani, Nm'den 7.5 Nm = 0 ms'de artış). Test sonrası değer için de aynı işlemi uygulayın.
- 0-30 ms periyodu boyunca test öncesi Nm değeri (pay) için ön test Nm değerine (payda) kıyasla yüzde artış oranını hesaplayın. Böylece, mevcut RFD, ön testten son teste yüzde yükselterek. 0-200 ms zaman aralığı için aynı analizleri yapın.
5. Kası Biyopsisi
Not: Test günü 2. günde bir kas biyopsisi yapın (Giriş ve Şekil 1'e bakın ).
- Bir konchotome 20 kullanarak uyluk kası vastus lateralis'in orta bölümünden bir kas biyopsisi yapın.
- Biyopsiden önce 1-2 mL lokal anestezi deri altı ve fasiyuma enjekte edilir. Birkaç dakika sonra küçük bir neşterle, patella ile anterior superior ilyak omurga arasındaki mesafenin yaklaşık 1 / 3'ü kadar cilt ve fasiyal yoluyla bir kesi yapın. Konchotome kullanarak yaklaşık 100-150 mg kas dokusu çıkarın.
- Sıvı azottaki donma noktasına kadar soğutulmuş izopentan içinde histokimya için örnekleri dondurun ve -80 ° C'de saklayın. 30-50 mg kas dokusu örneği saklayın.
- Sıvı nitrojende protein analizi için örnekleri hızla dondurun ve -80 ° C'de saklayın. 30-50 mg kas dokusu örneği saklayın.
6. OGTT
Not: 3. testte OGTT (oral glikoz tolerans testi) yapın (Giriş ve Şekil 1'e bakın ). Egzersiz ile OGTT arasındaki süre 48 saati aşmalıdır ve öncesi ve sonrası arasında benzer olmalıdır-test. 2 saatlik bir oral OGTT, bu süre zarfında sıklıkla kan numunelerinin normal veya artmış seviyelerde olup olmadığını araştırmak için kullanılır ve diyabet veya prediyabet koşullarını belirtir.
- Sabahları bir gecede aç olan ve test günü veya bir önceki gün herhangi bir yorucu egzersiz yapmamış olan kişiler için OGTT testini uygulayın.
- Glukoz alımından 15 dakika önce ve hemen ardından glukoz alımından sonra 15, 30, 60, 90 ve 120 dakika sonra antekübital venden bir venöz kanül vasıtasıyla sırtüstü katılımcılardan kan örneği alın (4 mL) 250 g / L'lik bir çözeltide 75 g glikoz).
- Kan örneklerini 1,500 xg'de ve 4 ° C'de 10 dakika santrifüjleyin ve gelecekteki analiz için plazmayı -20 ° C'de saklayın. Standart glikoz seviyesi testleri yapmak için numuneleri kullanın (adım 7).
- Glükoz, insülin ve c-peptid için, bazal glukoz seviyelerinin üstünde glikozun zaman integralini belirleyerek eğrisin altındaki alanı (AUC) hesaplayın. OGTT sonuçlarını kullanın10 000 * √ [(Glukoz bazal * İnsülin bazal ) * (Glükoz ortalaması * İnsülin ortalaması ] denklemine göre Matsuda yöntemini 21 kullanarak tüm vücudun insülin duyarlılığını hesaplamak.
7. Kan Örneklemesi Analizi
- Otomatik bir analizör ile venöz plazma içindeki glikoz konsantrasyonunu hesaplayın. 2 saatlik bir OGTT 22 sonrasında bozulmuş glikoz tolerans düzeyini> 7.8 mmol / L'de kan şekeri değerlerine ayarlayın.
- İnsülin ve c-peptidin plazma analizleri yapmak için 22 ELISA kitlerini kullanın. Bir plaka okuyucu kullanın. İnsülin ve c-peptit için ELISA plakalarını bir plaka okuyucuya (her biri ayrı bir vesile ile) yerleştirin.
NOT: Plaka okuyucu, belirli absorbsiyonlarda plakadaki numuneleri ölçerek insülin miktarını ve c-peptid miktarını ölçer. Kan lipidleri TG, HDL, apolipoprotein A1 ve apolipoprotein B standart yöntemlerle analiz edildi.Karolinska Üniversitesi Hastanesi, Stockholm, İsveç.
8. Kas Örneklerinin Analizi
- Immunoblotting
- İlk olarak, kas örneğini 12 saat boyunca 10 -1 mbar'ın altındaki bir basınçta liyofilizerde dondurarak kurutun. Işık mikroskopu altında bir iğne ve forseps kullanarak kan ve bağ dokusundan arındırılmış şekilde parçalayın. -80 ° C'de saklayın.
NOT: Uygun miktarda kas kuru ağırlığın 1 ila 5 mg arasında olmasına rağmen, protokol tek liflere kadar 1 mg'dan daha düşük değere ayarlanabilir. Bir biyopside düşük miktarda kas dokusu bulunduğundan, RET katılımcısından alınan değerler immünoblotlama için kullanılmamıştır. - Kas örneklerini homojenize edin 2 mM 4- (2-hidroksietil) -l-piperazinetansülfonik asit (HEPES), 1 mM etilendiamintetraasetik asit (EDTA), 5 mM etilen glikol-bis (trifloroasetat) -asetattan oluşan buz gibi tamponda (80 mcL / mg) bir mini boncuk çırpıcıyla (P-aminoetil eter) -N, N, N ', N'-tetraaset10 mM MgCl2, 50 mM ß-gliserofosfat,% 1 TritonX-100, 1 mM Na3VO4, 2 mM ditiyotreitol, 20 ug / mL leupeptin, 50 ug / mL aprotinin,% 1 fosfataz inhibitörü (EGTA) Kokteyl ve 40 ug / ml PMSF (fenilmetilsülfonil fluorür).
- Kas ile her bir tüp içine 0.5 mm zirkonyum oksit boncuk bir kaşık koyun. Tampon ekleyin ve hız kademesi 7-8'de (burada maksimum 10'dur) ve 4 ° C'de 2 dakika boyunca homojenize edin.
- 10.000 x g'de 10 dakika homojenat santrifüjleyin. Geri kalan süpernatanı yeni tüplere aktarın ve yapısal proteinleri içeren peleti atın.
- Sprektrofotometrik olarak, 660 nm'de 23 plaka okuyucu kullanılarak piyasada bulunan bir kit ile süpernatanın protein konsantrasyonu belirlenir.
- Daha sonra örnekleri 2x Laemmli numune tamponu ve homojenleştirici tampon (1: 1) ile nihai protein konsantrasyonu 1.5 μg /181. L. Proteinleri denatürebilmek için onları 5 dakika boyunca 95 ° C'ye ısıtın. Seyreltilmiş numuneleri analizden önce -20 ° C'de saklayın.
- Native-poliakrilamid jel elektroforezi (PAGE) için, her bir numuneden 30 μg proteini 18-iyi prekast gradyen jellere (% 4-20 akrilamid) yükleyin ve buz üzerinde 30 dakika boyunca 300 V'de elektroforez gerçekleştirin.
- Jel transfer tamponu (25 mM Tris baz, 192 mM glisin ve% 10 metanol) ile 30 dakika boyunca 4 ° C'de dengelenir. Proteinleri 0 ° C'de 300 mA'lık sabit bir akımda 0,2 μm'lik gözenek boyutlu poliviniliden florid membranlara 3 saat süreyle 4 ° C'de aktarın.
- Eşit yükleme ve transferi doğrulamak için membranları toplam protein lekesi 24 ile lekeleyin. Her bir hedef protein için, her cisimdeki tüm numuneleri aynı jel üzerine yükleyin ve tüm jelleri aynı anda çalıştırın.
- Memeyi oda sıcaklığında Tris tamponlu salin (20 mM Tris-baz, 192 mM NaCl; TBS, pH 7.6) içinde 1 saat boyunca bloke edin.% 5 yağsız süt.
- Zarları% 2.5 yağsız süt içeren ve% 0.1 Tween-20 (TBS-TM) takviyeli TBS'de seyreltilmiş birincil antikorlarla gece boyunca inkübe edin (Malzeme Listesine bakın).
- Birincil antikor inkübasyonunu takiben, membranları TBS-TM ile yıkayın (2 x 1 dakika artı 3 x 5 dakika), yaban turbu peroksidazı ile konjuge edilen sekonder antikorlar (bkz. Malzeme Listesi) ile oda sıcaklığında 1 saat inkübe edin. Tekrar TBS-TM (2 x 1 dakika ve 3 x 10 dakika) ile yıkayın ve tekrar TBS ile dört ilave 5 dakika yıkamaya tabi tutun.
- Membran 6-12 mL kemilüminesan substrat 5 dakika boyunca uygulayın. Memeyi iki şeffaf plastik tabaka arasına yerleştirin. Membranları, harici bir ışığı bloke eden bir CCD kameranın önüne yerleştirin. Kimyasal ışıklı kamera filtresi kullanarak seri maruz kalma yapın.
- 2 dakika boyunca veya sinyaller doygun olana kadar 10 poz elde etmek için yazılım programını kullanın. Hem optik filtre ayarları için hem de standart bir kurulum kullanın tO kimyasal ayarlamanın yanısıra kemüminesans da edinebilirsiniz.
- Doygunluğa neden olmayan en yüksek pozlamayı kullanın ve bandın konturlarını işaretleyin. Aynı yazılımı kullanarak bantları yoğunluk x mm 2 olarak ölçün. Arka plan gürültüsünü bant yoğunluğundan çıkarın. Sonuçları toplam protein lekesine göre sunun ve başlangıçtaki ile karşılaştırıldığında yüzde değişim olarak ifade edin.
- İlk olarak, kas örneğini 12 saat boyunca 10 -1 mbar'ın altındaki bir basınçta liyofilizerde dondurarak kurutun. Işık mikroskopu altında bir iğne ve forseps kullanarak kan ve bağ dokusundan arındırılmış şekilde parçalayın. -80 ° C'de saklayın.
- Histokimyası
NOT: Aşağıdaki histokimya tekniği daha önceki bir yayın 25'de açıklanan yöntemlere dayanmaktadır.- Histokimya için bir kriyostat kullanarak -20 ° C'de kesit kesitlerini (10 μm) kesin. Enine kesitlerini bir cam küvette depolanan cam slaytlara monte edin ve biyopsi dilimleri oda sıcaklığında havayla kurutun.
- ATPaz boyaması için pH 4.3, 4.6 ve 10.3'te ön inkübasyon için her bir pH seviyesi için tampon çözeltileri hazırlayın 26 . Kılcalları görselleştirmek içinKesitlerde amilaz-PAS yöntemi 27 kullanılmıştır .
- Kalibrasyon çözümlerini etiketli kalibrasyon tulumlarına dökerek bir pH metreyi kalibre edin. Ana menüden pH değerini seçmek için ilgili düğmeye basın.
- Probu deiyonize su ile durulayın ve probu ilk kalibrasyon beheri içine yerleştirin. Memede hava kabarcığı olmadığından emin olun. İlk kalibrasyon solüsyonunu ölçün ve bir sonraki kalibrasyon solüsyonunu gösterin (ekran bir sonraki solüsyonu isteyecektir).
- Probu deiyonize suyla durulayın ve daha sonra ikinci kalibrasyon beheri içine yerleştirin. Memede hava kabarcığı olmadığından emin olun. İkinci bir kalibrasyon solüsyonunu ölçün ve bir sonraki kalibrasyon solüsyonuna geçin.
- Sonda iyonu giderilmiş suyla durulayın ve üçüncü kalibrasyon beheri içine yerleştirin. Memede hava kabarcığı olmadığından emin olun. Üçüncü kalibrasyon çözümünü ölçün.
NOT: KalibrasyonIyi, ekran kısaca " Üçüncü Arabellek Tamam" ı gösterecek ve sonra ana menüye dönecektir.
- ATPaz boyaması için tamponları aşağıdaki gibi kullanın.
- PH 10.3'te bir çözelti hazırlamak için iki farklı çözelti kullanın: (A) 4.506 g glisin, 4.8 g CaCI2, 3.51 g NaCl ve 600 mL dH20 ve (B) 2.176 g NaOH ve 540 mL DH 2 O. Çözeltileri soğuk bir odada veya bir buzdolabında saklayın. Bir ay içinde kullanın.
- PH 4.3 ve 4.6'da çözeltiler hazırlamak için "asit ön-inkübasyon" yapın. 6.47 g Na asetat, 3.7 g KC1 ve 500 mL dH2O kullanarak ön ilhinasyon için asit hazırlayın. Sonra% 2.5 CaCl2 çözeltisini 250 mL dH2O içine çözerek hazırlayın. Preparat 2 % CoCI2 solüsyonunun 5 g'ı 250 mL dH20 içine eritilerek hazırlandı.
- Bu çözümleri yukarıda belirtildiği gibi saklar ve kullanın. Son olarak,% 0.2 amonyum sülfat hazırlamak800 μL% 20 (NH4) 2S 40 mL dH 2 O içine karıştırılır. İkincisini taze olarak hazırlayın.
- Bazı pH değerlerinde aşağıdaki gibi çözeltiler hazırlayın. PHmetrenin kalibrasyonundan sonra, küvetleri ve kalsiyum ve kobalt klorürleri buzdolabından çıkarın ve lekelenmeden önce oda sıcaklığına kadar ısınmalarına izin verin.
- PH 10.3 için küçük (yaklaşık 70 mL) cam behere yaklaşık 25 mL A solüsyonu ilave edin. PH değerini ölçün. Gerekli pH 10.37'ye ulaşılana kadar B çözeltisini ilave etmeye devam edin. Boyama çok koyu ise, pH değerini yükseltin. Çok parlaksa, pH değerini düşürün.
- PH 4.6 için , küçük bir cam beher içine yaklaşık 25 mL "asit ön-inkübasyon" ekleyin. PH değerini ölçün. 5 M asetik asit kullanarak pH'ı azaltın . Lekenin görüntüsü çok koyu ise, artmış pH ile hafifletmeye çalışın. Çok parlak ise, pH düşen koyulaştırın. Boyama yardımcı olmazsa, başka bir pH'ı deneyin: 4.8 inst4.6.
- PH 4.3 için , 4.6 ile aynı işlemi yapın, ancak daha fazla asetik asit ilave edin. Leke çok parlaksa pH değerini düşürün ve fiberler belirlenemeyecek kadar koyu renkte ise pH değerini yükseltin.
- ATP özümünü aşağıdaki gibi hazırlayın. Küvet (10 mL) başına 0.017 g ATP tartılır, böylece 3 küvet için 0.051 g veya 4 küvet için 0.068 g. PH 10.3'de 30 mL (3 küvet, 10 mL / küvet) çözelti alın (tartım camı silindir kullanın) ve tartılmış ATP'li cam bir behere koyun.
- Iyice karıştırın ve pH değerini ölçün. PH değeri tam 9.40'a ulaşana kadar konsantre HC1 kullanarak pH'ı azaltın.
- Çeşitli pH değerlerinde inkübasyon için aşağıdakileri yapın. Bir küvete 10.3 solüsyonu yerleştirin ve 9 dakika boyunca 37 ° C'de bir su banyosunda inkübe edin. 4.3 solüsyonu başka bir küvete yerleştirin ve 5 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edin. 4.6 solüsyonu son küvete yerleştirin ve oda sıcaklığında 1 dakika inkübe edin.
- Tercih edilen pH değerini takibenKuluçka prosedürü, aşağıdaki gibi her küvet içeriğini uygulayın. 15 kez dH20 ile yıkayın. Biyopsi numunesine ATP çözeltisi (0.170 g ATP / 100 mL H20) ilave edin. 30 dakika boyunca 37 ° C'de bir su banyosunda inkübe edin. 15 kez dH20 ile yıkayın.
- Küvetlerdeki biyopsi örneğine CaCl2 çözeltisi (1 g CaCl2 / 100 mL H20) ekleyin. Oda sıcaklığında 3 dk inkübe edin. 15 kez dH20 ile yıkayın. Küvetlerdeki biyopsi örneğine CoCl2 solüsyonu (2 g CoCl2 / 100 mL H20) ekleyin. Oda sıcaklığında 3 dk inkübe edin. 15 kez dH20 ile yıkayın.
- 30 saniye süreyle (NH4) 2 S çözeltisine koyun ve davlumbazın altına hızla 15 kez yıkayın. Biyopsi dilimleri slayt cam üzerine tutkal edin. Kabarcıkları önlemek için, biyopsi sıkıştıracak, ancak çok zor değil.
- Kesitin liflerden arındırılmış veya uzunlamasına kesilmesi olmayan bir bölge seçin. Li altında analiz edinGht mikroskop yazılımı kullanarak.
- Biyopsi başına en az 150-200 lif ortalaması olan bilgisayar görüntüsü analizi ile kesit alanını (CSA), kılcal damarları ve fiber tipinin sınıflandırmasını ( yani, tip-I, IIA veya IIX) değerlendirin. Kesitlerdeki kas liflerinin mikroskop görüntüsünden, üç tip kas lifinin ( örn., Tip I, IIA ve IIX), pH lekelenmesine bağlı olarak gri ila siyah arasında çeşitli tonlarda tonların olması sağlanır ( örn. 4.34, 4.65 ve 10.37).
- Birinci tip lifleri işaretleyerek başlayın. Bundan sonra, program diğer tip-I elyafları otomatik olarak kaydedecektir. Tüm I-tipi elyafların doğru işaretlendiğinden emin olun. Belli bir lifi işaretlemek için "Vektör" düğmesine tıklayın. Her ayrı seçilen kas lifi için alanı ölçmek için imleci kullanın.
- I-tipi liflerin analizi yapıldıktan sonra, IIA tipi ve IIX türü için de aynı işlemi uygulayın. Her bir kas lifi türü için ortalama ± SEM ( yani, tip I, IIA ve IIX), lif miktarı ve RET ve CON grupları için CSA ile ilgili olarak hesaplanmalıdır.
Not: Kesit alanı (CSA), kılcal damarlar ve fiber tipinin sınıflandırılması ( ör., Tip I, IIA ve IIx) biyopside ortalama 163 ± 9 fiberden değerlendirildi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Malzeme
Çalışmada, 65-80 yaş arası, 20-30 kg · m- 2 arasında BMI değerine sahip, nispeten sağlıklı 21 kadın ve erkek katılımcılara randomize edildi ve iki gruba randomize edildi. Her iki gruptaki bireylerin fiziksel aktivite seviyeleri nispeten düşüktü ( yani, ılımlı bir günlük fiziksel aktivite düzeyi ve düzenli egzersiz eğitimi yok). Bir grup (n = 12, 6 kadın ve 6 erkek) sekiz hafta boyunca haftada üç saat bir eğitmen altında 1 saat boyunca RET uygularken diğer grup kontrol grubu olarak görev yaptı (n = 10, 5 kadın ve 5 erkek). RET ve CON grupları yaş, cinsiyet ve VKİ açısından dengelendi ( Tablo 1 ). Terk turlarını telafi etmek için RET grubuna daha fazla kişi katıldı; RET grubunda CON grubu üzerinde daha fazla beklenmektedir.
| </ Td> | RET (n = 12) | CON (n = 9) | |||
| Ön | posta | Ön | posta | ||
| Yaş (yıl) | 71.4 ± 1.1 | 72.0 ± 1.4 | |||
| BMI | 24.6 ± 0.8 | 24.9 ± 0.8 | 23.2 ± 0.8 | 23.2 ± 0.8 | |
| Ağırlık (kg) | 70.4 ± 2.9 | 71.1 ± 2.8 | 67.4 ± 3.9 | 67.6 ± 3.9 | |
| FFM (kg) | 51.0 ± 2.3 | 52.4 ± 2.1 ** | 47.6 ± 4.1 | 48.6 ± 4.3 | |
| Kesit enine kesitleriA (cm²) | 188.9 ± 9 | 200 ± 8 *** † | 155 ± 12 | 154 ± 11 | |
| Fiber Kesit alanı (cm²) | Tip I | 5452 ± 393 | 5567 ± 362 | 4889 ± 323 | 4807 ± 354 |
| Tip IIa | 4230 ± 610 # | 4484 ± 434 # | 4114 ± 535 # | 3971 ± 494 # | |
| Iix tipi | 3678 ± 634 # | 3554 ± 552 # | 3392 ± 889 # | 2913 ± 427 # | |
Tablo 1: Katılımcıların Özellikleri. RET, direnç egzersiz eğitimi; KON, kontrol; VKİ, vücut kitle index; FFM, yağsız kütle. Değerler fiber kesit alanı (RET, n = 10; CON, n = 7) hariç 12 (RET) ve 9 (CON) denek olup ortalama ± SEM olarak sunulmuştur. **, ön için p <0.01; ***, p <0.001 pre öncesi; †, CON pozuna karşı p <0.05; †††, p <0.001 karşı kon; #, P <0.05 tip I'e karşı. Bu tablo Frank ve ark. Scand. J. Med. Sci. Spor . 2016: 26, 764-73. 28
Beta bloker kullanıcıları ve koroner arter hastalığı ve ciddi nörolojik veya eklem sorunları olanlar hariç tutulmuştur. Başlangıçta bazı kişiler: yüksek tansiyon (her grupta 2); Depresyon (her grupta 1); Ve dislipidemi için ilaç (RET'de 2, CON'da 1), hipotiroidizm (RET'de 1), Parkinson hastalığının erken evresi (RET). İlaç astım (RET'de 1) ve romatizmal problemler (CON'de 1) için sporadik olarak alındı. Bir kişi bir pacemake vardıR (CON).
Bir RET konusu, bel ağrısı nedeniyle 6 hafta sonra eğitimi kesintiye uğrattı ancak yine de çalışmaya dahil edildi. Bir başlangıç CON denek, kuvvet ön testi sırasında diz sorunları nedeniyle dışlanmıştır. Astımlı olanlar ve kalp pilleri çevrim testinden çıkarıldı.
Denekler, test ve eğitim oturumlarındaki muhtemel rahatsızlık ve risklerden haberdar olduktan sonra yazılı onay vermişlerdir.
Veriler, araç ± SEM olarak sunulmuştur. RET ve CON arasındaki farklar, istatistiksel bir önem taşıyan iki yönlü tekrarlanan ölçüm ANOVA ile istatistiksel bir program kullanılarak test edildi. Önemli ana etkiler veya etkileşimler gösterildiğinde, farklılıklar post-hoc analizleriyle (Fisher LSD) bulunmuştur. İstatistiksel önem p <0.05 kabul edildi.
Şekil 2A ). Dinamometre aynı zamanda RET grubunda (başlangıç 0-30 ms'de)% 52'lik bir artış ile kuvvet gelişim oranını (RFD) gösterdi ( Şekil 2B ). CON grubu için, konsantrasyon kuvveti müdahale döneminde azaltıldı. Yapılan egzersiz çalışmaları için RET için eğitim yükü% 19-72 oranında artmıştır.
Şekil 2: Mukavemet ölçüm sonuçları. Eski direniş etkisi0-30 ms ve 0-2 ms arasında statik (STAT), eksantrik (ECC) ve konsantrik (CONC) tork ve ( B ) kuvvet gelişim hızı (RFD) üzerinde kontrol periyodu (RET) veya kontrol periyodu (CON) 200 ms'lik statik diz ekstansiyonu. Değerler 12 (RET) ve 9 (CON) denek olup bazal değerlere göre yüzde değişim olarak sunulmuştur (ortalama ± SEM). *, P <0.05 pre öncesi; **, ön için p <0.01; ***, pre için p <0.001. Bu rakam Frank ve ark. Scand. J. Med. Sci. Spor . 2016: 26, 764-73. 28 Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.
Kas biyopsilerinden histokimya, IIa tipi lif miktarının arttığını ve RET grubunda IIx'de azalma eğilimi olduğunu belirtti. Böylece, RET grubu,Lif kompozisyonu açısından daha fazla oksidatif profil ( Şekil 3 ). Güvenilir kesitlerin, dört denekten (iki gruptan iki) biyopsiden elde edilemediğini ve bu deneklerden çıkan sonuçlar hariç tutulduğunu unutmayın.
Şekil 3: Kas lifi türü bileşim sonuçları. Direnç egzersiz eğitiminin ( A , RET) veya kontrol periyodunun etkisi ( B , CON). Değerler 10 (RET) ve 7 (CON) deneklerden olup ortalama ± SEM olarak sunulmuştur. (*), P = 0.068 pre; **, ön için p <0.01; †, CON pozuna karşı p <0.05. Bu rakam Frank ve ark. Scand. J. Med. Sci. Spor . 2016: 26, 764-73. 28 Lütfen cliBu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayın.
Ayrıca, kas proteini sentezinin sinyaliyle ilgili protein içeriğini belirlemek için Western leke analizleri, Akt ve mTOR (memelilerin rapamisin hedefi) RET grubu arasında% 69'luk bir artış gösterdi ( Şekil 4A ve Şekil 5 ). Western benek analizleri, mitokondriyal proteinler arasında OXPHOS kompleksi II ve sitrat sentaz için hem yaklaşık% 30'luk bir artış hem de RET grubundaki kompleks IV için% 90'lık bir artış olduğunu kanıtladı ( Şekil 4B ve Şekil 5 ). Kullanılan birincil antikorlar mTOR, Akt ve OXPHOS'du. İkincil antikor olarak anti-tavşan veya anti-fare HRP kullanıldı. OXPHOS kompleksi I için protein bantları açıkça görülmedi ve bu veriler atıldı.
Şekil 4: Kas proteini sonuçları. Akt ve mTOR proteinleri ( A ) ve mitokondriyal proteinlerin ( B ) kas içeriğindeki değişiklikler üzerine direnç egzersiz eğitimi (RET) veya bir kontrol periyodunun (CON) etkisi. Akt, protein kinaz B; MTOR, memelilerin rapamisin hedefi; CS, sitrat sintazı. Değerler, 11 (RET) ve 9 (CON) deneklerden ± SEM anlamına gelir. *, P <0.05; **, p <0.01; ***, bazal ile karşılaştırıldığında p <0.001. †, p <0.05; ††, p <0.01; †††, p <0.001 karşı kon. Bu rakam Frank ve ark. Scand. J. Med. Sci. Spor . 2016: 26, 764-73. 28 Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.
= "/ Files / ftp_upload / 55518 / 55518fig5.jpg" />
Şekil 5: Western blot görüntüleri. Müdahale sekiz haftadan önce ve sonra kas proteinini ölçtü. Sırasıyla RET ve CON gruplarındaki bir öznenin temsilci görüntüleri. Bu rakam Frank ve ark. Scand. J. Med. Sci. Spor . 2016: 26, 764-73. 28 Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.
Sadece RET grubu, döngü testinde artmış aerobik kapasite gösterdi (ön teste karşı post-versus). En düşük maksimum alt yoğunlukta, kalp hızı (HR), RET'de azalmaya ve CON grubunda yükselmeye güçlü bir eğilim gösterdi ( Şekil 6A ). Buna ek olarak, sadece RET grubu için RER (solunum değişimi oranı = CO 2 / O 2 ) anlamlı derecede azalmıştır (Lass = "xfig"> Şekil 6B).
Şekil 6: Kardiyo solunum verileri. Direnç öncesi ve sonrası egzersiz eğitimi (RET) veya kontrol periyodu (CON). ( A ) düşük (30 W) ve yüksek (60-120 W) yoğunluklu kararlı durum siklüs sırasında HR, kalp hızı ve ( B ) RER, solunum değişimi oranı. Değerler 11 (RET) ve 8 (CON) deneklerden (iki hasta astım ve kalp pili kullanımı nedeniyle dışlanmıştır) ve ortalama ± SEM olarak sunulmaktadır. (*) P = 0.056 (RET) ve p = 0.068 (CON) pre öncesi; * Ön öncesine göre p <0.05. Bu rakam Frank ve ark. Scand. J. Med. Sci. Spor . 2016: 26, 764-73. 28 Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.
RET grubunun glikoz tolerans testinden elde edilen sonuçları, hem kan örneklerinde hem de 2 saat sonra (% 14) kan glikozunda iyileşme olduğunu gösterdi. Eğrisi (% 21, Şekil 7A ).
Şekil 7: OGTT sırasında plazma glikozu. Test öncesi (●) ve sonrası (○) direnç egzersizi eğitimi (RET, A ) veya bir kontrol periyodu (CON, B ) ile gerçekleştirildi. AUC glukozu , plazma glikozu için eğri altındaki alan. Değerler 12 (RET) ve 9 (CON) denek olup ortalama (plazma glikozu) ve ortalama ± SEM (AUC glikozu) olarak sunulmaktadır . * Ön öncesine göre p <0.05. Bu rakam Frank ve ark. Scand. J. Med. Sci. Spor . 2016: 26, 764-73. 28Rce.jove.com/files/ftp_upload/55518/55518fig7large.jpg "target =" _ blank "> Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görmek için lütfen tıklayınız.
Kan lipid profili, RET grubunda apolipoprotein B'de (% 8) azalma ile iyileşmiştir. CON için bir artış (% 10) bulundu. Ayrıca, RET grubu için yağsız kütle (FFM)% 3, bacak kesit alanı (CSA)% 7 oranında artmıştır ( Tablo 1 ). Mitokondriyal fonksiyon, aerobik kapasite, glukoz toleransı, kas kuvveti ve güçte kısa süreli ilerleyici kuvvet antrenmanından sonra görülen iyileştirmeler, yaşlı popülasyonda çok arzu edilen sağlık etkileridir.
Sekiz güç eğitimi egzersizleri Şekil 8'de gösterilmektedir. Her eğitim görevi, her eğitim oturumunda üç kümenin her birinde, sekiz hafta boyunca haftada 3 kez 12 kere gerçekleştirildi.
Şekil 8: Sekiz eğitim tatbikatı. Egzersizler, 1 setlik setin% 75-80'inde, 12 kere / sette, üç set / egzersiz ve eğitim oturumu ile gerçekleştirildi. Egzersizler: "bacak basın" ve "karın krizi" ( A ), "göğüs basın" ve "sırt uzantıları" ( B ) "omuz basın" ve "oturmuş kürek" ( C ) ve "bacak uzantıları" ve " Bacak kıvırcıkları "( D ). Güç antrenman egzersizlerinde hareket yelpazesi burada gösterilmiştir. Oturan abdominal krizde, gövde dik konumdan 60 ° öne doğru gövde fleksiyonuna hareket ettirilmelidir. Arkalık uzantısında, gövde neredeyse dik oturmuş bir konumdan geriye doğru yatay bir şekilde gövde pozisyonuna getirilir. Oturmuş egzersizler, bacak presleri ve bacak uzatması90s diz fleksiyonunda bacaklardan başlayan ve bacaklar düzeltilmeden hemen önce (dizlerde 0 ° yakın) biten ns ile gerçekleştirildi. Neredeyse düzleştirilmiş bacaklardan yaklaşık 100 derece diz fleksiyonuna kadar yapılan bacak kıvrımları (eğilimli konumda). Oturmuş egzersizler, göğüs basıncı ve omuz basıncı, 90 ° dirsek fleksiyonundan kollar düzleştirilmeden (0 ° 'ye yakın) önce gerçekleştirildi. Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu çalışmada, kısa süreli ilerleyici direnç eğitiminin yaşlı bireylerin kas fonksiyonu / morfolojisi, aerobik kapasite ve glükoz toleransı üzerine etkilerini araştırmak için çeşitli teknikler kullanılmıştır. Ana bulgu, bir kontrol grubuna kıyasla, kas aerobik kapasitesi, glikoz toleransı, mukavemet, güç ve kas kalitesinde ( yani, hücre sinyallemesinde ve kas lifi kompozisyonunda yer alan protein) pek çok gelişmenin meydana geldiği idi. Örneğin; statik, eksantrik ve konsantrik maksimal diz ekstansiyon gücü (% 8-12); Eğitim yükleri (% 19-72), başlangıçtaki 0-30 ms'de (% 52) maksimum güç geliştirme hızı (RFD); Birkaç mitokondrial protein (% 30-90); Akt proteinleri ve mTor proteinleri, kas protein sentezinde rol oynadı (her ikisi de% 69).
Böyle bir proje sırasında yaşlı insanlar sağlıklı kalma konusunda zorluk çekebilir. Testis sonucu meydana gelebilecek çeşitli yaralanmaların riskinden haberdar olmak gerekirEğitimsiz yaşlılar arasında eğitim ve eğitim. Eğitim periyodunun sonunda RET grubundaki bir kişi eski sırt problemlerinin nüksetmiştir. Bununla birlikte, eğitim projesi sırasında meydana gelen herhangi bir yaralanma veya rahatsızlık, eski katılımcılar arasındaki soruşturmanın sona ermesinden sonra uzun bir süre kaldı. Değişiklikler bazen eğitimin ne zaman, ne kadar ve yoğun bir şekilde yapılması gerektiği konusunda yapılabilir. Güç antrenmanı rejimi ile ilgili olarak, antrenörün, her eğitim antrenmanında ve konudaki yükü her antrenman oturumuna kaydetmesi, böylece uygun bir ilerleme dönem boyunca izlenebilmesi tercih edilir. İzokinetik dinamometre ile mukavemet ölçümü sırasında, yaşlı deneklerin denemeleri sırasında maksimum performanslarını kaçırmamaları için ölçüm prosedüründe herhangi bir hatadan sakınmak önemlidir. Bu nedenle, ısınma yapmak değerlidir. Mukavemet ölçümünden önce alt maximal seviyelerde 8-10 dakika ergometre bisiklet kullanınS, ardından diz gücü kayıtları için dinamometrede bir alışma prosedürü olarak ilk denemeler izledi. Ayrıca, kas gücü kasılmasının her bir türü kayıtları sırasında dört kayıt gerçekleştirmek iyi bir fikirdir; Bulunan en yüksek değer seçilebilir. Ayrıca, test parametre gücü elde edildiğinde hızla ilişkili olarak mukavemet değerlendirmesinin modifikasyonunu incelemek çok değerlidir. Özellikle, artan güç, yaşlı insanlar arasında iyileşen sağlık için önemli bir faktördür. Biyopsi ile ilgili olarak, deneklere biyopsi öncesi ve sonrası aspirin veya diğer pıhtılaşma önleyici ajanlardan kaçınmaları söylendi. Tip I, Tip 2A ve Tip 2B için aynı bacaktan alınan çift biyopsi materyalinde kas lifi alanının belirlenmesiyle ilgili olarak, bildirilen hatalar sırasıyla yaklaşık% 10, 15 ve% 15'dir ( 29) . Bu analizin bir kas biyopsisinden değerlendirilmesi sırasında dikkate alınması gerekir.
Sınırlamalar arasında Batı bçok; Yöntem, protein lokalizasyonu hakkında hiçbir bilgi vermez ve antikorun özgünlüğüne ve kalitesine büyük ölçüde bağlıdır (önemli bir konudur). Çok adımlı analiz, hata riskini artırır ve sorun gidermeyi ağırlaştırır. Bununla birlikte, Western lekelenmenin birkaç avantajı vardır: nispeten ucuz ve hızlıdır; Gerekli doku miktarı ile ilişkili olarak yüksek bir veri çıktısı verir; Protein ekspresyonu ve protein boyutu hakkında bilgi sahibi olur; Ve son olarak, değişim katsayısı genel olarak% 5'ten düşüktür. Güçlendirme eğitiminin süresi yalnızca sekiz haftadır ve daha sonra bu yaşlı insanlarla ilgili takip önlemleri alınmamıştır. Içme glukoz solüsyonlarına (OGTT) dayanan glukoz tolerans testleri, glikoz doğrudan kana enjekte edildiği zamanki gibi uygun görülmemektedir. Bununla birlikte, OGTT ile kullanılan yöntem daha ucuzdur, yönetilmesi daha kolaydır ve klinikte yaygın şekilde kullanılır. İzokinetik dinamometre ile mukavemet ölçütlerine ilişkin olarak, Diz ekstansör kuvvetine katkıda bulunan sadece kaslar çalışıldı ve diğer büyük vücut kası grupları değil çalışma yapıldı.
Direnç eğitimi, geliştirilmiş mukavemetin yanı sıra glikoz toleransı ve kas oksidasyon kapasitesini de geliştirmiştir. Yapılan her egzersizin (% 19-72) eğitim yükünde büyük artışlar vardı, bu da direnç eğitiminin genel gücünde belirgin iyileşmeler sağladığını gösteriyor. İzokinetik dinamometre ile yapılan ölçümler, diz ekstansör fonksiyonu hakkında daha ayrıntılı bilgi sağladı. Statik, eksantrik ve konsantrik kasılma sırasındaki tork% 8-12 arttı. Ayrıca direnç eğitimi, kontraksiyonun başlangıç aşamasında (0-30 ms) kuvvet gelişim hızında (RFD) büyük bir artışa (% 52) neden olurken, 0-200 ms arasında değişmedi. Eğitim protokolü iyi tolere edildi ve beklentilerimizin aksine, RET grubunda herhangi bir düşüş yaşanmadı.
Direnç eğitimi sonucuD hipertrofide, FFM, uyluk çevresi ve uyluk kesit alanındaki artış olarak ölçülmüştür. Farklı kas lifi tiplerinin CSA'sı RET sonrasında belirgin bir şekilde değişmedi, ancak tip IIx'den tip IIa'ya kadar lif türü bileşimde bir değişiklik oldu. Tip IIa lifleri tip IIx liflerinden daha büyük olduğundan, bu artmış kas kütlesine katkıda bulunur. RET grubunda, bu, protein sentezinin güçlendiğini gösterir. Protein sentezinin altında yatan moleküler sinyalleme yolu, Akt ve mTOR'un aktivasyonunu içerir. Yaşlılar, kas 30'da protein sentezini sınırlayabilecek daha az mTOR proteine sahiptirler. İlginç bir roman bulgusu, RET grubunda mTOR ve Akt'in protein düzeylerinin artmasıdır. Burada mTOR'da gözlenen artış olası herhangi bir anabolik dirence karşı koyabilir ve artmış protein sentezine katkıda bulunabilir.
VO 2max veya daha doğrusu VO 2peak , çoğunlukla maksimal olarak değerlendirilir VO 2 , iş doyumu tükenene kadar kademeli olarak artırılan bir test sırasında ölçülür. Bununla birlikte, yaşlı, zayıf olan deneklerde kapsamlı egzersiz testlerini kullanmak sorunludur. Bir sorun, yaşlıların kapsamlı bir egzersiz testi sırasında kalp krizi riski oluşturan gizli bir kardiyovasküler hastalığa sahip olması nadir değildir. Bir diğer daha teknik problem, kardiyorespiratuvar bir sınırlamadan ziyade azalmış kas kuvvetinin artımlı egzersiz sırasında iş hızını sınırlayabileceğidir. Verilerin yorumlanması, bu koşullar altında daha karmaşık olacaktır. Bu çalışmada kullanılan alternatif bir yöntem, müdahale öncesinde ve sonrasında sabit iş oranlarında İK ve RER'yi ölçmektir. Sonuçlar, İK'nin RET'de azalma eğilimi gösterdiğini, ancak CON grubunda artış olduğunu gösterdi. Bu, mukavemet eğitiminin VO 2max'ı ve dayanıklılık egzersiz kapasitesini geliştirdiğini göstermektedir. Bu bulgular, yaklaşık 9 ,"Xref"> 31, ancak önceki çalışmaların 32'sinde değil. Ayrıca, bu çalışmadaki bazı bulgular, kas aerobik kapasitesinin arttığını ( yani, daha fazla oksidatif fiber tipli kompozisyon değişiklikleri ve bir takım mitokondriyal proteinlerde artışlar) olduğunu göstermektedir. Dayanıklılık egzersizinin yaşlılarda kas aerobik kapasitesini arttırdığı iyi bilinmesine rağmen, kuvvet antrenmanı çalışmaları daha çelişkili bir görünüm vermektedir 8,9,10,33. İlk eğitim durumundaki farklılıklar ve eğitim programları farklı çalışmalarda farklı sonucu açıklayabilir. Sadece sekiz hafta süren eğitimden sonra birkaç mitokondriyal proteinde kuvvetli bir artış gösteren mevcut sonuçlar (önceki müdahale periyotları> 12 hafta) direnç eğitiminin kas oksidatif kapasitesini artırmak için etkili bir strateji olabileceğini göstermektedir.
Kısa müdahaleye rağmen, AUC glukozunda ve GLU 120 dk'da azalma ile gösterildiği gibi, RET grubunda gelişmiş glikoz toleransı gözlemlendi. Obezite ve fiziksel hareketsizlik artmış insülin direnci ve tip 2 diyabet riski ile ilişkili faktörler olmasına rağmen, moleküler mekanizmalar belirsizliğini koruyor. Artmış kas kütlesi ile değişen vücut kompozisyonu muhtemelen RET grubunda artmış glikoz toleransına katkıda bulunacaktır. Dahası, insülin direncinin, lipit zehirlenmesine, mitokondriyal disfonksiyona ve oksidatif strese yol açan aşırı lipid kaynağı ile yerleşik bir yaşam biçimiyle bağlantılı olduğu hipotezi ileri sürülmüştür 3 . Bu çalışma, direnç eğitiminin mitokondriyal oksidatif proteinlerde sağlam bir artış ile sonuçlandığını göstermektedir. Artmış kas oksidatif kapasitesinin artmış glukoz toleransını açıklayan bir faktör olduğunu varsayıyoruz.
Daha uzun takibi olan araştırmalar arzu edilirKuvvet, güç, glikoz ve lipid değerleri bakımından sağlık etkilerinin devam edip etmediğini ve ne kadar süreyle sürdüğünü göstermeyi başarabiliyor. Ayrıca, yaşlı insanlar arasında düzenli güç eğitiminin yeterli dozunun belirlenmesi değerlidir. Gelecekteki uygulamalar, diz ekstansörleri dışındaki büyük kas gruplarında da kuvvet ölçümleri yapmaktadır. Ayrıca, çeşitli proteinler ve mitokondri içersindeki ve dışındaki işlevleri ile ilgili olarak kas hücrelerinde birkaç ayrıntılı analiz yapabilir.
Testlerin sonucunu etkileyebileceğinden, testlerin hiçbir gününde, aynı günde veya test öncesinde herhangi bir şiddetli veya uzun süreli fiziksel aktivite olmadan bir gün geçirmek önemlidir. Hibridizasyon ve ATPaz boyamaya yönelik elyaf tipli kompozisyon için kritik adımların örnekleri, biyopsiden parça izopentan ile biyopsi alınmasından kısa bir süre sonra ve izopentan uygun olduğundaT sıcaklığından kurtulun, böylece biyopsi bozulmaz. Ayrıca, izopentan ile muamele edilmeden önce elyafların aynı yönde ilerlemesi için biyopsi parçası "gerilmiş veya takılmış" olmalıdır. Boyama sırasında, laboratuarın pH ve sıcaklığı optimal olmalıdır (ve bunu tahmin etmek zordur). Bununla birlikte, bu lif türlerini ve lif alanını sağlamanın tek yoludur. Buna ek olarak, yöntem hızlı, iki gün içinde sonuçları gösteriyor ve teknik pahalı kimyasallar veya cihazlar gerekmeksizin nispeten ucuz.
Mukavemet eğitiminden sonra kas aerobik kapasitesindeki belirgin iyileşme, dayanıklılık egzersizinin egzersizin tercih edilen modu olduğu görüşünü zorlamaktadır. Bununla birlikte, düşük VO 2max ve kas kuvveti olan yaşlı insanlarda, düşük yoğunluklarda dayanıklılık egzersizi yapılmalıdır. Mitokondriyal biyogenezin başlıca uyarılarından biri kas enerjisiyle ilgili stres 34'dir . Güçlendirme eğitimiDüşük bir yoğunlukta dayanıklılık egzersizi sırasında bu daha belirgin olmakla birlikte, büyük bir yerel enerji stresini ortaya koymaktadır. Yaşlı insanlarda, kas aerobik kapasitesini arttırmak için mukavemet egzersizi, dayanıklılık egzersizinden daha verimli olduğunu varsayıyoruz. Ayrıca, bazı sağlıkla ilgili parametrelerin iyileştirilmesi ve yüksek uyum göz önüne alındığında, güç eğitimi yaşlılar için önerilebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ettiler.
Acknowledgments
Yazarlar Andrée Nienkerk, Dennis Peyron ve Sebastian Skjöld'e antrenman oturumlarını ve çeşitli testleri denetledikleri için minnettar; Katılan konularda; Dil revizyonu için Tim Crosfield'a; Ve İsveç Spor ve Sağlık Bilimleri Okulu'ndan ekonomik desteğe.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Western blot | |||
| Pierce 660 nm Protein Assay Kit | Thermo Scientific, Rockford, IL, USA | 22662 | |
| SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate | Thermo Scientific | 34096 | |
| Halt Protease Inhibitor Cocktail (100x) | Thermo Scientific | 78429 | |
| Restore PLUS Western Blot Stripping Buffer | Thermo Scientific | 46430 | |
| Pierce Reversible Protein Stain Kit for PVDF Membranes | Thermo Scientific | 24585 | |
| 10 st - 4–20% Criterion TGX Gel, 18 well, 30 µL | Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA, USA | 567-1094 | |
| Immun-Blot PVDF Membrane | Bio-Rad | 162-0177 | |
| Precision Plus Protein Dual Color Standards | Bio-Rad | 161-0374 | |
| 2x Laemmli Sample Buffer | Bio-Rad | 161-0737 | |
| 10x Tris/Glycine | Bio-Rad | 161-0771 | |
| 2-Mercaptoethanol | Bio-Rad | 161-0710 | |
| Tween 20 | Bio-Rad | P1379-250ML | |
| Band analysis with Quantity One version 4.6.3.software | Bio-Rad | ||
| 1% phosphatase inhibitor coctail | Sigma-Aldrich, Saint Louis, Missouri, USA | ||
| Antibodies | |||
| mTOR (1:1,000) | Cell Signaling, Danvers, Massachusetts, USA | 2983 | |
| Akt (1:1,000) | Cell Signaling, Danvers | 9272 | |
| Secondary anti-rabbit and anti-mouse HRP-linked (1:10,000) | Cell Signaling, Danvers | ||
| Citrate synthase (CS) (1:1,000) | Gene tex, San Antonio, California, USA | ||
| OXPHOS (1:1,000) | Abcam, Cambridge, UK | ||
| Equipment - Analysis of muscle samples | |||
| Bullet Blender 1.5 for homogenizing | Next Advance, New York, USA | ||
| Plate reader | Tecan infinite F200 pro, Männedorf, Switzerland | ||
| Histochemistry | |||
| Mayer hematoxylin | HistoLab, Västra Frölunda, Sweden | 1820 | |
| Oil Red o | Sigma-Aldrich, Saint Louis, Missouri, USA | 00625-25y | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 793566-2.5 kg | |
| Cobalt Chloride | Sigma-Aldrich | 60818-50G | |
| Amylase | Sigma-Aldrich | A6255-25MG | |
| ATP | Sigma-Aldrich | A2383-5G | |
| Glycine | VWR-chemicals / VWR-international, Spånga, Sweden | 101196X | |
| Calcium Chloride | VWR-chemicals / VWR-international | 22328.262 | |
| Iso-pentane | VWR-chemicals / VWR-international | 24872.298 | |
| Etanol 96% | VWR-chemicals / VWR-international | 20905.296 | |
| NaOH | MERCK, Stockholm, Sweden | 1.06498.1000 | |
| Na acetate | MERCK | 1.06268.1000 | |
| KCl | MERCK | 1.04936.1000 | |
| Ammonium Sulphide | MERCK | U1507042828 | |
| Acetic acid 100% | MERCK | 1.00063.2511 | |
| Schiffs´ Reagent | MERCK | 1.09033.0500 | |
| Periodic acid | MERCK | 1.00524.0025 | |
| Chloroform | MERCK | 1.02445.1000 | |
| pH-meter LANGE | HACH LANGE GMBH, Dusseldorf, Germany | ||
| Light microscope | Olympus BH-2, Olympus, Tokyo, Japan | ||
| Cryostat Leica CM1950 | Leica Microsystems, Wetzlar, Germany | ||
| Leica software Leica Qwin V3 | Leica Microsystems | ||
| Gel Doc 2000 - Bio-Rad, camera setup | Bio-Rad Laboratories AB, Solna, Sweden | ||
| Software program Quantift One - 4.6 (version 4.6.3; Bio Rad) | Bio-Rad Laboratories AB, Solna, Sweden | ||
| Oral glucos tolerance test, OGTT | |||
| Glukos APL 75 g | APL, Stockholm, Sweden | 323,188 | |
| Automated analyser Biosen 5140 | EKF Diagnostics, Barleben, Germany | ||
| Insulin and C-peptide in plasma kit ELISA | Mercodia AB, Uppsala Sweden | 10-1132-01, 10-1134-01 | |
| Plate reader | Tecan infinite F200 pro, Männedorf, Switzerland | ||
| Further equipment | |||
| Measures of fat-free mass | FFM-Tanita T5896, Tanita, Tokyo, Japan | ||
| Strength training equipment for all training exercises | Cybex International Inc., Medway, Massachusetts, USA | ||
| Cycle ergometer | Monark Ergometer 893E, Monark Exercises, Varberg, Sweden | ||
| Heart rate monitor RS800, Polar | Polar Electro OY, Kampele, Finland | ||
| Oxycin-Pro - automatic ergo-spirometric device | Erich Jaeger GmbH, Hoechberg, Germany | ||
| Isokinetic dynamometer, Isomed 2000, knee muscle strength | D&R Ferstl GmbH, Henau, Germany | ||
| CED 1401 data acquisition system and Signal software | Cambridge Electronic Design, Cambridge, UK | ||
| Software for muscle strength analysis, Spike 2, version 7 | Signal Hound, LA Center, WA, USA | ||
| Statistica software for statistical analyses | Statistica, Stat soft. inc, Tulsa, Oklahoma, USA | ||
| Muscle biopsy equipment | |||
| Weil Blakesley conchotome | Wisex, Mölndal, Sweden | ||
| Local anesthesia | Carbocain, 20 mL, 20 mg/mL; Astra Zeneca, Södertälje, Sweden | 169,367 | |
| Surgical Blade | Feather Safety Razor CO, LTD, Osaka, Japan | 11048030 |
References
- Carrick-Ranson, G., et al. The effect of age-related differences in body size and composition on cardiovascular determinants of VO2max. J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 68 (5), 608-616 (2013).
- Peterson, C. M., Johannsen, D. L., Ravussin, E. Skeletal muscle mitochondria and aging: a review. J. Aging. 2012, 194821 (2012).
- Russell, A. P., Foletta, V. C., Snow, R. J., Wadley, G. D. Skeletal muscle mitochondria: a major player in exercise, health and disease. Biochim. Biophys. Acta. 1840 (4), 1276-1284 (2014).
- Conley, K. E., Jubrias, S. A., Esselman, P. C. Oxidative capacity and ageing in human muscle. J. Physiol. 526 (Pt 1), 203-210 (2000).
- Holloszy, J. O. Adaptation of skeletal muscle to endurance exercise. Med. Sci. Sports. 7 (3), 155-164 (1975).
- Menshikova, E. V., Ritov, V. B., Fairfull, L., Ferrell, R. E., Kelley, D. E., Goodpaster, B. H. Effects of exercise on mitochondrial content and function in aging human skeletal muscle. J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 61 (6), 534-540 (2006).
- Balakrishnan, V. S., et al. Resistance training increases muscle mitochondrial biogenesis in patients with chronic kidney disease. Clin. J. Am. Soc. Nephrol. 5 (6), 996-1002 (2010).
- Ferrara, C. M., Goldberg, A. P., Ortmeyer, H. K., Ryan, A. S. Effects of aerobic and resistive exercise training on glucose disposal and skeletal muscle metabolism in older men. J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 61 (5), 480-487 (2006).
- Frontera, W. R., Meredith, C. N., O'Reilly, K. P., Evans, W. J. Strength training and determinants of VO2max in older men. J. Appl. Physiol. (1985). 68 (1), 329-333 (1990).
- Toth, M. J., Miller, M. S., Ward, K. A., Ades, P. A. Skeletal muscle mitochondrial density, gene expression, and enzyme activities in human heart failure: minimal effects of the disease and resistance training. J. Appl. Physiol. (1985). 112 (11), 1864-1874 (2012).
- Zachwieja, J. J., Toffolo, G., Cobelli, C., Bier, D. M., Yarasheski, K. E. Resistance exercise and growth hormone administration in older men: effects on insulin sensitivity and secretion during a stable-label intravenous glucose tolerance test. Metabolism. 45 (2), 254-260 (1996).
- Davidson, L. E., et al. Effects of exercise modality on insulin resistance and functional limitation in older adults: a randomized controlled trial. Arch. Intern. Med. 169 (2), 122-131 (2009).
- DeFronzo, R. A., Tobin, J. D., Andres, R. Glucose clamp technique: a method for quantifying insulin secretion and resistance. Am. J. Physiol. 237 (3), E214-E223 (1979).
- Åstrand, P. O., Ryhming, I. A nomogram for calculation of aerobic capacity (physical fitness) from pulse rate during sub-maximal work. J. Appl. Physiol. 7 (2), 218-221 (1954).
- Björkman, F., Ekblom-Bak, E., Ekblom, Ö, Ekblom, B. Validity of the revised Ekblom Bak cycle ergometer test in adults. Eur. J. Appl. Physiol. 116 (9), 1627-1638 (2016).
- Seger, J. H., Westing, S. H., Hanson, M., Karlson, E., Ekblom, B. A new dynamometer measuring eccentric and eccentric muscle strength in accelerated, decelerated and isokinetic movements: validity and reproducibility. Eur. J. Appl. Physiol. 57 (5), 526-530 (1988).
- Westing, S. H., Seger, J. Y., Karlson, E., Ekblom, B. Eccentric and concentric torque-velocity characteristics of the quadriceps femoris in man. Eur. J. Appl. Physiol. 58 (1-2), 100-104 (1988).
- Aagaard, P., Simonsen, E. B., Andersen, J. L., Magnusson, P., Dyhre-Poulsen, P. Increased rate of force development and neural drive of human skeletal muscle following resistance training. J. Appl. Physiol. 93 (4), 1318-1326 (2002).
- Andersen, L. L., Aagaard, P. Influence of maximal muscle strength and intrinsic muscle contractile properties on contractile rate of force development. Eur. J. Appl. Physiol. 96 (1), 46-52 (2006).
- Henriksson, K. G. "Semi-open" muscle biopsy technique. A simple outpatient procedure. Acta Neurol. Scand. 59 (6), 317-323 (1979).
- Matsuda, M., DeFronzo, R. A. Insulin sensitivity indices obtained from oral glucose tolerance testing: comparison with the euglycemic insulin clamp. Diabetes Care. 22 (9), 1462-1470 (1999).
- American Diabetes, Association. Diagnosis and classification of diabetes mellitus. Diabetes Care. 28, Suppl 1. S37-S42 (2005).
- Moberg, M., Apró, W., Ekblom, B., van Hall, G., Holmberg, H. C., Blomstrand, E. Activation of mTORC1 by leucine is potentiated by branched-chain amino acids and even more so by essential amino acids following resistance exercise. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 310 (11), C874-C884 (2016).
- Antharavally, B. S., Carter, B., Bell, P. A., Krishna Mallia,, A, A high-affinity reversible protein stain for Western blots. Anal. Biochem. 329 (2), 276-280 (2004).
- Brooke, M. H., Kaiser KK, Muscle fiber types: how many and what kind? Arch. Neurol. 23 (4), 369-379 (1970).
- Brooke, M. H., Kaiser, K. K. Three "myosin adenosine triphosphatase" systems: the nature of their pH lability and sulfhydryl dependence. J. Histochem. Cytochem. 18 (9), 670-672 (1970).
- Andersen, P. Capillary density in skeletal muscle of man. Acta Physiol. Scand. 95 (2), 203-205 (1975).
- Frank, P., Andersson, E., Pontén, M., Ekblom, B., Ekblom, M., Sahlin, K. Strength training improves muscle aerobic capacity and glucose tolerance in elderly. Scand. J. Med. Sci. Sports. 26 (7), 764-773 (2016).
- Blomstrand, E., Celsing, F., Fridén, J., Ekblom, B. How to calculate human muscle fibre areas in biopsy samples--methodological considerations. Acta Physiol. Scand. 122 (4), 545-551 (1984).
- Cuthbertson, D., et al. Anabolic signaling deficits underlie amino acid resistance of wasting, aging muscle. FASEB J. 19 (3), 422-424 (2005).
- Vincent, K. R., Braith, R. W., Feldman, R. A., Kallas, H. E., Lowenthal, D. T. Improved cardiorespiratory endurance following 6 months of resistance exercise in elderly men and women. Arch. Intern. Med. 162 (6), 673-678 (2002).
- Cadore, E. L., et al. Effects of strength, endurance, and concurrent training on aerobic power and dynamic neuromuscular economy in elderly men. J. Strength Cond. Res. 25 (3), 758-766 (2011).
- Jubrias, S. A., Esselman, P. C., Price, L. B., Cress, M. E., Conley, K. E. Large energetic adaptations of elderly muscle to resistance and endurance training. J. Appl. Physiol. (1985). 90 (5), 1663-1670 (1985).
- Benton, C. R., Wright, D. C., Bonen, A. PGC-1alpha-mediated regulation of gene expression and metabolism: implications for nutrition and exercise prescriptions. Appl. Physiol. Nutr. Metab. 33 (5), 843-862 (2008).
