Abstract
פרוטוקול זה מתאר מודל עכבר צינתור המרכזי של מחלות קשות ממושכות. אנו משלבים את קשירת cecal ו לנקב שיטה לגרום לאלח דם עם שימוש קו ורידים מרכזי עבור נוזלים, תרופות ומנהל מזין לחקות את ההגדרה הקלינית בבני האדם. האנושות חולה דורש תמיכה רפואית אינטנסיבית על מנת לשרוד. בעוד שרוב המטופלים יתאושש תוך מספר ימים, כרבע מהחולים זקוקים לטיפול נמרץ ממושך נמצאים בסיכון גבוה למות הלא לפתרון כשל איברים מרובים. יתר על כן, בשלב הממושך של מחלה קשה hallmarked בחולשת שרירים עמוקה, ו האנדוקרינית שינויים מטבוליים, מתוכם בפתוגנזה כיום מובנת. המודל החי הנפוץ ביותר במחקר בטיפול נמרץ הוא מודל קשירת לנקב cecal לגרום לאלח דם. זהו מודל מאוד לשחזור, עם שינויים דלקתיים אקוטיים המודינמי דומים ספטמבר האנושיאחותי, אשר נועדה לבחון את השלב האקוטי של מחלה קריטית. עם זאת, המודל הזה הוא בסימן ידי הקטלניות גבוהות, אשר שונה מן המצב האנושי הקליני, והוא לא פותחים כדי ללמוד את שלב הממושך של מחלות קשות. לכן, אנו להתאים את הטכניקה על ידי הצבת צנתר ורידי מרכזי וריד הצוואר מאפשר לנו לנהל טיפול תומך רלוונטי קליני, כדי טוב יותר לחקות את המצב הקליני האנושי של מחלות קשות. במודל של עכברים זה דורש הליך כירורגי נרחב לטיפול נמרץ יומי של החיות, אבל התוצאה היא מודל רלוונטי של השלב החריף והמתמשך של מחלות קשות.
Introduction
מחלות קשות היא מדינה מחלה שבה פונקציה של מערכות איבר אחד או יותר נפגעת עד כדי כך שהחולה ימות, אלא אם כן תמיכה רפואית אינטנסיבית מנוהל. בעוד הגורם הראשוני להתקבל ליחידה לטיפול נמרץ (ICU) יכול להשתנות, החל טראומה, ניתוח מסובך, כוויות, התלקחויות המחלה אלח דם, כל חולים אנושים סובלים נזק לתאים, הנגרם על ידי hypoperfusion, היפוקסיה ו דלקת מופרזת בין היתר , אשר מוביל כשל איברים. רוב המטופלים לשרוד העלבון החריף שלהם, אלא חלק חשוב של המטופלים לא מייד לשחזר וזקוק לטיפול נמרץ ממושך. הם נמצאים בסיכון גבוה לתמותה עקב אי-פתרון כשל איברים מרובים. יתר על כן, בשלב ממושך של מחלה קשה hallmarked בחולשת שרירים עמוקים האנדוקרינית שינוי מטבולי, מתוכם בפתוגנזה כיום מובנת.
r כמהמודלי odent נמצאים בשימוש בסביבת המחקר בטיפול הנמרצת. שני המודלים בעיקר בשימוש הן הממשל אקסוגני של lipopolysaccharide (LPS) ו קשירת cecal ו לנקב (CLP). שני הדגמים מפותחים לחקות את השלב האקוטי של אלח דם, המוגדר תפקוד איבר מסכנות חיים שנגרם על ידי תשובת מארח dysregulated לזיהומים, ועל אחת הסיבות העיקריות להתקבל לטיפול הנמרץ ברחבי עולם 1, 2. מודל LPS יש כמה חסרונות כמו זה רק זמנים משפיע על השחרור של ציטוקינים המעמד המודינמי של החיה 3. בניגוד לבני האדם, מכרסמים הם גם במיוחד עמידים בפני רעלן פנימי והשימוש "במינונים גבוהים" של רעלן פנימי יש צורך לייצר תת לחץ דם ותמותה, בזאת נוספת מעלה חששות בדבר תוקפה של שיטה זו 4, 5. המודל השני, קשירת cecal ודגם לנקב (CLP)כולל קשירה של חלק cecum ואחריו ניקור מחט דרך-ו-דרך. הליך זה גורם לזיהום בטן polymicrobial עם נזק לרקמות, ואחריו טרנסלוקציה של חיידקים לתוך תא דם. זה יגרור תגובה דלקתית מערכתית והפיתוח של אלח דם. מודל CLP הוכר בהרחבה כמו במודל חיה של מחלות קשות חריפות שמעתיקות את המאפיינים העיקריים של אלח דם: hyperinflammation, התרחבות, תת לחץ דם ותפוקת לב מוגבר 6, 7. עם זאת, מודל זה אינו מאפשר לימוד של כשל איברים מרובה שאינו לפתרון, שריר מבזבז, ו האנדוקרינית שינויים מטבוליים, אופייניים לשלב הממושך של מחלות קשות. יתר על כן, לאחרונה את תוקפו של מודלי עכבר עבור מחלות קשות נחקר, שכן ממצאים ממודלי עכבר לא יכולים תמיד להיות מתורגם אדם הגדרת 8, 9, 10. הסבר אפשרי יכול להיות כי טיפול תומך המסופק באופן ביקורתי חולים אנושיים חולה שונה באופן מהותי מן הטיפול שניתן לעכברים אנושים.
לכן, כדי להידמות המערכת האנושית יותר מקרוב כדי לאפשר חקירה של השלב הממושך של מחלות קשות, פתחנו מודל עכבר המחקה את לטיפול הנמרץ החריף כפי שניתן לבני אדם, כגון ממשל נוזל תוך ורידי נרחב וטיפול אנטיביוטי, ואשר מאפשר לנהל טיפול תומך כדי לשרוד את שלב הממושך של מחלות קשות, כגון תמיכה תזונתית. לשם כך, מתאמנים במודל העכבר של אלח דם CLP-Induced, להיות סטנדרט הזהב עבור אלח דם, והנחתי קו ורידים מרכזי המאפשר הממשל של נוזלים, תזונה ותרופות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
הפרוטוקול אושר על ידי האוניברסיטה של מועצה לביקורת אתית לובן למחקר בבעלי החיים.
1. הכנת הקו ורידי
- הכן את קצה הצנתר ורידי ידי טבילה החלק האמצעי במהירות של 60 ס"מ microrenathane (MRE) צינורות ב חם (> 220 ° C) שמן שומשום. לאחר מכן למתוח את החלק האמצעי של הצינור כדי לייצר בקוטר צר (קוטר חיצוני (OD) <0.5 מ"מ) על ידי הזזת הקצוות בעדינות של צינורות אחד מהשני.
- השתמש בלהב סכין המנתחים כדי לחתוך את צינורות לשני חלקים של 30 ס"מ כל אחת (ראה איור 1, טבלה 1).
- חבר את צינורות MRE כדי PE10 צינורות פוליאתילן באמצעות מחבר PE50 פוליאתילן ולהתחבר בצינור PE10 זה החלק התחתון של המסתובב. חבר את החלק העליון של המסתובב כדי בצינור PE10, ולחבר את זה מחט בדל Luer עם מחבר צינורות PE50 לפי איור 1.
- החל חזק מהיר acting דבק דבק לכל החיבורים ולבדוק את הקטטר עבור דליפה ידי שטיפה עם אוויר. גז לעקר את הקטטר לפני השימוש.
איור 1: בניית קו ורידי. קווי ורידים מוכנים על ידי מתיחת צינורות MRE לקוטר קטן וחיבורו באמצעות צינורות פוליאתילן למכשיר מסתובב מכרסם. ראה טבלה 1 לקבלת הוראות באורכים של חלקים שונים. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.
| אגדה | אורך | כֶּרֶך |
| 1) תלוש Luer מחט 22G | ||
| 2) PE50 - פוליאתילן 0.023" x 0.038" | 5 ס"מ | 13 μL |
| 3) PE10 - פוליאתילן 0.011" x 0.024” | 50 ס"מ | 30 μL |
| 4) מכרסמים סיבוב 20 G | ||
| 5) PE-10 | 15 ס"מ | 9 μL |
| 6) PE-50 (מחבר) | 5 ס"מ | 13 μL |
| 7) MRE025 טיפ נמתח microrenathane 0.025" x 0.012" | 30 ס"מ | 27 μL |
| סכום כולל | 105 ס"מ | 92 μL |
טבלה 1: בניית ורידי הקו. טבלה זו כוללת אגדה עבור איור 1.
2. הרדמה וטיפול ניתוח Pre
- השתמשו הישן 24 שבועות זכר C57BL / 6J (27 - 32 גרם).
הערה: אנו משתמשים בעכברים 24-בן כמה שבועות (מבוגר בוגר) כמו גיל זה מתאים יותר עם הגיל הממוצע של החולים לטיפול נמרץ. אנו משתמשים עכברי זכרים בלבד, כדי למנוע את ההשפעה המחזורית של אסטרוגנים. הטכניקה יכולה לשמש גם על בעלי חיים צעירים (נבדקו בעכברים ישנים 16 שבועות) ונקבות, אם עדיף. - לעקר את כל מכשירי הניתוח לפני השימוש. שטוף את צנתר ורידי סטרילית תוצרת הבית עם מלח כדי להסיר בועות אוויר כדי לבדוק patency ו דליפות פוטנציאליות.
- חותכים חוט מתכת (קוטר 0.8 מ"מ) באורך 80 ס"מ, להכפיל אותו על ידי קיפול ולעשות לולאה. עופרת 3 פנינים על החוט הכפיל את הלולאה. צרף את הקטטר אל חוט מתכת על ידי המנחה את קצה הצנתר דרך 3 הפנינים.
הערה: תיל מצורף מתכת הכרחי עבור סיבוב של המסתובב שאליו קטטר מחובר. ככזה, העכבר יכול לנוע בחופשיות, מבלי לחסום את הקו ורידי. - להרדים את מ 'על יד הבית על ידי זריקה intraperitoneal (IP) של תערובת של 0.03 קטמין מ"ל (100 מ"ג / ק"ג) ו 0.02 מ"ל xylazine (13 מ"ג / ק"ג). ודא ההרדמה כי היא נאותה על ידי בדיקת העדר רפלקסים. משוך בעדינות את לשון העכבר בחוץ עם מלקחיים כדי למנוע מחנק על ידי בליעה של הלשון.
הערה: אם לאחר 10 דקות, העכבר עדיין מנסה למשוך הגפיים שלה לתת קטמין נוסף כמו בולוס 0.01 מיליליטר. - לגלח את אזור הניתוח כולל הבטן, בצד הגחון של הצוואר (משולש בין הסנטר, עצם החזה ואת עצם הבריח), ובין השכמות בבסיס הראש).
- מניחים את העכבר שכיבה על כרית חימום מחומם מראש, לחטא את העור עם אתנול 70% ולהחיל כמות קטנה של חומר סיכה עיניים כדי להגן על העיניים מפני התייבשות. חדור באתרי כירורגי (הבטן, הצוואר-מלפנים ומאחור) עם 0.2 ropivacaine מ"ל (0.67 מ"ג / ק"ג).
- בעוד העכבר עדיין במצב מועדים, לעשות חתך קטן בבסיס של הצד הגבה של הראש עם אזמל או מספריים. לחשוף את שרירי צוואר הרחם אחורי, ולקשור את השריר כדי הלולאה של החוט מצורף עם 3.0 ניילון ידי מובילים חוט 3.0 ניילון מתחת לשריר.
- מניחים את העכבר על הצד הימני שלה. ביצוע חתך אנכי קטן בעור הצוואר הגחון עם אזמל או מספריים. תחת הדרכתו ויזואלי, מנהרה תת-עורית מחט 18-מד דרך חתך הגחון זה כלפי חתך בגב עשה בעבר ולהשחיל את הצנתר דרך המחט אל exteriorize אותו בצד הגחון.
- מניחים את העכבר על הגב שלה. Pass חוט 3.0 ניילון מאחורי השיניים החותכות העליונות של העכבר ואת הקלטת אותה למטה אל כרית החימום. אבטח את הראש בתוך מסיכת פנים עבור אספקת חמצן (2 L / min). תקן את העכבר בעמדה נמתחה על ידי מקליט את הזנב ואת שני forelimbs.
הערה: אם הרדמה-xylazine קטמין לבדו אינו מספיק, isoflurane בשאיפה (0.5 - 1.5%) ניתן למסור במהלך הניתוח.
class = "jove_title"> 3. החדרת צנתר שכינה כרונית
- מניחים את העכבר תחת מיקרוסקופ לנתח. בשנת החתך שנעשה בעבר בצוואר הגחון, להקניט רקמת שומן בעדינות ובלוטות משם עם מלקחיים עד וריד הצוואר ניתן דמיין.
- בבוטות לנתח לשחרר את וריד הצוואר מן רקמת חיבור תת עורית מעל ומסביב הכלי ידי צבת קצה המלקחיים בין הווריד ורקמת חיבור ופתיחת המלקחיים שוב ושוב במקביל הווריד. ככזה, ניזק הווריד יימנע.
- לבודד את וריד הצוואר על ידי הצבת מלקחיים בוטים תחת הווריד. Feed שלוש חתיכות של חוט 3.0 משי תחת הווריד, עמדת הפרוקסימלי חתיכה אחת אל ההסתעפות של וריד הצוואר (ליגטורה גולגולתי) ואחד חתיכה קרובה לשריר sternocleidomastoid (ליגטורה זנב). הדקו את ליגטורה גולגולתי ואת ליגטורה הזנב כדי למתוח את הווריד ולמנוע דימום יתר תוך שימת הקטטר. Tכלומר ליגטורה רופפת עם החוט באמצע כדי להבטיח הבטחה קלה של קטטר בהמשך.
- בעזרת מספריים מיקרו, עושים חתך לאורך הוריד בין ליגטורה גולגולתי ואת הזנב וגדולים מספיק כדי לעבור את הקטטר. תפוס את הקטטר עם מלקחיים, ולהכניס את הקטטר 11 מ"מ לתוך הווריד. רופף לאבטח את הקטטר על ידי קשירה את ליגטורה באמצע ולאשר מיקום נכון על ידי שטיפה בעדינות עם מלח סטרילית.
- Secure את הקטטר ידי בחוזקה קשירת את ליגטורה באמצע הזנב סביב הספינה ואת הקטטר. עניבה מסתיימת של ליגטורה זנב ואת באמצע יחד כדי לאבטח את הקטטר בתקיפות. ודא כי הקשרים לא לחסום את העורק, על ידי שטיפה הקטטר לאחר כל קשר עשה. לבסוף, לקשור את הזנב ואת ליגטורה גולגולתי. סגירת החתך עם 5.0 תפרי משי.
4. Cecal קשירת נקר
- ביצוע חתך קו האמצע 1 ס"מ דרך העור של החצי התחתון של הבטן עם אזמל או מספריים;להיזהר לא לחדור לתוך חלל הצפק.
- זהה את Linea alba של שרירי הבטן ולעשות חתך intermuscular כדי לקבל כניסה לתוך חלל הצפק. אתר את cecum, להשתמש במלקחיים אנטומיים בוטה לבודד את cecum ו exteriorize זה.
- ולקשור cecum ב 50% מאורכו עם 3.0 תפרי משי. ודא שלא ולקשור את שסתום ileocecal כך משכיות מעי נשמרות.
- לחורר את cecum עם מחט 18-מד ידי יחיד דרך-ו-דרך באמצע הדרך ניקור בין קשירת קצה cecum. לאחר הסרת המחט, extrude כמות קטנה של צואה מן החור כדי להבטיח patency.
- מיקום מחדש של המעי בחלל הבטן, ולסגור את הצפק עור עם 5.0 תפרי משי.
הערה: בממוצע, מתמחה חדשה דורשת 10 עד 15 בעלי חיים כדי להיות מסוגל חלקה למקם את צנתר ורידי ולבצע CLP בתוך 45 דקות. לאחר תקופת הכשרתו, רלה הרדמה / ניתוחניתן לצפות תמותה של 10% טד.
5. טיפול לאחר ניתוח החייאה נוזלת
- מניח את העכבר במצב שכיבה ולאבטח את הקטטר אל החוט המצורף עם קלטת. הזיזו את העכבר לכלוב הפרט. השתמש דוכן עם מהדק מתכווננת להחזיק את המכשיר מסתובב 25 סנטימטרים מעל העכבר ובתקיפות קלטו את החלק החופשי של החוט המצורף מתכת לנקודת הסיבוב של המסתובב.
- צרף מזרק המכיל התערובת של קולואידים מאוזן crystalloids (1: 4) אל קו הוורידים כדי להתחיל החייאה נוזלת.
- מניחים את הכלוב בטמפרטורה מבוקרת (27 מעלות צלזיוס) ארון חיה עם 12 h אור מחזורים כהה ולהתחיל החייאה נוזל תוך ורידי (10 מ"ל / ק"ג / שעה) באמצעות משאבת אינפוזיה מדויק מונחה מזרק. ספק העשרה כלוב כגון חומר קינון ו בלוק עץ.
6. טיפול נמרץ
- בשעה 6 שעות לאחר הניתוח, תת-עורית להזריק כאב medication ואנטיביוטיקה (0.3 עצירות מ"ל (0.15 מ"ג / ק"ג) ו 0.2 אימיפנם מ"ל (16.67mg / ק"ג)). הערה: בעקבות לעסוק ברפואה בחיות מעבדה סטנדרטית, המנה הראשונה של תרופות כאב ניתנת לפני החתך הניתוחי הראשוני ולאחר מכן על פי הוראותיה של מדיניות הווטרינרים של המוסד. זריקות תת עוריות צריך להיות מוזרק בזהירות לתוך החלל התת-עורית.
- אחרי 20 - 24 שעות של החייאה נוזל, להחליף את crystalloids / קולואידים ידי תזונה parenteral הכולל (6.67 מ"ל / ק"ג / שעה).
הערה: תזונת parenteral סה"כ מנוהלת (5.8 קק"ל / 24 h) משתרעת על כ 40% מכלל הקלוריות היומיות של עכברים, דומי צריכת הקלוריות מוקדם של מטופלים ביחידה לטיפול הנמרצת. - תת-עורית לנהל משככי כאבים ואנטיביוטיקה (0.6 עצירות מ"ל (0.3 מ"ג / ק"ג) ו 0.2 אימיפנם מ"ל (16.67 מ"ג / ק"ג) כל 12 h בתקופת שלמה של מחלות קשות.
- בדוק את החיות לפחות כל 3 h במהלך היום. להעריך את הסבל על ידי מתן כאבניקוד המבוססת על סולם העוויה העכבר תוקף 11. להגביר פיקוח על בעלי חיים עם ציון כאב גבוה.
7. בסוף הניסוי
הערה: אישור והמלצות על רמת החומרה של מודל הנחיות ומדיניות למחשבי קצה אנושי יש לבקש דירקטוריון הסקירה המוסדי המקומי האתי למחקר בבעלי החיים.
הערה: במקרה של קו ורידים מתפקד כמו קטטר החסום, delocalization של הקטטר, בעיות עם משאבת המזרק, החיה מהמחקר ו מורדם.
- בתום תקופת הניסוי, עמוק להרדים את העכבר באמצעות תערובת של 0.03 קטמין מ"ל (100 מ"ג / ק"ג) ו 0.02 מ"ל (13 מ"ג / ק"ג) xylazine. להרדים את העכבר על ידי משיכת הדם על ידי לנקב לב. חנות צמד דגימות רקמה קפוא של ריבית -80 מעלות צלזיוס.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
עכברים C57BL / 6 נעשו אנושים כמתואר לעיל. ביצענו שני ניסויים להעריך ההישרדות שלאחר CLP עד שתי נקודות זמן: הישרדות עד יום 5 (n = 15) והישרדות עד 7 ימים (n = 22) שלאחר CLP. עקומות הישרדות של שני ניסויים לא היו שונות משמעותי (לעומת עד היום 5), המציינים את השחזור של סביבת הניסוי. -לשרוד ללא חיות נמצאו מוות או מורדמים בשל הקצה האנושי להגיע. קשירת 50% של cecum בשילוב עם אנטיביוטיקה, החייאה נוזל ותזונה parenteral הכולל באמצעות צנתר ורידי בתוך jugularis הנבוב, כמתואר, הביאה לתמותה 13% לאחר 1 יום של מחלות קשות, 24% תמותה לאחר 3 ימים של מחלות קשות, 27 - 31 תמותת% לאחר 5 ימים של מחלה קריטית 36% לאחר 7 ימים של מחלה קריטית. עכברי זוג הניזונים הבריאים, אשר היו קלורי מוגבל הקלורית של האנושותעכברים חולים, לא הראו שום תמותה.
איור 2: Curves הישרדות לאחר 5 או 7 ימים של מחלות קשות. לא הייתה שום תמותה בקבוצת חיות בריאות (A, B, קו מקווקו - חיים בריאים ללא ניתוח). חמישה ימים לאחר הניתוח (א), שיעור התמותה היה 27% (קו מוצק). שבעה ימים לאחר אינדוקציה של אלח דם (B), שיעור התמותה היה 36%. עכברים עם דולף או צנתרים וחלצו הוצאו מהניסוי (15%). אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
פתחנו מודל עכבר רלוונטי יותר קליני של מחלות קשות, על ידי שילוב של שיטת קשירת לנקב cecal לגרום לאלח דם עם שימוש קו ורידים מרכזי עבור נוזלים, תרופות ומנהל מזין. התקנה ניסיונית זו ניתנת לשחזור, מאפשר ללמוד את שלב הממושך של מחלה ותוצאות קריטיות שיעור תמותה יציב, בזאת מחקה את מצב 1 הקליני בבני האדם.
קשירה ו לנקב Cecal הוכר בהרחבה כמו במודל חיה של מחלות קשות חריפות שמעתיקות את המאפיינים העיקריים של ספסיס 6, 7. עם זאת, מודל זה של מחלות קשות חריפות אינו מאפשר לימוד כשל אי-פתרון מרובה איברים, שרירי בזבוז, ו האנדוקרינית שינויים מטבוליים, אופייניים לשלב הממושך של מחלות קשות. יתר על כן, הממצאים הפרה-קליניים עם המודל הזה לעיתים קרובות אינם מצליחים Translatדואר אל האדם הקליני לקביעת 8, 9, 10. לכן, פיתחנו מודל שבו הצבת קו ורידי מרכזי מאפשר לחוקר לנהל החייאה נוזל נרחב, תרופות ותזונה parenteral הכולל. וצעדים תומכים אלה הם בעלי חשיבות חיונית עבור חולים אנושים כדי לשרוד את השלב האקוטי של מחלה קריטית. למרות המיקום של קו ורידי מרכזי זה, בעלי החיים הם עדיין מסוגלים לנוע בחופשיות עם נוחות קלה יחסית. משככי כאבים יומיים מסייעים להקל על סבל, כפי שהוערכו על ידי סולם עווית עכבר של כאב 11. גם מודל זה משלב היבטים חיוניים אחרים של טיפול תומך לחולים אנושים, כגון טיפול אנטיביוטי ותרופות לשיכוך כאב.
מודל זה מספר מגבלות. ראשית, ההליך הכירורגי הנרחב הוא תובעני ודורש הכשרה מספקת. לעולם לאtheless, עם הכשרה מספקת, בממוצע 10% מבעלי החיים המופעלים למות במהלך או מיד לאחר הניתוח. יתר על כן, צנתרים שאינם ממוקמים כראוי, יכולים להוביל דליפה של נוזלי החייאה או תזונת parenteral לתוך בית החזה של החיה. בממוצע, 15% של בעלי חיים ששרדו צריכים להיות שליליים במהלך המחקר עקב נסיבות הקשורות קטטר אלה. לפיכך, כאשר אחד מחשב את המספר הדרוש של בעלי חיים עבור ניסוי, יש לקחת בחשבון עודף 25% עקב ניתוח והפסדים הקשורים קטטר. שנית, עם רק אחד נקודת גישה ורידי, אנטיביוטיקה ותרופות לשיכוך כאב עדיין צריך להיות תת-עורית פעמיים ביום. ואכן, תאימות של תזונה parenteral עם אנטיביוטיקה ותרופות משככי כאבים לא ניתן להבטיח, ולכן-עירוי שיתוף יש להימנע. פלאשינג של הקו ואחריו הזרקת בולוס גם מבחינה טכנית לא אפשרי בשל נפח דם מוגבלת של עכברים. שלישית, לא ההרדמה זקוק לניתוחo למקם את הקטטר יניעו תגובת דחק חמורה בפני עצמה. אנו משתמשים בבעלי חיים בריאים ללא ניתוח כפקדים, ולשקול את הניתוח הקשורים קטטר כחלק של מחלות קשות, דומה למה חולי טיפול נמרץ כירורגי אדם צריך לסבול. רביעית, ואילו משככי כאבים שלאחר ניתוח ואנטיביוטיקה ושימוש קו ורידי מרכזי על מנת לאפשר ניהול של תזונת parenteral מגביר את הרלוונטיות הקלינית של מודל CLP בעכברים, המודל שלנו עדיין לא לחקות את המצב האנושי הקליני לחלוטין. ואכן, בשל גודל החיה הקטן עשויים להתקשות להציג מספר טכניקות תומכות מתקדמות, כגון טיפול כלייתי חליפי. עם זאת, השימוש במודל זה מאפשר התערבות גנטית, חיוני בחשיפה בפתוגנזה של מחלות קשות.
הוכח כי התמותה וחומרת ההליך CLP ניתן להשפיע, אם יראו צורך בכך, על ידי החלק של cecum כי הוא ligated, על ידי גודל numבער דקירות, החייאה נוזלת תת עורית ומנהל אנטיביוטי יומי 6, 12. אנחנו בוחרים פרוטוקול שבו סיפקנו החייאה נוזל נרחב ב 10 מ"ל / ק"ג / שעה עבור 20 h הראשון, כפי שהוא כבר הוכיח בעבר כי זה משפר תמותה 13. העיבודים שלנו צריכים להיות משולבים בתוך הפרוטוקול אם מודל של מחלה קריטית ממושכת הוא רצוי במקום מודל של הקטלניות. מודל עכבר זו משתמש CLP באמצע כיתה, החייאת נוזל תוך ורידים וטיפול אנטיביוטי כדי ליצור מודל רלוונטי יותר קליני של מחלות קשות, כפי שמוצג על ידי עקומות ההישרדות הממושכות שלה אשר מחקה את שיעור ההישרדות של אלח דם 1 אנושי. אוכלוסיית חולי טיפול הנמרץ, כמו האוכלוסייה הכללית, מזדקנת 14. כדי לחקות את הגדרת ICU אדם אפילו יותר מקרוב, אפשר להשתמש בעכברים בוגרים (6 חודשים), כפי שמוצג במחקר זה, אודר לשפר את הרלוונטיות הקלינית של המודל הניסיוני.
לסיכום, מודל העכבר הזה דורש הליך כירורגי נרחב לטיפול נמרץ יומי של החיות, אבל תוצאה הוא מודל של מחלות קשות, אשר מאפשר לחוקר לבחון את ההיבטים של השלב הממושך של מחלות קשות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Buprenorphine | Ecuphar | Vetergesic 0.3 mg/mL | |
| C57BL/6 | Janvier labs | C57BL/6JRj | |
| colloids | Fresenius Kabi | Volulyte 6% | |
| crystalloids | Baxter | Plasmalyte a viaflo | |
| Ethilon 3.0 | Ethicon | F3211 | |
| Imipenem | MSD | Tienam 500 mg powder for injection fluid | |
| Isoflurane | Eurovet | Iso-vet | |
| Ketamine | Eurovet | Nimatek 100 mg/mL | |
| LocTite Super glue3 all plastics | Rectavit | 119818 | |
| Mersilk 3.0 | Ethicon | L192 | |
| Mersilk 5.0 | Ethicon | F682 | |
| Microrenathane .025" O.D. x .012" I.D. | Bioseb | MRE-025 | |
| olimel N7E | Baxter | ||
| PE10 - Polyethylene .011" x .024" | Instech Solomon | BTPE-10 | |
| PE-50 tubing .023" x.038" | Instech Solomon | BTPE-50 | |
| Rodent Swivel 20 G | Bioseb | RS-20G | |
| Ropivacaïne | Astrazenica | Naropin 2 mg/mL | |
| Xylazine | VMD | Xylazine hydrochloride 2% |
References
- Angus, D. C., van der Poll, T. Severe sepsis and septic shock. N Engl J Med. 369 (9), 840-851 (2013).
- Singer, M., et al. The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3). JAMA. 315 (8), 801-810 (2016).
- Remick, D. G., Newcomb, D. E., Bolgos, G. L., Call, D. R. Comparison of the mortality and inflammatory response of two models of sepsis: lipopolysaccharide vs. cecal ligation and puncture. Shock. 13 (2), 110-116 (2000).
- Copeland, S., et al. Acute inflammatory response to endotoxin in mice and humans. Clin Diagn Lab Immunol. 12 (1), 60-67 (2005).
- Seok, J., et al. Genomic responses in mouse models poorly mimic human inflammatory diseases. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (9), 3507-3512 (2013).
- Rittirsch, D., Huber-Lang, M. S., Flierl, M. A., Ward, P. A. Immunodesign of experimental sepsis by cecal ligation and puncture. Nat Protoc. 4 (1), 31-36 (2009).
- Zolfaghari, P. S., Pinto, B. B., Dyson, A., Singer, M. The metabolic phenotype of rodent sepsis: cause for concern. Intensive Care Med Exp. 1 (1), 25 (2013).
- Radermacher, P., Haouzi, P. A mouse is not a rat is not a man: species-specific metabolic responses to sepsis - a nail in the coffin of murine models for critical care research. Intensive Care Med Exp. 1 (1), 26 (2013).
- Dyson, A., Singer, M. Animal models of sepsis: why does preclinical efficacy fail to translate to the clinical setting. Crit Care Med. 37 (1 Suppl), S30-S37 (2009).
- Osuchowski, M. F., et al. Abandon the mouse research ship? Not just yet. Shock. 41 (6), 463-475 (2014).
- Langford DJ1, B. A., Chanda, M. L., Clarke, S. E., Drummond, T. E., Echols, S., Glick, S., Ingrao, J., Klassen-Ross, T., Lacroix-Fralish, M. L., Matsumiya, L., Sorge, R. E., Sotocinal, S. G., Tabaka, J. M., Wong, D., van den Maagdenberg, A. M., Ferrari, M. D., Craig, K. D., Mogil, J. S. Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse. Nat Methods. 7, (2010).
- Hollenberg, S. M., et al. Characterization of a hyperdynamic murine model of resuscitated sepsis using echocardiography. Am J Respir Crit Care Med. 164 (5), 891-895 (2001).
- Heuer, J. G., et al. Cecal ligation and puncture with total parenteral nutrition: a clinically relevant model of the metabolic, hormonal, and inflammatory dysfunction associated with critical illness. J Surg Res. 121 (2), 178-186 (2004).
- Conti, M., Merlani, P., Ricou, B. Prognosis and quality of life of elderly patients after intensive care. Swiss Med Wkly. 142, (2012).
