Abstract
Detta protokoll beskriver en centralt kateteriserad musmodell av förlängd kritisk sjukdom. Vi kombinerar cecal ligation och punktering metod för att framkalla sepsis med hjälp av en central venkateter för vätskor, läkemedel och närings administration för att efterlikna den mänskliga klinisk miljö. Kritiskt sjuka patienter kräver intensiv medicinsk support för att överleva. Medan majoriteten av patienterna kommer att återhämta sig inom några dagar, ungefär en fjärdedel av patienterna behöver långvarig intensivvård och löper stor risk att dö av icke lösa multipel organsvikt. Vidare är den förlängda fasen av kritisk sjukdom präglas av djup muskelsvaghet, och endokrina och metabola förändringar, vars patogenes är närvarande ofullständigt förstådda. Den mest använda djurmodell i kritisk forskning och sjukvård är cecal ligation och punktering modell för att framkalla sepsis. Detta är en mycket reproducerbar modell, med akuta inflammatoriska och hemodynamiska förändringar som liknar human septembersis, som är utformad för att studera den akuta fasen av kritisk sjukdom. Dock är denna modell präglas av en hög dödlighet, som skiljer sig från den kliniska mänskliga situationen, och inte utvecklats för att studera den långvariga fasen av kritisk sjukdom. Därför anpassade vi tekniken genom att placera en central venkateter i halsvenen tillåter oss att administrera kliniskt relevant stödjande vård, för att bättre efterlikna den humana kliniska situationen för kritisk sjukdom. Denna musmodell kräver en omfattande kirurgiska ingrepp och daglig intensivvård av djuren, men det resulterar i en relevant modell av akut och långvarig fas av kritisk sjukdom.
Introduction
Kritisk sjukdom är ett sjukdomstillstånd i vilket funktionen av en eller flera organsystem hämmas i sådan utsträckning att patienten kommer att dö, om intensiv medicinsk support administreras. Medan den ursprungliga orsaken för tillträde till intensivvårdsavdelning (IVA) kan variera, allt från trauma, komplicerade operation, brännskador, sjukdoms exacerbationer till sepsis, alla kritiskt sjuka patienter lider av cellskador som orsakas av hypoperfusion, hypoxi och överdriven inflammation bl , vilket leder till organsvikt. De flesta patienter överlever sin akuta förolämpning, men en viktig del av patienterna inte omedelbart återhämta sig och behöver långvarig intensivvård. De löper stor risk för dödsfall på grund av icke-lösa multipel organsvikt. Vidare är den förlängda fasen av kritisk sjukdom präglas av djup muskelsvaghet och endokrin och metabolisk förändring, vars patogenes är närvarande ofullständigt förstådda.
flera rODENT modeller används i den kritiska inställningen vårdforskning. De två mest använda modellerna är den exogena administreringen av lipopolysackarid (LPS) och cecal ligering och punktering (CLP). Båda modellerna är utvecklade för att efterlikna den akuta fasen av sepsis, definierad som en livshotande organdysfunktion som orsakas av en dysreglerad värdens respons på infektion, och en av de främsta anledningarna för tillträde till ICU världsomspännande 1, 2. LPS modell har flera nackdelar, eftersom det endast tillfälligt påverkar frisättning av cytokiner och hemodynamiska status hos djuret 3. Till skillnad från människor, gnagare är också särskilt motståndskraftiga mot endotoxin och användningen av 'höga doser' av endotoxin är nödvändig för att producera hypotension och dödlighet, härmed ytterligare lyfta bekymmer av giltigheten av denna metod 4, 5. Den andra modellen, cecal ligation och punkteringsmodell (CLP)har en ligering av en del av blindtarmen, följt av ett nålstick genom-och-genom. Denna procedur orsakar en polymikrobiella abdominal infektion med vävnadsskada, följt av en translokation av bakterier in i blodutrymmet. Detta kommer att utlösa en systemisk inflammatorisk respons och utveckling av sepsis. CLP modell har i stor utsträckning erkänd som en djurmodell av akut livshotande sjukdom som återger grunddragen av sepsis: hyperinflammation, vasodilatation, hypotension och ökad hjärtminutvolym 6, 7. Men denna modell inte att studier av fel inte lösa multipel organsvikt, muskelförtvining och endokrina och metabola förändringar, som är typiska för den förlängda fasen av kritisk sjukdom. Dessutom, som nyligen giltigheten av musmodeller för kritisk sjukdom har ifrågasatts, eftersom resultaten från musmodeller inte alltid kan översättas till människan inställning 8, 9, 10. En möjlig förklaring kan vara att den stödjande vård som är anordnad att kritiskt sjuka humana patienter skiljer sig väsentligt från den vård som är anordnad för att kritiskt sjuka möss.
Därför, för att likna det humana inställning närmare och för att tillåta undersökning av den förlängda fasen av kritisk sjukdom, utvecklade vi en musmodell som efterliknar akuta intensivvård som ges till människor, såsom omfattande intravenös vätskeadministration och antibiotikabehandling, och som tillåter att administrera stödjande vård för att överleva den långvariga fasen av kritisk sjukdom, såsom näringsstöd. För detta ändamål vi anpassat musmodell av CLP-inducerad sepsis, är den gyllene standarden för sepsis och placeras en central venkateter som möjliggör administration av vätskor, näring och droger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Protokollet godkändes av University of Leuven Etikprövningsnämnden för djurförsök.
1. Framställning av den venösa ledningen
- Förbereda spetsen av venkateter genom att snabbt sänka ned den mellersta delen av 60 cm microrenathane (MRE) slang i varm (> 220 ° C) sesamolja. Därefter sträcka den mellersta delen av röret för att producera en smal diameter (yttre diameter (OD) <0,5 mm) genom att försiktigt flytta ändarna av slangen bort från varandra.
- Använda ett skalpellblad för att skära röret i två delar om 30 cm vardera (se figur 1, tabell 1).
- Anslut MRE slangen till polyetenrör PE10 med hjälp av polyeten PE50 och anslut detta PE10 slangen till den nedre delen av sviveln. Ansluta den övre delen av sväng till PE10 slangar, och anslut den till en Luer stub nål med PE50 anslutningsröret enligt figur 1.
- Applicera stark snabb ACTIng självhäftande lim för alla anslutningar och testa kateter för läckage genom spolning med luft. Gas sterilisera katetern före användning.
Figur 1: Konstruktion av venös Line. Venösa ledningarna framställs genom sträckning av MRE slangen till en liten diameter och ansluta den via polyetylenrör till en gnagare svivelanordning. Se tabell 1 för instruktioner om längder av de olika delarna. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
| Legend | Längd | Volym |
| 1) Luer stub nålen 22G | ||
| 2) PE50 - polyeten 0,023" x 0,038" | 5 cm | 13 mikroliter |
| 3) PE10 - polyeten 0,011" x 0,024” | 50 cm | 30 mikroliter |
| 4) Gnagare Swivel 20 G | ||
| 5) PE-10 | 15 cm | 9 | il |
| 6) PE-50 (kontakt) | 5 cm | 13 mikroliter |
| 7) MRE025 Tip sträckt microrenathane 0,025" x 0,012" | 30 cm | 27 mikroliter |
| Totalsumma | 105 cm | 92 mikroliter |
Tabell 1: Konstruktion av venkateter. Denna tabell ger en förklaringen till fig 1.
2. Anestesi och Pre-kirurgi Hantering
- Använda 24-veckor gamla C57BL / 6J-möss (27-32 g).
OBS: Vi använder 24 veckor gamla möss (mogna vuxna) som denna ålder motsvarar bättre med medelålder intensivvårdspatienter. Vi använder bara hanmöss att undvika cykliska påverkan av östrogener. Tekniken kan också användas på yngre djur (som testats i 16 veckor gamla möss) och honor, om så önskas. - Sterilisera alla kirurgiska instrument före användning. Spola sterila hemgjorda venkateter med koksaltlösning för att avlägsna eventuella luftbubblor och för att testa för öppenhet och potentiella läckor.
- Skära en metalltråd (0,8 mm i diameter) av 80 cm längd, dubbla det genom vikning och gör en ögla. Leda 3 pärlor över dubble tråden till slingan. Fästa katetern till metalltråden genom att styra spetsen av katetern genom de 3 pärlor.
OBS: Den metallfästtråden är nödvändigt för rotation av sväng till vilken katetem är ansluten. Som sådan kan musen röra sig fritt, utan att blockera den venösa ledningen. - Söva mouse genom en intraperitoneal (IP) injektion av en blandning av 0,03 ml ketamin (100 mg / kg) och 0,02 ml xylazin (13 mg / kg). Se till att anestesi är tillräcklig genom att kontrollera frånvaron av reflexer. Dra försiktigt ut musen tungan utanför med pincett för att undvika kvävning genom att svälja tungan.
OBS: Om det efter 10 min, fortfarande försöker musen för att dra tillbaka sina lemmar ge ytterligare ketamin som en 0,01 mL bolus. - Raka det kirurgiska området inklusive buken, ventrala sidan av halsen (triangel mellan hakan, bröstbenet och nyckelbenet), och mellan skulderbladen vid basen av huvudet).
- Placera musen i liggande ställning på en förvärmd värmedyna, desinficera huden med 70% etanol och applicera en liten mängd av oftalmiska smörjmedel för att skydda ögonen från att torka ut. Infiltrera kirurgiska ställen (buk, hals front- och baksida) med 0,2 ml ropivakain (0,67 mg / kg).
- Medan musen är fortfarande i liggande ställning, gör ett litet snitt vid basen av den dorsala sidanav huvudet med skalpell eller sax. Exponera de bakre cervikala musklerna, och knyta muskeln till slingan av fästtråd med 3,0 nylon genom att leda en 3,0 nylontråd under muskeln.
- Placera musen på dess högra sida. Gör en liten vertikal snitt i huden på ventrala hals med en skalpell eller sax. Under visuell ledning, tunnel en 18-gauge nål subkutant genom denna ventrala snitt mot snittet på baksidan som tidigare gjorts och trä katetern genom nålen till exteriorize den vid den ventrala sidan.
- Placera musen på rygg. Passera en 3,0 nylontråd bakom toppframtänder på musen och tejpa fast den ner till värmedyna. Säkra huvudet i en ansiktsmask för att leverera syre (2 L / min). Fäst mus i en sträckt position genom att tejpa ner svansen och de två framben.
OBS: Om ensamma ketamin-xylazin anestesi inte är tillräcklig, inhaleras isofluran - kan (0,5 1,5%) att levereras under operation.
- Placera musen under dissekera mikroskop. I snittet gjort tidigare i det ventrala hals försiktigt retas fettvävnad och körtlar bort med pincett tills halsvenen kan visualiseras.
- Rakt på sak dissekera att frigöra halsvenen från bind och subkutan vävnad ovanför och runt kärlet genom att placera spetsen av tången mellan venen och bindväv och öppna tången upprepade gånger parallellt med venen. Som sådan kommer skada på venen undvikas.
- Isolera halsvenen genom att trubbiga pincett under venen. Mata tre stycken av 3,0 silkestråd under ven, position ett stycke proximalt till bifurkation av jugularvenen (kranial ligatur) och ett stycke nära sternocleidomastoideus (caudal ligatur). Dra åt kraniala ligaturen och den kaudala ligaturen för att sträcka venen och förhindra överdriven blödning medan placera katetern. Tdvs en lös ligatur med mitten tråden för att säkerställa enkel säkring av katetern senare.
- Med användning av mikro sax, gör ett snitt längs venen mellan de kraniala och kaudala ligaturer och tillräckligt stora för att passera katetern. Ta katetern med pincett, och föra in katetern 11 mm i venen. Löst säkra katetern genom att binda de mittersta ligatur och bekräfta korrekt placering genom att försiktigt spola med steril koksaltlösning.
- Säkra katetern genom fast knyta upp i mitten och svans ligatur runt fartyget och kateter. Tie ändarna av stjärtfenan och mellersta ligatur tillsammans för att stadigt fästa katetern. Se till att knutarna inte täppa venen, genom att spola katetern efter varje knut gjort. Slutligen knyt kaudala och kraniella ligaturer. Stäng snitt med 5,0 silke suturer.
4. cekala Ligering och Punktering
- Göra en 1-cm mittlinjesnitt genom huden på den nedre halvan av buken med skalpell eller sax;vara noga med att inte tränga in i bukhålan.
- Identifiera linea alba av bukmuskulaturen och göra en intermuscular snitt för att få tillträde till bukhålan. Leta reda på blindtarmen och använda trubbiga anatomiska pincett för att isolera blindtarmen och exteriorize det.
- Ligera cekum vid 50% av dess längd med 3,0 silkessuturer. Se till att inte ligera ileocekalklaff så att tarm kontinuitet bibehålls.
- Perforera cekum med en 18-gauge nål av en enda genomgående och genompunkterings halvvägs mellan ligering och spetsen på blindtarmen. Efter avlägsnande av nålen, extrudera en liten mängd avföring från hålet för att säkerställa patency.
- Flytta tarmen i bukhålan och stäng bukhinnan och hud med 5,0 silke suturer.
OBS: I genomsnitt kräver en ny trainee 10 till 15 djur för att kunna smidigt placera venkateter och utför CLP inom 45 minuter. Efter utbildningsperioden, en anestesi / operation relakan förväntas ted mortalitet av 10%.
5. Post-kirurgisk behandling och Fluid Resuscitation
- Placera musen i liggande ställning och säkra katetern till fästtråden med tejp. Flytta musen till en individuell bur. Använda ett stativ med justerbar klämma för att hålla den vridbara anordningen 25 cm ovanför musen och stadigt tejpa den fria delen av metallfästtråden till rotationspunkten av sviveln.
- Bifoga en spruta innehållande blandningen av balanserade kolloider och kristalloider (1: 4) till den venösa ledningen att starta vätsketillförsel.
- Placera buren i ett temperaturkontrollerat (27 ° C) djur Skåp med 12 h ljus och mörka cykler och börja intravenös vätsketillförsel (10 ml / kg / timme) via en noggrann spruta driven infusionspump. Tillhandahålla bur anrikning såsom bomaterial och ett träblock.
6. intensivvård
- Vid sex timmar efter operation, subkutant injicera smärta medication och antibiotika (0,3 ml buprenorfin (0,15 mg / kg) och 0,2 ml imipenem (16.67mg / kg)). OBS: Efter standardlaboratoriedjurmedicin praktiken är den första dosen av smärta medicin ges före den inledande kirurgiska snittet och sedan som riktas av institutionens veterinärmedicinska politik. Subkutana injektioner bör noggrant injiceras i subkutana utrymmet.
- Efter 20 - 24 h av vätsketillförsel, ersätta de kristalloider / kolloider från total parenteral nutrition (6,67 ml / kg / h).
OBS: Totalt parenteral nutrition administrerades (5,8 kcal / 24 h) omfattar cirka 40% av de dagliga kalori behov av möss, liknande den tidiga kaloriintaget av patienter i intensivvårdenhet. - Subkutant administrera smärta medicinering och antibiotika (0,6 ml buprenorfin (0,3 mg / kg) och 0,2 ml imipenem (16,67 mg / kg) varje 12 h under hela perioden av kritisk sjukdom.
- Kontrollera djuren åtminstone var 3 h under dagen. Bedöm lidande genom att ge en smärtascore baserat på den validerade mus grimas skala 11. Intensifiera övervakning av djur med hög smärtan.
7. slutet av experimentet
OBS: Godkännande av och rekommendationer om svårighetsgrad av modellen och riktlinjer och policies för mänskliga ändpunkter bör sökas från den lokala Institutional Etikprövningsnämnden för djurförsök.
OBS: Vid en icke funktionell venkateter som blockerad kateter, utlokalisering av katetern, problem med sprutpumpen djuret uteslöts från studien och avlivades.
- Vid slutet av den experimentella perioden, djupt söva musen med användning av en blandning av 0,03 ml ketamin (100 mg / kg) och 0,02 ml (13 mg / kg) xylazin. Euthanize musen genom att dra tillbaka blod genom hjärtpunktering. Store snap frysta vävnadsprover av intresse vid -80 ° C.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
C57BL / 6-möss gjordes kritiskt sjuk, såsom beskrivits ovan. Vi utförde två experiment för att bedöma efter CLP överlevnad tills två tidpunkter: överlevnad fram till dag 5 (n = 15) och överlevnad fram till dag 7 (n = 22) efter CLP. Överlevnadskurvorna för de två experimenten var inte signifikant olika (jämfört fram till dag 5), vilket indikerar reproducerbarheten av experimentuppställningen. Icke-överlevande djur påträffades död eller avlivas på grund av att nå mänskliga endpoints. Ligering av 50% av cekum i kombination med antibiotika, vätsketillförsel och total parenteral nutrition via en venös kateter i vena jugularis, såsom beskrivits, resulterade i en 13% dödlighet efter en dag av kritisk sjukdom, 24% dödlighet efter 3 dagars allvarlig sjukdom, 27-31% dödlighet efter 5 dagars kritisk sjukdom och 36% efter 7 dagars kritisk sjukdom. De friska pair-fed möss, som var kalori begränsad till näringsintag av den kritisktsjuka möss inte visade någon dödlighet.
Figur 2: Överlevnadskurvor efter 5 eller 7 dagar av kritisk sjukdom. Det fanns ingen dödlighet i den grupp av friska djur (A, B, streckad linje - friska djur utan kirurgi). Fem dagar efter operationen (A), dödligheten var 27% (heldragen linje). Sju dagar efter induktion av sepsis (B), dödligheten var 36%. Möss med läckande eller lösgjorda katetrar exkluderades från försöket (15%). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vi utvecklade en mer kliniskt relevant musmodell av allvarlig sjukdom, genom att kombinera cecal ligation och punktering metod för att framkalla sepsis med hjälp av en central venkateter för vätskor, läkemedel och närings administration. Denna experimentuppställning är reproducerbart, gör det möjligt att studera den förlängda fasen av kritisk sjukdom och resulterar i en stabil dödlighet, härmed imitera den humana kliniska situationen 1.
Cecal ligation och punktering har i stor utsträckning erkänts som en djurmodell av akut livshotande sjukdom som återger huvuddragen i sepsis 6, 7. Men denna modell av akut livshotande sjukdom inte tillåter studiet av misslyckande inte lösa multipel organsvikt, muskelförtvining och endokrina och metabola förändringar, som är typiska för den förlängda fasen av kritisk sjukdom. Dessutom prekliniska resultaten med den här modellen ofta misslyckas med att translate till den kliniska humana inställning 8, 9, 10. Därför har vi tagit fram en modell där placera en central venkateter gör utredaren att administrera omfattande vätska återupplivning, droger och total parenteral nutrition. Dessa stödåtgärder är av avgörande betydelse för kritiskt sjuka patienter för att överleva den akuta fasen av kritisk sjukdom. Trots placeringen av denna central venkateter, djuren är fortfarande möjlighet att fritt röra sig med lindriga besvär. Daily smärts hjälper lindra lidande, som bedöms av musen grimas skala av smärta 11. Denna modell innehåller också andra viktiga aspekter av stödjande vård för kritiskt sjuka patienter, såsom antibiotikabehandling och smärtstillande.
Denna modell har flera begränsningar. För det första är den omfattande kirurgiska ingrepp krävande och kräver tillräcklig utbildning. Aldrigdesto mindre, med tillräcklig utbildning, i genomsnitt 10% av de opererade djuren dör under eller omedelbart efter operationen. Dessutom, katetrar som inte är väl placerade, kan leda till läckage av återupplivningsvätskor eller parenteral nutrition in i bröstkorgen av djuret. I genomsnitt 15% av överlevande djur måste uteslutas under studien på grund av dessa kateterrelaterade problem. Sålunda, när man beräknar det erforderliga antalet djur för ett experiment, måste man ta hänsyn till en 25% överskott på grund av operation och kateterrelaterade förluster. För det andra, med bara en venös accesspunkt, antibiotika och smärtstillande måste fortfarande ges subkutant två gånger dagligen. I själva verket kan kompatibilitet parenteral nutrition med antibiotika och smärtstillande läkemedel som inte garanteras och därför samar infusion bör undvikas. Spolning av linjen följt av en bolusinjektion är också tekniskt inte möjligt på grund av begränsad blodvolymen hos mössen. För det tredje, anestesi och kirurgi krävs to placera katetern kommer att framkalla en allvarlig stress av sig själv. Vi använder friska djur utan kirurgi som kontroller, och anser katetern relaterad kirurgi som en del av den kritiska sjukdom, jämförbar med vad kirurgiska intensivvårdspatienter mänskliga måste uthärda. För det fjärde, medan postoperativ smärta medicinering och antibiotika och användning av en central venkateter för att tillåta administration av parenteral nutrition ökar den kliniska relevansen av mus CLP-modellen, modellen fortfarande inte helt efterlikna den kliniska mänskliga situationen. Indeed, på grund av den lilla djurets storlek det är svårt att införa flera avancerade stödjande tekniker, såsom njurersättningsterapi. Användningen av denna modell tillåter genetisk störning, avgörande reda ut patogenesen av kritisk sjukdom.
Det har visats att dödligheten och svårighetsgraden av CLP proceduren kan manipuleras, om så bedöms nödvändigt, genom den del av cekum som ligeras, av storleken och numBER av punkteringar, subkutan fluid återupplivning och daglig antibiotisk administrering 6, 12. Vi väljer ett protokoll där vi förutsatt omfattande vätsketillförsel vid 10 ml / kg / h under de första 20 h, som det har visats tidigare att detta förbättrar dödlighet 13. Våra anpassningar bör införlivas i protokollet om en modell av långvarig kritisk sjukdom önskas istället för en modell av letalitet. Denna mus modellen använder en mid-grade CLP, intravenös vätsketillförsel och antibiotikabehandling för att skapa en mer kliniskt relevant modell av kritisk sjukdom, vilket framgår av dess förlängda överlevnadskurvor som härmar överlevnadsgraden av human sepsis 1. ICU patientpopulation, som den allmänna befolkningen åldras 14. För att efterlikna den mänskliga ICU inställningen ännu närmare, kan man använda mogna möss (6 månader), som används i denna studie, i ellerder för att förbättra kliniska relevansen av försöksmodellen.
Sammanfattningsvis kräver denna musmodell en omfattande kirurgiska ingrepp och daglig intensivvård av djuren, men det resulterar i en modell av allvarlig sjukdom, som gör det möjligt för forskaren att studera aspekter av den långvariga fasen av kritisk sjukdom.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Buprenorphine | Ecuphar | Vetergesic 0.3 mg/mL | |
| C57BL/6 | Janvier labs | C57BL/6JRj | |
| colloids | Fresenius Kabi | Volulyte 6% | |
| crystalloids | Baxter | Plasmalyte a viaflo | |
| Ethilon 3.0 | Ethicon | F3211 | |
| Imipenem | MSD | Tienam 500 mg powder for injection fluid | |
| Isoflurane | Eurovet | Iso-vet | |
| Ketamine | Eurovet | Nimatek 100 mg/mL | |
| LocTite Super glue3 all plastics | Rectavit | 119818 | |
| Mersilk 3.0 | Ethicon | L192 | |
| Mersilk 5.0 | Ethicon | F682 | |
| Microrenathane .025" O.D. x .012" I.D. | Bioseb | MRE-025 | |
| olimel N7E | Baxter | ||
| PE10 - Polyethylene .011" x .024" | Instech Solomon | BTPE-10 | |
| PE-50 tubing .023" x.038" | Instech Solomon | BTPE-50 | |
| Rodent Swivel 20 G | Bioseb | RS-20G | |
| Ropivacaïne | Astrazenica | Naropin 2 mg/mL | |
| Xylazine | VMD | Xylazine hydrochloride 2% |
References
- Angus, D. C., van der Poll, T. Severe sepsis and septic shock. N Engl J Med. 369 (9), 840-851 (2013).
- Singer, M., et al. The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3). JAMA. 315 (8), 801-810 (2016).
- Remick, D. G., Newcomb, D. E., Bolgos, G. L., Call, D. R. Comparison of the mortality and inflammatory response of two models of sepsis: lipopolysaccharide vs. cecal ligation and puncture. Shock. 13 (2), 110-116 (2000).
- Copeland, S., et al. Acute inflammatory response to endotoxin in mice and humans. Clin Diagn Lab Immunol. 12 (1), 60-67 (2005).
- Seok, J., et al. Genomic responses in mouse models poorly mimic human inflammatory diseases. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (9), 3507-3512 (2013).
- Rittirsch, D., Huber-Lang, M. S., Flierl, M. A., Ward, P. A. Immunodesign of experimental sepsis by cecal ligation and puncture. Nat Protoc. 4 (1), 31-36 (2009).
- Zolfaghari, P. S., Pinto, B. B., Dyson, A., Singer, M. The metabolic phenotype of rodent sepsis: cause for concern. Intensive Care Med Exp. 1 (1), 25 (2013).
- Radermacher, P., Haouzi, P. A mouse is not a rat is not a man: species-specific metabolic responses to sepsis - a nail in the coffin of murine models for critical care research. Intensive Care Med Exp. 1 (1), 26 (2013).
- Dyson, A., Singer, M. Animal models of sepsis: why does preclinical efficacy fail to translate to the clinical setting. Crit Care Med. 37 (1 Suppl), S30-S37 (2009).
- Osuchowski, M. F., et al. Abandon the mouse research ship? Not just yet. Shock. 41 (6), 463-475 (2014).
- Langford DJ1, B. A., Chanda, M. L., Clarke, S. E., Drummond, T. E., Echols, S., Glick, S., Ingrao, J., Klassen-Ross, T., Lacroix-Fralish, M. L., Matsumiya, L., Sorge, R. E., Sotocinal, S. G., Tabaka, J. M., Wong, D., van den Maagdenberg, A. M., Ferrari, M. D., Craig, K. D., Mogil, J. S. Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse. Nat Methods. 7, (2010).
- Hollenberg, S. M., et al. Characterization of a hyperdynamic murine model of resuscitated sepsis using echocardiography. Am J Respir Crit Care Med. 164 (5), 891-895 (2001).
- Heuer, J. G., et al. Cecal ligation and puncture with total parenteral nutrition: a clinically relevant model of the metabolic, hormonal, and inflammatory dysfunction associated with critical illness. J Surg Res. 121 (2), 178-186 (2004).
- Conti, M., Merlani, P., Ricou, B. Prognosis and quality of life of elderly patients after intensive care. Swiss Med Wkly. 142, (2012).
