Summary
यह काम एक 5 सप्ताह की अवधि के लिए, एक साथ इस्तेमाल दो पौधों के मोटापे विरोधी प्रभाव का पता लगाने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है । मोटे चूहों में एक्सट्रैक्ट और हाई-फैट-डाइट (एचएफडी) का संयुक्त प्रशासन था । इस विधि से मोटापे के इलाज में पौधों के फायदों को बढ़ावा मिल सकता है।
Abstract
कई अध्ययनों से पता चला है कि पौधों की फाइटोकेमिकल सामग्री संभावित मोटापा विरोधी एजेंट हैं। इस अध्ययन में हम उच्च वसा आहार (एचएफडी) के माध्यम से मोटापे के साथ प्रेरित C57BL6/J चूहों पर सिज़िजियम एरोमेटिकम और जीरा से बीज से शुष्क बटन के संयोजन का उपयोग करने के प्रभाव की जांच करते हैं। इस अध्ययन का उद्देश्य यह प्रदर्शित करना है कि अध्ययन में प्रस्तावित विधि ने प्रयोग के कई हफ्तों के बाद मोटापा काफी कम कर दिया। फाइटोकेमिकल्स की निकासी को बढ़ाने के लिए अल्ट्रासाउंड का उपयोग करके दोनों पौधों से निकाला गया था। इस प्रकार इथेनॉल के साथ इष्टतम निष्कर्षण की स्थिति प्राप्त की गई: 300 डब्ल्यू की अल्ट्रासाउंड शक्ति के साथ 50:50 वी/वी पानी, और 30 मिनट का अल्ट्रासोनिकेशन समय। 5 सप्ताह के लिए एचएफडी में सीसी निकालने के एक साथ प्रशासन लिपिड प्रोफाइल (कोलेस्ट्रॉल और ट्राइग्लिसराइड्स), भोजन के सेवन में कमी, वजन बढ़ाने, एडीपोज़ ऊतक और जिगर के वजन के विनियमन के लिए नेतृत्व किया । इस मोटापे से ग्रस्त मॉडल द्वारा प्राप्त निष्कर्षों से संकेत मिलता है कि सीसी निकालने मोटापे को रोका जा सकता है । पारंपरिक 16 सप्ताह विधि (वसा प्राप्त करने के लिए 8 सप्ताह, और वजन कम करने के लिए 8 सप्ताह) के साथ तुलना में, प्रयोग के कम समय में वर्तमान अध्ययन मोटापे से ग्रस्त मॉडल में इसी तरह के परिणाम प्राप्त किए गए थे।
Introduction
शरीर में अधिक वसा संचय मोटापे की एक विशेषता है। ऊर्जा के सेवन और खपत के बीच असंतुलन से एडिपोसाइट्स में अतिरिक्त ऊर्जा का भंडारण होता है, जो टाइप 2 मधुमेह, उच्च रक्तचाप, हाइपरकोलेस्टेलेमिया और हृदय रोग1, 2में हाइपरग्लाइसेमिया और इंसुलिन प्रतिरोध के लिए मेटाबोलिक जोखिम कारकों से संबंधितहै।
न्यूनतम दुष्प्रभावों और कम लागत वाले प्राकृतिक उत्पादों पर अधिक ध्यान दिया गया है क्योंकि पिछले अध्ययनों ने बायोएक्टिव फाइटोकेमिकल्स और संभावित एंटी-मोटापा एजेंटों को ऐसे तंत्रों के साथ सूचित किया है जो मेटाबोलिक सिंड्रोम और संबंधित विकृतियों को रिवर्स या विलंबित करते हैं8।
मोटापे और संबंधित बीमारियों से बचाव के लिए कई औषधीय पौधों का अध्ययन किया गया है। उनमें से, सिज़िजियम एरोमेटिकम को 3T3-L1 कोशिकाओं पर इन विट्रो उपचार में और उच्च वसा वाले आहार11के साथ खिलाया गया चूहों पर वीवो उपचार में मोटापे की विरोधी क्षमता के लिए जांच की गई है। इसके अलावा, बेहद मोटापे से ग्रस्त विषयों पर जीरा झीनियम के एक बहु-केंद्र खुले परीक्षण में महत्वपूर्ण एंटी-ओवरवेट प्रभाव12देखे गए। इस अध्ययन में, C57BL6/J चूहों का उपयोग दोनों खाद्य पौधों के संयोजन का उपयोग करके संभावित एंटी-मोटापा एजेंट का मूल्यांकन करने के लिए प्रयोगात्मक फास्ट मॉडल की जांच करने के लिए किया गया था ।
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Protocol
सभी पशु प्रयोगों को एस्कुएला नैसिनल डी सिनेसियास बायोलॉजिका (आईपीएन) की पशु प्रयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था। प्रोटोकॉल नंबर 2732) ।
1. लौंग और जीरा के संयोजन के अर्क की तैयारी
नोट: खाद्य पौधों, सिज़िजियम एरोमेटिकम (लौंग) और जीरा झीनियम (जीरा) सेंट्रल डी Abastos CDMX, मेक्सिको से खरीदा गया था ।
- पौधों से 500 ग्राम बीज पीसें और अल्ट्रासोनिक-सहायता प्राप्त निष्कर्षण करें। उन्हें (320 वाट; 24 किलोहर्ट्ज आवृत्ति, 30 मिनट) इथेनॉल के साथ: पानी (60:40 v/v) 30 ± 4 डिग्री सेल्सियस की तापमान सीमा पर13
- वैक्यूम के तहत Whatman नंबर 2 फिल्टर पेपर का उपयोग कर ठोस फ़िल्टर और एक रोटरी वाष्पीकरण के साथ निकालने ध्यान केंद्रित।
- दोनों संयंत्रों (सीसी) के अर्क के यूवी-विस स्पेक्ट्रम को मापें।
2. पशु
- अध्ययन के लिए छह सप्ताह पुराने (कुल ४८, शरीर के वजन 24-29 ग्राम) के पुरुष C57BL6/J चूहों का उपयोग करें ।
- मानक प्रयोगशाला स्थितियों में आठ के समूहों में जानवरों को घर: तापमान (20-22 ± 1 डिग्री सेल्सियस), सापेक्ष आर्द्रता (45-54 ± 2%), प्रकाश (08:00-20:00 घंटे) भोजन और पानी के एडीटियम के साथ। प्रयोग से पहले एक सप्ताह के लिए इन स्थितियों में चूहों को स्वीकार करें।
3. प्रायोगिक प्रक्रिया
- उच्च वसा आहार14 तालिका 1के रूप में तैयार करें ।
- परीक्षण की शुरुआत में, प्रत्येक समूह के विषय (एन = 8) विभिन्न उपचारों के लिए: सामान्य आहार पर फ़ीड समूह 1; समूह 2, उच्च वसा वाले आहार पर; समूह 3, उच्च वसा वाले आहार + 100 मिलीग्राम/ समूह 4, उच्च वसा वाले आहार + 250 मिलीग्राम/ समूह 5, उच्च वसा वाले आहार + 450 मिलीग्राम/ समूह 6, उच्च वसा वाले आहार + फेंटमाइन (सकारात्मक नियंत्रण के रूप में उपयोग की जाने वाली एक एंटी मोटापा दवा)पर 15।
- चूहों के सभी समूहों को 5 सप्ताह तक खिलाएं और रोजाना उपभोग किए जाने वाले भोजन की मात्रा रिकॉर्ड करें।
- डाट के साथ एक परीक्षण ट्यूब में, निकालने या दवा को उस समूह के अनुरूप पानी की खुराक के साथ समरूप करें जिससे उपचार प्रशासित किया जा रहा है। यह भंवर शेखर के साथ किया जाता है।
- एक बार समरूप होने के बाद, प्रत्येक समूह के पीने वाले में सभी संबंधित उपचार जोड़ें।
4. नमूना संग्रह
- प्रति सप्ताह एक बार भोजन का सेवन और शरीर के वजन दोनों को मापें। 5 सप्ताह की अवधि के लिए रात भर चूहों को तेज करें।
- सर्वाइकल अपभ्रंश और नेक्रॉप्सी द्वारा उनका बलिदान करें।
- चूहों की बलि देने के बाद, उन्हें एक रीढ़ की स्थिति में स्थिर करें।
- साफ सर्जिकल संदंश और कैंची का उपयोग करना, जननांगों के पास केंद्रीय त्वचा का पता लगाएं और उठाएं और एक छोटे से 0.2 मिमी चीरा बनाएं।
- फ्लैट कैंची को क्षैतिज रूप से चीरा में डालें और ध्यान से पेट की त्वचा को पेट की दीवार से अलग करें।
- संदंश के साथ, केंद्रीय त्वचा को उठाएं और सर्जिकल कैंची के साथ इसे रिब पिंजरे के स्तर पर काट दिया। फिर आदिपोस ऊतक के संग्रह को सुविधाजनक बनाने के लिए पिछले अंगों के दोनों ऊपर त्वचा को काट लें।
- कैंची और संदंश के साथ कुंद विच्छेदन द्वारा शरीर से सभी adipose ऊतक का संग्रह सुनिश्चित करें। एक बार एकत्र होने के बाद, एल्यूमीनियम पन्नी में एडिपोज ऊतक रखें। प्रजनन अंगों के आसपास वसा इकट्ठा करने के लिए याद रखें। परिणामों को बदलने के लिए बालों और त्वचा के संचय से बचें।
- आंत के एडीपोज ऊतक तक पहुंचने के लिए, पेट की मांसपेशियों को जननांगों से रिब पिंजरे तक सर्जिकल कैंची से काटें, जिससे माउस की पीठ की ओर जननांगों से पेट की मांसपेशियों में चीरा लगाया जा सके।
- जिगर का 100% हटाने के लिए एक हेपेटेक्टॉमी करें। लिवर को बाहरी बनाने के लिए अनावश्यक अंगों को हटा दें और लिवर को शरीर के बाकी हिस्सों से अलग करने के लिए हेपेटिक नसों और धमनियों को काट लें। अंतिम चरण के रूप में, ठीक जिगर16से पित्ताशय की थैली निकालें।
- निर्माता के संकेतों के अनुसार वाणिज्यिक परख किट का उपयोग करके हाइपरकोलेस्टेरियोमिया (कोलेस्ट्रॉल) और हाइपरट्रिग्लाइसराइडिया (ट्राइग्लिसराइड्स) को मापें।
5. सांख्यिकीय विश्लेषण
नोट: सभी प्रयोगात्मक परिणाम तीन स्वतंत्र परख से प्रतिनिधि होना चाहिए, मानक विचलन ± मतलब के रूप में व्यक्त की ।
- तुकी के रेंज परीक्षण के बाद विचरण के एक तरह से ANOVA विश्लेषण के साथ मानक त्रुटि की गणना करें। सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण के रूप में एक पी < 0.05 पर विचार करें।
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Representative Results
अल्ट्रासोनिक-असिस्टेड निष्कर्षण
निष्कर्षण के लिए इष्टतम निष्कर्षण की स्थिति इथेनॉल थी: 300 डब्ल्यू की अल्ट्रासाउंड शक्ति और 30 मिनट के अल्ट्रासोनिकेशन समय के साथ पानी (50:50, v/v) । इस तरह, निष्कर्षण पारंपरिक निष्कर्षण विधियों(तालिका 2)की तुलना में तेज था। अर्क यूवी-दृश्य स्पेक्ट्रा(चित्रा 1)में 320 एनएम पर एक तीव्र अवशोषण चोटी दिखाया।
भोजन का सेवन और शरीर का वजन
5 सप्ताह के लिए निकालने (100, 200 और 450 मिलीग्राम/ समूह 3, 4 और 5 में वजन में कमी का प्रतिशत क्रमशः १२.२%, 30%, और ४१% था । इससे पता चलता है कि सभी समूहों में सबसे कम शरीर का वजन देखा गया था; हालांकि, सामान्य वसा आहार समूह की तुलना में एचएफडी समूह में 2.1x की वृद्धि हुई थी। इन आंकड़ों से पता चलता है कि शरीर के वजन को कम करने में सीसी की 450 मिलीग्राम/किलो खुराक 30 मिलीग्राम/किलो फेंटमाइन (39% कमी) से ज्यादा प्रभावी होती है।
एचएफडी + सीसी (450 मिलीग्राम/एमएल) में प्रयोग के अंत में मतलब भोजन का सेवन मोटापे से ग्रस्त समूह (एचएफडी) की तुलना में 31% कम था, जिसमें मोटापे से ग्रस्त समूह(चित्रा 2B)की तुलना में भोजन के सेवन में 1.3 ग्राम की कमी थी। एचएफडी-फेड चूहों में भोजन का सेवन सामान्य नियंत्रण की तुलना में 1.5 गुना अधिक था, इस प्रकार यह 7.14% से 31% की सीमा में सभी सीसी समूहों में काफी (पी<0.05) में कमी आई। एचएफडी समूह में आहार दक्षता दर 16% थी, जो नियंत्रण समूह (एनडी) से 11% पर काफी अलग (पी< 0.05) थी। इन परिणामों से पता चलता है कि सीसी एचएफडी प्रेरित शरीर के वजन को कम कर सकते हैं ।
एडिपोस टिश्यू और लिवर का वजन
एफएफडी समूह में एपिडिडिमल वाट, चमड़े के नीचे वसा और पेरिरेनल वाट एडीपोज ऊतकों का वजन अधिक था, लेकिन एचएफडी-सीसी समूहों(तालिका 3)में नहीं। एचएफडी समूह(तालिका4) की तुलना में 15%-28.4% की सीमा के साथ सीसी समूह (100 से 450 मिलीग्राम/किलो) में यकृत वजन काफी कम हो गया था (पी<0.05) में कमी आई।
लिवर लिपिड और सीरम
उपचार के 5 सप्ताह के बाद सीरम ट्राइसिल्लिसेरोल (टीजी) और कुल कोलेस्ट्रॉल (टीसी) का स्तर क्रमशः आंकड़े 3 ए और 3 बीमें दिखाया गया है। एनडी समूहों की तुलना में एचएफडी समूहों में ट्राइग्लिसराइड्स और कुल कोलेस्ट्रॉल का स्तर क्रमशः १.३२ गुना और १.३१ गुना तक बढ़ा था । एचएफडी आहार में प्लाज्मा टीजी और टीसी के बढ़े हुए स्तर को नियंत्रण (एनडी) की तुलना में क्रमशः 18.18% और टीजी के लिए 16.41% और टीसी के लिए 22.7% और टीसी के लिए 22.7% द्वारा 200 और 450 मिलीग्राम/किलो/दिन सीसी अर्क के प्रशासन द्वारा काफी क्षीण किया गया था।
चित्रा 1। लौंग और जीरा निकालने (सीसी) के यूवी-विस स्पेक्ट्रम कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 2। पर सीसी के प्रभाव: (क) शरीर के वजन (जी), (बी) उच्च वसा आहार C57BL6/J चूहों में उपचार के 4 सप्ताह में भोजन का सेवन । डेटा का प्रतिनिधित्व एसडी ± मतलब के रूप में किया जाता है। प्रत्येक समूह के लिए, n = 8। विभिन्न पत्र महत्वपूर्ण अंतर (पी<0.05) दिखाया। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 3। पर सीसी के प्रभाव: (क) ट्राइग्लिसराइड्स, (ख) कुल कोलेस्ट्रॉल । सभी प्रायोगिक डेटा एसडी चूहों (एन = 8) ± मतलब थे । चूहों को 5 सप्ताह के लिए एचएफडी के एक साथ खिलाने के साथ दैनिक मौखिक प्रशासन के लिए १००, २०० और ४५० मिलीग्राम/किलो सीसी के साथ इलाज किया गया । विभिन्न पत्र सभी समूहों (पी < 05) के बीच महत्वपूर्ण मतभेदों को इंगित करते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
घटक | मात्रा (जी/किलो) |
कैसिइन | 140 |
एल-सिस्टीन | 1.8 |
चरबी | 120 |
सोयाबीन तेल | 40 |
माल्टोडेक्स्ट्रिन 10 | 150 |
शर्करा | 450 |
सेलूलोज़ | 50 |
विटामिन और मिनरल्स | टैबलेट समकक्ष |
कोलीन बिटराट्रेट | 2.5 |
तालिका 1. C57BL6/J चूहों के लिए उच्च वसा आहार।
शक्ति | 370 वाट |
पानी का तापमान | 30 डिग्री सेल्सियस (86 डिग्री एफ) |
निष्कर्षण का समय | 30 मिनट |
सॉल्वेंट एकाग्रता | 50% इथेनॉल/50% आसुत पानी |
निष्कर्षण की संख्या | 2 अर्क |
तालिका 2. लौंग और जीरा निकालने की तैयारी के लिए इष्टतम अल्ट्रासाउंड की स्थिति
समूह | एपिडिडिमल वाट (जी) | पेरिरनल वाट (जी) | चमड़े के नीचे वसा (जी) | वसा/शरीर का वजन (g/100) |
मरोड़ना | 0.32 ± 0.04क | 0.05 ± 0.06क | 0.08 ± 0.01बी | 1.22 ± 0.09ए |
एचएफडी | 2.30 ± 0.09बी | 0.93 ± 0.07बी | 0.15 ± 0.04क | 6.38 ± 1.02बी |
एचएफडी + सीसी 100 मिलीग्राम/किलो | 1.26 ± 0.08बी | 0.50 ± 0.05बी | 0.12 ± 0.02ए,बी | 5.12 ± 1.93बी |
एचएफडी + सीसी 200 मिलीग्राम/किलो | 0.90 ± 0.05बी | 0.35 ± 0.04बी | 0.11 ± 0.04ए,बी | 3.21 ± 0.32b |
एचएफडी + सीसी 400 मिलीग्राम/किलो | 0.42 ± 0.07क | 0.16 ± 0.02c | 0.09 ± 0.03बी | 2.30 ± 0.45सी |
एचएफडी + पीएचई 30 मिलीग्राम/किलो | 0.49 ± 0.05क | 0.19 ± 0.08c | 0.10 ± 0.01बी | 2.41 ± 0.18c |
तालिका 3. सफेद एडीपोज ऊतक वजन पर आहार प्रेरित मोटापे से ग्रस्त चूहों में सीसी का प्रभाव। प्रत्येक मूल्य का मतलब एसडी (एन = 8) ± रूप में व्यक्त किया जाता है। विभिन्न पत्र महत्वपूर्ण अंतर दिखाया (पी<0.05) बनाम सफेद adipose ऊतक (वाट)
समूह | जिगर का वजन (जी) |
मरोड़ना | 1.01 ± 0.05क |
एचएफडी | 1.48 ± 0.08बी |
एचएफडी + सीसी 100 मिलीग्राम/किलो | 1.26 ± 0.09बी |
एचएफडी + सीसी 200 मिलीग्राम/किलो | 1.12 ± 0.03बी |
एचएफडी + सीसी 400 मिलीग्राम/किलो | 1.06 ± 0.06क |
एचएफडी + पीएचई 30 मिलीग्राम/किलो | 1.08 ± 0.07क |
तालिका 4. आहार में सीसी का प्रभाव-जिगर के ऊतकों के वजन पर मोटापे से ग्रस्त चूहों प्रेरित। प्रत्येक मूल्य का मतलब एसडी (एन = 8) ± रूप में व्यक्त किया जाता है। विभिन्न पत्र महत्वपूर्ण अंतर (पी<०.०५) बनाम सफेद adipose ऊतक (वाट) दिखाया ।
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Discussion
इस अध्ययन में हमने पहली बार, लिपिड प्रोफाइल पर लौंग और जीरा (सीसी) निकालने के संयोजन के मौखिक प्रशासन का प्रभाव और 5 सप्ताह के लिए उच्च वसा वाले आहार के साथ खिलाया चूहों में मोटापे का मूल्यांकन किया। निष्कर्षों से संकेत मिलता है कि एचएफडी समूहों ने एनडी समूह की तुलना में काफी अधिक शरीर का वजन दिखाया, जिससे पता चला कि मोटापे से ग्रस्त मॉडल में मोटापे का शामिल होना सफल रहा । सीसी (100, 200 और 450 मिलीग्राम/किलो/दिन) की प्रशासित खुराक ने भोजन के सेवन और शरीर के वजन में कमी का उत्पादन किया। नतीजतन, भोजन के सेवन में कमी जानवरों की भूख में गिरावट के कारण होनी चाहिए ।
मोटापे से होने वाले विकारों को रोकने के लिए डिस्लिपिडेमिया में कमी बहुत जरूरी है। हमारे अध्ययन में, कुल कोलेस्ट्रॉल का स्तर और ट्राइग्लिसराइड्स सीसी समूह में एचएफडी और phentermine समूहों में उन लोगों की तुलना में कम थे सकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया । निष्कर्षों का सुझाव दिया है कि सीसी हाइपरलिपिडेमिया और उसकी जटिलताओं को बाधित कर सकते हैं ।
हमारे अध्ययन से पता चला है कि HFD समूह पेट और जिगर की चर्बी है कि काफी सीसी निकालने पूरकता से कम थे सहित शरीर की चर्बी में वृद्धि हुई थी । इससे पता चलता है कि एचएफडी चूहों पर सीसी एक्सट्रैक्ट ट्रीटमेंट अपनी एंटी-एडिपोजेनिक एक्टिविटी के कारण लिपिड अवशोषण को कम करता है ।
इस अध्ययन में, हमने C57BL6/J चूहों पर खाद्य पौधों, सिज़िजियम एरोमेटिकम (लौंग) और जीरा झीनियम (जीरा) के संयोजन से एक उद्धरण के मोटापे विरोधी प्रभाव को निर्धारित करने के लिए एक तेजी से मॉडल का मूल्यांकन किया, जिसने तेजी से उच्च वसा वाले आहार के साथ मोटापा विकसित किया। सीसी उपचार ने चूहों को दिए गए एचएफडी द्वारा प्रेरित मोटापे और एलेरियोरेटेड हाइपरलिपिडेमिया के विकास को काफी रोका। कुल मिलाकर, इस शोध में निष्कर्ष ठोस सबूत प्रदान करते हैं कि हमारी प्रयोगशाला में विकसित 5 सप्ताह की अवधि की इस तेज विधि का उपयोग यह आकलन करने के लिए किया जा सकता है कि क्या किसी पौधे में मोटापे के इलाज के लिए संभावित एजेंट होने की क्षमता है।
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Disclosures
लेखक हितों का कोई टकराव नहीं घोषित करते हैं ।
Acknowledgments
इस शोध को इंस्टिट्यूटो पॉलिटिको नैसिनल मैक्सीको द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Distilled Water | Any vendor | n/a | Available for other vendors as well |
Ethanol | Fermont | 6063 | 99.8% purity |
Diet Ingredients | |||
Casein | Any vendor | n/a | |
Cellulose | Any vendor | n/a | |
Centrum balance multivitamin | Pfizer | n/a | |
Choline Bitartrate | Any vendor | n/a | |
L- cystein | Sigma Aldrich | 168149 | Available for other vendors as well |
Lard | Any vendor | n/a | |
Maltodextrin 10 | Any vendor | n/a | |
Pellets Nutricubos | Purina | n/a | Available for other vendors as well |
Soybean Oil | Any vendor | n/a | |
Sucrose | Any vendor | n/a | |
Extraction Equipment | |||
Rotavapor | Buchi | R-300 | |
Shimadzu UV-1800 UV/Visible Scanning Spectrophotometer | Cole Parmer | T-83400-20 | Available for other vendors as well |
Ultrasonic Unit | Elma | TI-H-20 | Available for other vendors as well |
Vacuum pump | Buchi | V-100 |
References
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