Summary
複雑な解剖学的構造のため、心臓サンプルの一貫して再現可能な解剖および採取プロトコルを実装するのは難しい場合があります。この原稿は、いくつかの標準的な心臓解剖プロトコルの重要な要素を提示し、肉眼検査アプローチと組織病理学的検査に一般的に使用されるサンプリング部位の両方を強調しています。
Abstract
標準的な肉眼検査とサンプリングは、大型動物で実施された心血管疾患の実験的研究の再現性と成功における重要な要素です。心臓の複雑な解剖学的構造、種間の違い、代償的および病理学的反応の種類を考慮すると、一貫したプロトコルを実装することは困難です。複数の解剖プロトコルの利用は通常、プロセクターの経験に合わせて調整されており、個人的な好みは引き続き実験的および観察者間の変動の原因となっています。ここでの目的は、心血管疾患のモデルとして、いくつかの一般的に使用される種(犬、豚、反芻動物、猫を含む)における心臓の主な解剖学的特徴とランドマーク、解剖プロトコル、および組織学的サンプリング標準を提示することです。
ここでは、2つの標準的な総検査プロトコルを示します。第一に、心臓と大血管を通る生理的な血流方向に従う流入流出法(犬、反芻動物、豚で頻繁に使用される)、第二に、4室解剖法(猫に例示)である。どちらの技術も、特定の実験状況においてあらゆる種に適応することができる。サンプリングプロトコルには、関心のあるすべての領域(洞房結節、心室、心室中隔、心房、弁、大動脈)が含まれ、適切に実施されれば、実験研究の再現性と信頼性の両方が向上します。
Introduction
複雑な解剖学的構造と初期の厳密さのために、心臓壁の厚さの評価を妨げる可能性があるため、心臓の肉眼検査は困難であり、いくつかの技術関連または解釈エラーが発生しやすくなります。これは、種間形態学的変異と、多くの臨床的、主要な心臓病(冠状動脈性心臓病、線維症、動脈炎、およびアミロイドーシスの初期症例を含む)が、本質的に組織学的病理である全体的な変化と関連していないという事実によって増幅されます。標準化された解剖および組織学的サンプル採取プロトコルは、観察者間の一貫性をもたらすと同時に、心血管疾患の実験的研究の比較可能性と再現性をもたらすことができます。
サンプルは、2匹の犬(Canis lupus familiaris)(3歳のオスのフレンチブルドッグと8歳のメスの雑種)、ネコ(Felis catus)(6歳、オスのヨーロッパショートヘア)、飼いならされたブタ(Sus scrofa domestic us)(1歳、オスのラージホワイト)、および牛(Bos taurus)(生後2か月のメスのホルスタイン)から収集されました。選択された種のそれぞれは、異なる疾患の心血管モデルとして特に使用されています。たとえば、犬は不整脈モデリングに適したモデルです。猫は肥大型心筋症(HCM)に好まれます、なぜならそれはHCMの有病率が最も高い種だからです。ブタは急性心筋梗塞のモデルとして使用されます。そして反芻動物は牧草地11で容易に見つけることができる毒素への彼らの暴露のために中毒のモデルとして使用されます。
この原稿では、実験的心血管疾患における心臓の肉眼的および組織学的検査を改善するように設計された、心臓の1つの剖検プロトコルと2つの解剖プロトコルが提示されています。記載されているプロトコルは、獣医学の教科書1,2,4,5,6,7,8,9,10,11,12、ジャーナル文献3,13,14、公式文書15、およびウェビナー16からの情報に基づいて開発されました。、17。この研究で使用されたサンプルは、定期的な剖検診断のためにUSAMVクルージュナポカの病理学部に提出された死体から採取されました。
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Protocol
実験プロトコルは生命倫理協定(311年から第2022号)を受け、国内(43年の法律第2014号)とヨーロッパ(63年のEU指令第2010号)の両方の法律に準拠して、クルジュナポカ農業獣医大学の生命倫理委員会によって承認されました。このプロトコルで使用されるすべての材料と機器の詳細については、 材料の表 を参照してください。
1.剖検プロトコル
注:実行した場合のアクセスが容易であるため、提示されたすべての種に同じ剖検プロトコルを使用することをお勧めします2,12。次の手順は、中型犬で行われる剖検を表しています。さまざまな被験者に剖検を行う際の手順を適応させます。
- 被験者の体重を量り、左側の剖検台に置きます(図1A)。被験者の外部検査に進みます(皮膚と粘膜の検査と触診、色、一貫性、体積のすべての変化に注意してください)。
- ナイフ(またはメス)を使用して、右腋窩を7 cmの切開を行います(図1A)。
- 肛門大腿骨接合部の位置を確認します(図1A、B)。ナイフでカプセルを開けます。大腿骨頭の靭帯を切断します(図1B)。
- ナイフを使用して、腋窩頭蓋の皮膚切開を下顎結合まで、尾側を会陰まで伸ばします(図1B)。
- メスで皮膚を取り除き、腹側の正中線から胸壁と腹壁を椎骨横断突起のレベルまで露出させます(図1B)。
- メスと鉗子を使用して、腹壁、腹尾から右肋骨弓までのフラップを作成します。ハサミで腹腔を開きます-右心気症の尾側に従います(図1B)。
- 切開部を右傍腰椎領域に沿って尾方向に外側腸骨稜まで伸ばします。その後、リネアアルバの恥骨挿入まで切開を延長します。
- 簡単に言えば、腹部臓器をその場で調べます(臓器の色、一貫性、体積、および位置の変化に注意することによって)。
- メスと鉗子を使用して、横隔膜の最高点に穴を開けます(図1B)。
- 骨切断鉗子を使用して2つの縦断面を持つ右胸郭を取り外すことにより、胸腔に入ります。肋骨の胸骨傍軟骨部分を切片化する。次に、肋骨の背側セグメントを、肋骨関節の近位部に切片化します(図1C)。
- 心臓を その場で 調べます(図1C)。サイズ、位置、色、隣接する組織との接続、および触診によって、一貫性の変化に注意してください9。
注:血栓症または先天性心疾患が存在する場合は、心臓を その場で 解剖する必要があります(このアプローチにより、大血管を完全に検査できます)。 - はさみを使用して、心臓の基部から頂点までの縦断面で心膜腔を調べて開きます。心膜腔と心外膜を調べます(色、一貫性、および体積の変化に注意してください)12。
- ハサミで心臓を解放し、大動脈、肺幹、および両方の大静脈の横断切片を生成します。クリスタターミナルを保存するために、右心房への入り口の少なくとも1 cm上の上大静脈をセクションします11,13。
- 臓器の輪郭、心外膜の外観、心外膜の透明度による心筋の外観、および大きな血管の外観を調べます(図2A)。
注:一般に、心膜の開放と検査には、種間でいくつかの違いがあります。心膜腔の検査は、心膜内容物全体の心膜の透明性による外部検査および評価から始まる1,2。猫または犬では、心膜には通常、約0.25 mL / kgの薄く、透明で、半透明から淡黄色の液体が含まれています9。病理学的滲出液がある場合は、滅菌注射器または真空管で採取する必要があります。
2.解剖プロトコル
注:心臓にはいくつかの剖検技術が使用されており、それぞれにいくつかの利点があります。このプロトコルでは、最も使用されている2つの技術が選択されました:1)弁と心内膜のより良い検査を可能にし、ほとんどの種2、11、12、16に使用されるプロトコルである「流入流出法」、および2)猫または小型犬に通常使用される「4室解剖」/「心エコー検査面」技術1、17.
- 心臓解離のための「流入流出法」2,11,12,16
- 心房を上にして心臓を置きます(図2A)。
- はさみと歯のない鉗子を使用して、尾大静脈から右心房に沿って広く切り取ります(図2B)。右耳介付属器への切断を続け、 クリスタ終末/洞房結節(SA結節)を露出させます。三尖弁を背側から調べます。
- 右心房から右心室と心室中隔の間の接合部までのセクションを切り取ります(図2C)。右房室弁を表示します。
- 心室中隔に沿って右心室自由壁を切片化する。肺動脈幹の起点までセクションを続けます(図2C、D)。
- 脊索腱を含む右房室弁と乳頭筋を徹底的に調べます(図2D)。脊索腱を切る。
- 鉗子を肺幹に通し、体幹を縦方向に切断します(図2E)。肺流出路、肺幹の起点、および半月弁を調べます。
- 左心房を肺静脈から左耳介の先端まで切り取ります(図2F)。背側から二尖弁(僧帽弁)を調べます。
- 心室中隔を下に向けて心臓を置きます(図2F)。心室の基部から心尖までの心室自由壁に大きな切開を行います。左房室弁を完全に表示します。
- 左房室弁の尖端の 脊索腱 を切断します。
- 鉗子を左心室流出路に通し、大動脈を開くためのガイダンスとして使用します(図2G)。
- 生理食塩水を使用して、すべての血栓を取り除きます。すべての血栓が除去されたら、心臓重量を評価し、体重または標準的な心臓重量表と比較します(表1)11,13。
- 心臓の重さを量る。
- SA結節のみが対象点である場合は、左心室検査後、心臓全体を10%中性緩衝ホルマリン(NBF)に24時間置き、右心房をトリミングして クリスタ終末をサンプリングします。
注:この技術により、左心室と右心室を簡単に理解できます。左右の心室壁の厚さの比率は3:1で、種や品種によってわずかな違いがあります。動物の胎児の心臓の場合、比率は1:112です。
3. 組織学のためのサンプリングプロトコル16
- メスを使用して、右心房、三尖弁、および右心室自由壁を含む2つの縦方向の平行なカット(約5 mm間隔)を作成します(図2I)。
- 左心房、僧帽弁、背側乳頭筋、左心室を含む2つの縦方向の平行なカット(約5 mm間隔)を作成します(図2H)。
- 心臓の背側上3分の1内で、心室中隔、右心房、大動脈、大動脈弁、三尖弁を含む線に沿って心臓の基部を横方向に切断します(図2J)。
- 大動脈の基部と心室中隔を含む2つの縦方向の平行なカットを行います(図2J)。
- クリスタターミナルの周りの右心房をトリミングし、クリスタの縦軸に横方向(約3〜4 mm間隔)を向けたいくつかの平行セクションを提供して、6個のSAノードを取得します(図3、図4I、および図5H)。
- 得られた組織を組織学的カセットでトリミングします。
注:推奨されるブロッキングプロトコル:ステップ3.1.-組織学的ブロック1(図6はこのブロックの結果のスライドを示しています)、ステップ3.2.-組織学的ブロック2(図7はこのブロックの結果のスライドを示しています)、ステップ3.4.-組織学的ブロック3(図8はこのブロックからの結果のスライドを示しています)、ステップ3.5.-組織学的ブロック4(図9はこのブロックからの結果のスライドを示しています)。 - 組織を10%NBFに少なくとも48時間浸します。
4.冠状動脈のサンプリング3,10,14
- 鉗子とメスを使用して、心臓傍円錐溝から冠状動脈を解剖します(図4K)。冠状動脈を10%NBFで一晩固定します。
- 必要に応じて、8%ギ酸と塩酸の1:1混合物で適切に脱灰します。
- 3mm間隔で複数の横方向のカットを行います。切片をカセットに入れ、埋め込むまで10%NBFに入れます。
注:ブタは、特に冠状動脈性心臓病に関しては、人間の心臓モデルとして使用できます。したがって、冠状動脈の補足サンプルおよび組織学的切片が推奨される3,10,14。
5. 心臓の「4室」/「心エコー面」解剖技術 1,17
注:4室解剖技術は、標準図1を得るために心臓の基部から頂点まで切断することからなる。「4チャンバー」技術は、固定組織に最適です。
- 心臓全体を10%NBFに少なくとも48時間入れます。
- 心臓を10%NBFで少なくとも48時間固定した後(図10A)、2つの歯のないまっすぐな解離鉗子を配置し、1つは頭蓋大静脈-右心房-三尖弁-右心室に、もう1つは肺静脈-左心房-僧帽弁-左心室に通します(図10B)。
- 鉗子の腕の間のスペースを、心臓の基部から頂点までの切断刃のガイダンスとして使用します(図10C)。手順5.2で説明したセクションから約5mm離れた追加の縦セクションを提供します。大動脈を含む心臓セグメント。
- 横切開で、心臓基部を頂点から完全に分離します。各組織セグメントを組織学的カセットに入れます。
注:推奨されるブロッキングプロトコル:心臓頂点-組織学的ブロック5(図11Aはこのブロックから得られたスライドを示す)、心臓基盤-組織学的ブロック6(図11Bはこのブロックから得られたスライドを示す)。 - 埋め込むまでカセットを10%NBFに入れます。すべての心臓サンプルを10%NBF(組織の体積の10倍以上)で固定し、パラフィンワックスで日常的に処理し、4μmの厚さで切片化し、前述のプロトコル10に従ってヘマトキシリンおよびエオジン染色(H&E染色)で染色します。
注:心筋炎が疑われる場合は、「新鮮な心臓組織の一部を、微生物学的およびウイルス学的研究のために滅菌手術材料と滅菌サンプル容器を使用して無菌条件下で保持する必要があります」13。
6.写真の文書化
注:写真の記録は、剖検検査のオプションステップです。ただし、写真とビデオの記録は、「正常および異常な解剖学的構造の正確な文書化」3を持つために不可欠です。
- 適切な写真記録のために、「心臓組織の漸進的解剖」13を実行しながらデジタル画像を撮影してください。写真の文書化と写真15の一般的なビューの前部と後部のガイドラインを参照してください。心のスライス。および疑わしい病変。
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Representative Results
このプロトコルは、解剖学的特徴を視覚化し、4つの異なる種(犬、猫、豚、牛)の心臓の組織学的検査のためのサンプルを収集するために使用されました。剖検プロトコルは上記の種のそれぞれで繰り返されましたが、犬でのみ示されています。剖検プロトコルは、体(図1A)(皮膚、探索可能なリンパ節、および外部粘膜を含む)の広範な外部検査、全体的な体重の測定、および動物の一般的な状態のスコアリングから始まります。外部検査の後、剖検は体の部分的な皮剥ぎ(皮下筋と表在筋を徹底的に検査するように指示された)と本体の空洞の開口部を伴って続きます(図1B-D)。
腹腔は通常、最初に検査され(図1C)、次に腹腔と腹部臓器の広範なin situ検査、次に横隔膜の切片、そして最後に右半胸部の除去が続きます(図1D)。この技術により、胸腹部臓器(心膜腔および心臓を含む)の良好なin situ検査を達成することができ、同時にこれらの臓器と局所血管、リンパ管、靭帯、および神経との関連を適切に評価することができる。心膜腔の検査は、心臓の縦軸に続く頭頂心膜の広い切片化、続いて肺実質に近い心臓大血管を切片化することによって心臓を除去することによって達成される。心臓の外部検査に続いて心腔の切片化が行われ、それは広範な検査、そして最後に組織病理学のための組織サンプルの適切な採取を可能にする。簡単に説明すると、「血流」(図2、図3、図4、および図5)および「4つのチャンバー」(図10)の2つの心臓解剖技術の手順と結果が提示されます。
「血流」技術は、犬、豚、反芻動物の心臓で使用されました(図2、図4、および図5)。心臓を体から取り出した後、外部構成が観察された(図2A、図4A、および図5A)。解剖を行っている間、洞房結節の識別の巨視的要素である心房構成である クリスタ終末に気付くはずです(図2B、図4B、および図5B)。 プロトコルのステップ(図2B-G、図4B-G、および図5B-G)を進めた後、解剖が完了し、組織学の採取プロトコルを開始できます(図2H-J、図4G-J、および図5H-K)。あるいは、クリスタ終末は、心臓を10%NBFで固定した後に採取することもできます(図3)。犬と比較して、豚の中心部で実行されるべき余分なステップがあります-冠状動脈の収穫(図4K)。
採取後、サンプルを10%NBFで固定し、日常的に処理してパラフィンワックスに包埋し、最後に4μmで切片化し、H&Eで染色しました。この技術によって得られる組織学的スライドは、典型的には以下を含む:1)右心房および心室の心外膜、心筋、および心内膜、三尖弁、および組織学的ブロック1の冠状動脈(図6);2)組織学的ブロック2の左心房および心室の心外膜、心筋、および心内膜、僧帽弁、冠状動脈、および心臓神経(図7);3)心筋、心室中隔の心内膜、右心房の心外膜、および組織学的ブロック3の三尖弁(図8);4)組織学的ブロック4のSAノードからの複数のセクション(図9);5)組織学的ブロック5(図11A)の心臓の頂点(左心室および右心室および心室中隔)の心外膜、心筋、および心内膜;6)組織学的ブロック6(図11B)の心臓基部の心外膜、心筋、および心内膜(左右の心房、心室、心室中隔、房室弁、および冠状動脈)。
図1:犬の剖検技術。(A)左側への被写体の配置。(b)腹腔の開口部;(c)胸腔の開口部;(d)胸腔の検査。1〜7は、推奨される切開の位置と順序を示します。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図2:犬の心臓の解剖およびサンプリングプロトコル。 (A)心臓の外部構成。(B)尾側大静脈から始めて右心房を整え、右心房を開き、クリスタターミナルを観察します。(C)心室中隔との接合部に沿って右心室をトリミングする。三尖弁を表示します。(D)脊索腱を切断した後、右心室を調べ、傍円溝に沿って切断を続けます。(E)鉗子を肺幹に通し、それらを使用して切断をガイドします。肺流出を調べます。(f)1-左心房を開き、2-基部から頂点まで切断する。僧帽弁と左心室を調べます。(G)鉗子を大動脈に通し、それらを使用して切断をガイドします。大動脈を調べます。(H)左心臓に沿って2つのカットを行い、中央のピースを10%NBFに配置します。(I)右心臓に沿って2つのカットを行い、中央のピースを10%NBFに配置し、クリスタターミナルを切り取ります。(J)心臓の付け根を切り取り、ピースに沿って2つのカットを入れ、中央のピースを10%NBFに配置します。略語:SAN =洞房結節;NBF = 中性緩衝ホルマリン。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図3: ホルマリン固定心臓からのクリスタ終末のサンプリング。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図4:ブタの心臓における解剖およびサンプリングプロトコル。 (A)心臓の外部構成;(B)尾側大静脈から始めて右心房を切片化し、右心房を調べ、クリスタ終末を見つけて、右心室を開き始めます。(C)心室中隔との接合部に沿って右心室をトリミングし、三尖弁を調べる。(D)脊索腱を切断した後、右心室を調べ、鉗子を肺幹に通し、それらを使用して切断をガイドします。(E)肺流出を調べる。左心房を切片化した後、左心室を基部から頂点まで切断します。(F)僧帽弁と左心室を調べ、脊索腱を切断する。大動脈に鉗子を置き、それらを使用して切断をガイドします。(G)大動脈を調べ、左心臓に沿って2つの切り込みを入れ、中央の部分を10%NBFに配置します。(H)右心に沿って2つの切り込みを入れます。真ん中のピースを10%NBFに配置します。(I)クリスタターミナルを切り取り、ピースを10%NBFに入れます。(J)心臓の付け根を切り取り、ピースに沿って2つのカットを行い、中央のピースを10%NBFに配置します。(K)冠状動脈をトリミングし、一晩固定してから、3mm間隔で複数の横方向の切り込みを入れます。略称:NBF = 中性緩衝ホルマリン。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図5:牛の心臓における解剖およびサンプリングプロトコル。 (A)心臓の外部構成。(B)尾側大静脈から始めて右心房を切片化し、右心房を調べ、クリスタ終末を見つけて、右心室を開き始めます。(C)心室中隔との接合部に沿って右心室をトリミングし、三尖弁を調べる。(D)傍円錐溝と平行に切断を続け、鉗子を肺幹に通し、それらを使用して切断をガイドします。(E)肺流出を調べ、肺静脈と左心房の切断を開始し、次に左心室を基部から頂点まで切断し続けます。(F)僧帽弁と左心室を調べ、脊索腱を切断する。(G)鉗子を大動脈に通し、それらを使用して切断をガイドし、大動脈を調べます。(H)クリスタターミナルを切り取り、ピースを10%NBFに入れます。(I)左心臓に沿って2つのカットを入れ、中央の部分を10%NBFに配置します。(J)右心臓に沿って2つのカットを入れ、中央の部分を10%NBFに配置します。(K)心臓の付け根を切り取り、ピースに沿って2つのカットを入れ、中央のピースを10%NBFに配置します。略称:NBF = 中性緩衝ホルマリン。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図6:犬の心臓の右心室、右心房、三尖弁の組織学的検査。 H&E染色。(A)右心室、右心房、および三尖弁の組織学的サンプル。(B)右心室、右心房、および三尖弁。スケールバー= 500μm;(C)右心室、右心房、および冠状動脈。スケールバー= 100μm;(D)右心房。スケールバー = 500 μm. 略語: H&E = ヘマトキシリンおよびエオジン;RV =右心室;RA =右心房;Ts-V =三尖弁;CA =冠状動脈;EnC =心内膜;MC =心筋;EpC =心外膜。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図7:犬の心臓の左心室、左心房、僧帽弁の組織学的検査。 H&E染色。(A)左心室、左心房、および僧帽弁の組織学的サンプル。(B)左心房。スケールバー= 500μm;(C)左心房、左心室、冠状動脈、および神経。スケールバー= 100μm;(d)冠状動脈、神経。スケールバー = 50 μm. 略語: H&E = ヘマトキシリンおよびエオジン;LA =左心房;LV =左心室;Mt-V =僧帽弁;CA =冠状動脈;EnC =心内膜;MC =心筋;EpC =心外膜;NV =神経。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図8:犬の心臓の心室中隔、右心房、三尖弁の組織学的検査。 H&E染色(A)心室中隔、右心房、および三尖弁組織学的サンプル。(B)心室中隔、右心房、および三尖弁。スケールバー = 500 μm. 略語: H&E = ヘマトキシリンおよびエオジン;IVS =心室中隔;RA =右心房;Ts-V三尖弁。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図9:犬の心臓の洞房結節の組織学的検査。 H&E染色。(A) クリスタターミナルの組織学的サンプル;(B)洞房結節4倍の倍率。スケールバー= 500μm;(C)洞房結節20倍の倍率。スケールバー= 100μm;(d)洞房結節40倍の倍率。スケールバー = 50 μm. 略語: H&E = ヘマトキシリンおよびエオジン;SAノード=洞房ノード。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図10:ネコのホルマリン固定心臓の解剖プロトコル 。 (A)心臓の外部構成。(B)鉗子を頭蓋管および肺静脈に通す。鉗子は縦方向のセクションを基部から頂点までガイドします。(c)カット後の4室図。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図11:猫の心臓の組織学的サンプル。 H&E染色。(A)心臓組織学的サンプルの頂点;(b)心臓組織学的試料の基部。略語:H&E =ヘマトキシリンとエオジン;LV =左心室;IVS =心室中隔;RV =右心室;LA =左心房;MV =僧帽弁;TS-V =三尖弁;RA =右心房。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
| 種 | 年齢 | 平均%BW | (LV + S)/RV | 引用番号 |
| 猫 | 新生児 | 0.77% | - | 7 |
| 猫 | 大人 | 0.33%-0.46% | 2.94-4.17 | 8, 5, 11 |
| 犬 | 新生児 | 0.47%-0.76% | - | 8, 7 |
| 犬 | 大人 | 0.70%-0.85% | 2.39-5.12 | 8, 6, 11 |
| 豚 | 大人 | 0.32%-0.48% | 2.38-3.84 | 11 |
| 羊 | 大人 | 0.17%-0.65% | 2.63-4.54 | 11 |
| 牛 | 大人 | 0.30%-0.66% | 2.43-4.00 | 11 |
表1:動物の正常な心臓重量/体重比および心室比の基準値。 猫、犬、豚、羊、牛の心臓測定。略語:BW =体重;LV =左心室;S =心室中隔;RV =右心室。
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Discussion
現在のプロトコルを実行するときは、一貫した結果を得るために、いくつかの重要な手順を慎重に検討する必要があります。若い動物では、心臓の測定値は成人の測定値とは異なり(心室壁の厚さを含む)、一般的に、心臓は体重のより大きな割合を占めています11,12。心室肥大の程度は、一般的な体重式を適用して定量化でき、左心室と中隔の比率を自由右心室重量で割ったもので、通常の条件下では成熟動物では2.8〜4.0である必要があります(表1)。この比率が4.0を超える場合は左室肥大を示し、2.8未満の場合は右心室肥大4,11,12を示します。チャンバーの値を得るためには、右心室自由壁を心室間壁および冠状動脈溝に沿って解剖して右心房から分離しなければならない。左心房からの左心室の解剖は房室輪4で行われる。
心臓は大きな血管を切開することによって体から分離されています。大きな血管の切片が心臓基部に近すぎると、いくつかの構造、主に心房と耳介が損なわれる可能性があります。プロセスを容易にするために、心臓の基部の上の大きな血管を適切に切断するために心臓を腹側に静かに引っ張ることが必要である。2番目の重要なステップは、心臓の詳細な構造知識を必要とする離散的な解剖学的構造である クリスタ終末の形態を認識することです。SAノードは、組織学的プロセス中のブロック内の組織サンプルの配置に特別な配慮をして、慎重に採取し、埋め込む必要があります。
「4チャンバー」技術の修正は、組織学的ブロッキングスキームを1ブロックから2ブロックに変更することでした。広く使用されている組織学的カセットの標準寸法および適応された組織学的手順(回転式ミクロトーム染色ステーションを含む)は、組織の歪みなしに心臓のセクション全体を1つのブロックに収めるのには適していません。「4室」技術は心腔の構造の検査を容易にするが、それは導電系の検査を制限する。これは、心不整脈が記録されている場合に特に重要です。さらに、「4室」技術ではNBFで組織を固定する必要があることを考えると、細菌学や分子生物学などのいくつかの追加検査がある程度損なわれる可能性があります。
猫や小型犬の心臓に関しては、固定組織で正確な標準的な心エコー検査計画が得られます。4室ビューは、特に心室または心房のサイズにばらつきがある場合、チャンバーの寸法に役立ちます1。心エコー検査による臨床検査中に得られたものと計画されたグロストリミングの完全な重ね合わせに関連する利点に加えて、この技術は、心臓の主要成分のほとんどを2つの組織学的ブロックのみに含めるという利点を提示します。
ブタで記載された「流入 - 流出」法は、冠状動脈サンプリングステップを追加することによってヒトの心臓で使用されたプロトコルから適応された。現在記載されている心臓解剖プロトコルは、サンプリングの標準ポイントを示しています。さらに、ディセクタがプロトコルでカバーされているもの以外の他の病変を観察または疑う場合は、関心のある領域から補足サンプルを収集する必要があります。
現在のプロトコルを開発する一方で、主要な心臓曲線12の最初の縦方向の切断を含む方法や、「パンパン」/短軸技術9,11などの他の方法が研究されました。主要な心臓曲線の縦方向の切断を含む技術は、生物医学教育で頻繁に使用されるより単純なプロトコルです12。短軸切片技術(「パンパン技術」)は、房室装置9を無傷のままにして、1つの短軸切片11または頂点から基部に向かって1〜2cmの厚さの一連の切片で行うことができる。この技術は、ディセクタが心筋の病状(炎症性の病状および心筋症を含む)を疑うが、弁成分の表面的な検査の欠点を有する場合に最も適している9。
これらの技術は両方とも、心臓の解剖学に関する比較的基本的な知識を持つ個人によって簡単に習得できますが、各心臓コンポーネントの組織学的サンプリングと重み付けのための堅牢なポイントが欠けています。これらの方法を進めた後、その後の収穫手順は、関心のある領域を特定し、一定のサンプルを取得するための骨の折れる作業を含みます。これらの方法を使用して解剖された心臓では、2つの半分を別々に計量するには、それらの間の比率を計算できるようにするための努力が必要です。短軸法では、心内膜および心臓の基部にあるすべての成分を検査するための追加のステップが必要です。さらに、これらの方法に従った収穫手順は、関心のある領域を特定し、一定のサンプルを取得するための面倒な作業で構成されています。
この原稿は、いくつかの標準的な心臓解剖プロトコルの重要な要素を提示し、肉眼検査アプローチと組織病理学的検査に一般的に使用されるサンプリング部位の両方を強調しています。この技術の将来の応用に関して、提示されたプロトコルの主な目的は、詳細な心臓評価を必要とするすべての実験的研究で容易に使用できる心臓解剖のための堅牢なガイドラインを提供することです。
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Disclosures
著者は開示する利益相反を持っていません。
Acknowledgments
何一つ。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.9% saline solution | B. BRAUN MELSUNGEN AG | W04479004 | For washing all the blood, and blood clots from the heart. |
| 10% neutral buffered formalin (NBF) | Q Path | 11699404 | Materials for collecting histopathology samples. |
| Bone cutting forceps | HELEN SRL | LS109HV | Sturdy instrument for cutting bone. |
| Cutting board | Ambition | 86304 | For an easier manipulation, and cutting the organs. |
| Decalcifying solution | Thermo Scientific TBD-2 | 6764004 | 1:1 mixture of 8% formic acid and hydrochloric acid. |
| Digital camera | Canon Inc. | PowerShot SX540 HS | For photographic, and videographic documentation. |
| Forceps | MKD-Medicale | 15-430 | Dissection instruments. |
| Histological cassettes | Q Path | 720-2215 | Materials for collecting histopathology samples. Dimensions: 3 × 2.5 × 0.4 cm |
| Knife | TEHNO FOOD COM SERV SRL | D2006/15 | Sharp blade for cutting soft tissue. |
| Latex gloves | MKD-Medicale | SANTEX-S | Protection equipment. |
| Mask | MKD-Medicale | 21221 | Protection equipment. |
| Petri dishes | MKD-Medicale | 0598-1V | Materials for collecting ancillary testing samples. |
| Plastic recipients | Corning Gosselin | TP200-02 | Materials for collecting histopathology samples. |
| Scale | ESPERANZA | MEEKS008 | For weighing the organs. |
| Scale | White Deals | 72 | For weighing the subjects. |
| Scalpel | MKD-Medicale | 10322E | Sharp blade for cutting soft tissue. |
| Scissors | MKD-Medicale | 13-260 | Dissection instruments. |
| Scrub | MKD-Medicale | 410100-52 | Protection equipment. |
| Syringes | MKD-Medicale | 10573EU | Materials for collecting ancillary testing samples. |
References
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- Toxpath.org. , Available from: https://www.toxpath.org/Trimming-N-Collection-Training.asp (2021).
- YouTube.com. , Available from: httpswwwyoutubecomwatchvxkJ2WGqi2Qw&t2494s (2021).
