Summary
यह प्रोटोकॉल एएए की पैथोलॉजिकल विशेषताओं और आणविक तंत्र का अध्ययन करने के लिए कैल्शियम फॉस्फेट-प्रेरित पेट महाधमनी धमनीविस्फार (एएए) माउस मॉडल का वर्णन करता है।
Abstract
पेट की महाधमनी धमनीविस्फार (एएए) एक जीवन-धमकाने वाली हृदय रोग है जो दुनिया भर में होता है और पेट की महाधमनी के अपरिवर्तनीय फैलाव की विशेषता है। वर्तमान में, कई रासायनिक रूप से प्रेरित मुराइन एएए मॉडल का उपयोग किया जाता है, प्रत्येक एएए के रोगजनन के एक अलग पहलू का अनुकरण करता है। कैल्शियम फॉस्फेट-प्रेरित एएए मॉडल एंजियोटेंसिन II- और इलास्टेस-प्रेरित एएए मॉडल की तुलना में एक तेज़ और लागत प्रभावी मॉडल है। माउस महाधमनी के लिए सीएपीओ4 क्रिस्टल के आवेदन के परिणामस्वरूप लोचदार फाइबर क्षरण, चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं का नुकसान, सूजन और महाधमनी फैलाव से जुड़े कैल्शियम जमाव होता है। यह लेख CaPO4-प्रेरित AAA मॉडल के लिए एक मानक प्रोटोकॉल का परिचय देता है। प्रोटोकॉल में सामग्री तैयार करना, इन्फ्रारेनल पेट महाधमनी के एडवेंटिटिया के लिए सीएपीओ4 का सर्जिकल अनुप्रयोग, महाधमनी धमनीविस्फार की कल्पना करने के लिए महाधमनी की कटाई और चूहों में हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण शामिल हैं।
Introduction
पेट की महाधमनी धमनीविस्फार (एएए) एक घातक हृदय रोग है जो पेट की महाधमनी के स्थायी फैलाव की विशेषता है, जिसमें टूटने के बाद उच्च मृत्यु दर होती है। एएए उम्र बढ़ने, धूम्रपान, पुरुष लिंग, उच्च रक्तचाप और हाइपरलिपिडिमिया1 से जुड़ा हुआ है। कई पैथोलॉजिकल प्रक्रियाओं को एएए गठन में योगदान करने के लिए दिखाया गया है, जिसमें बाह्य मैट्रिक्स फाइबर प्रोटियोलिसिस, प्रतिरक्षा कोशिका घुसपैठ और संवहनी चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं का नुकसान शामिल है। वर्तमान में, एएए के पैथोलॉजिकल तंत्र मायावी बने हुए हैं, और एएए1 के उपचार के लिए कोई सिद्ध दवाएं नहीं हैं। कुछ मानव महाधमनी नमूनों के अस्तित्व के कारण मानव एएए में अनुसंधान सीमित है; इस प्रकार, कई रासायनिक संशोधन-प्रेरित पशु एएए मॉडल स्थापित किए गए हैं और व्यापक रूप से अपनाए गए हैं, जिनमें चमड़े के नीचे एंजियोटेंसिन II (एंजीआईआई) जलसेक, पेरिवास्कुलर या इंट्राल्यूमिनल इलास्टेस इनक्यूबेशन, और पेरिवास्कुलर कैल्शियम फॉस्फेट अनुप्रयोग2 शामिल हैं। एक आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला माउस मॉडल इन्फ्रारेनल पेट महाधमनी के एडवेंटिटिया के लिए कैल्शियम फॉस्फेट (सीएपीओ4) का अनुप्रयोग है, जो लागत प्रभावी है और आनुवंशिक संशोधन की आवश्यकता नहीं है।
एन्यूरिज्मल परिवर्तन को प्रेरित करने के लिए खरगोशों की कैरोटिड धमनी के लिए सीएसीएल2 के प्रत्यक्ष पेरिओर्टिक अनुप्रयोग को शुरू में गर्ट्ज़ एट अल.3 द्वारा रिपोर्ट किया गया था और बाद में चूहों के पेट की महाधमनी पर लागू किया गया था। चूहों में सीएपीओ4 क्रिस्टल का उपयोग करके महाधमनी फैलाव में तेजी लाने के लिए मॉडल यामानौची एट अल द्वारा विकसित किया गया था। चूहों में सीएपीओ4 की घुसपैठ मानव एएए में देखी गई कई रोग संबंधी विशेषताओं को पुन: उत्पन्न करती है, जिसमें गहन मैक्रोफेज घुसपैठ, बाह्य मैट्रिक्स गिरावट और कैल्शियम जमाव शामिल हैं। मानव एएए के जोखिम कारक, जैसे हाइपरलिपिडिमिया, चूहों में सीएपीओ4-प्रेरित एएए को भी बढ़ातेहैं। चूहों में एंजीआई छिड़काव-प्रेरित एएए के विपरीत, सीएपीओ 4-प्रेरित एएए इन्फ्रारेनल महाधमनी क्षेत्र में होता है, जो मानव एएए की नकल करता है। वर्तमान में, आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों में एएए विकास के लिए संवेदनशीलता का आकलन करने और दवाओं 6,7 के एंटी-एएए प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए इस विधि को व्यापक रूप से लागू किया गया है।
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Protocol
पेकिंग विश्वविद्यालय स्वास्थ्य विज्ञान केंद्र के संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति के दिशानिर्देशों के अनुपालन में पशु अध्ययन किया गया था और पेकिंग विश्वविद्यालय (एलए 2015142) की बायोमेडिकल एथिक्स कमेटी द्वारा अनुमोदित किया गया था। सर्जरी के लिए सभी चूहों को आइसोफ्लुरेन (1.5% -2%) के साथ एनेस्थेटाइज्ड किया गया था, और चूहों के लिए दर्द या असुविधा से बचने के लिए संज्ञाहरण की सावधानीपूर्वक निगरानी की गई थी।
1. तैयारी
- पाउडर मुक्त रबर दस्ताने और धुंध की 0.3 सेमी चौड़ी स्ट्रिप्स काटें।
- 8-10 सप्ताह के C57BL / 6J नर चूहों को खरीदें। जानवरों को 12 घंटे के प्रकाश-अंधेरे चक्र और भोजन और पानी तक मुफ्त पहुंच के साथ वातानुकूलित वातावरण में रखें।
- सर्जरी से पहले धुंध, कपास के स्वैब, कैंची और बल को ऑटोक्लेव करें।
- बीटाडीन, 70% इथेनॉल, और एंटीसेप्टिक हैंड वॉश प्राप्त करें।
- मास्क, गाउन और बाँझ दस्ताने पहनें।
2. सर्जिकल प्रक्रिया
- सर्जरी से 2-4 घंटे पहले 8-10 सप्ताह के C57BL/6J माउस को चबाने योग्य कारप्रोफेन गोलियां (5 मिलीग्राम / किग्रा खुराक) खिलाएं। फिर, माउस को 1.5% -2% की प्रवाह दर पर आइसोफ्लुरेन के साथ एक प्रेरण कक्ष (206 मिमी x 210 मिमी x 140 मिमी) में रखें।
- लगभग 5 मिनट के लिए माउस की निगरानी करें जब तक कि श्वसन स्पष्ट रूप से धीमा न हो जाए। सुनिश्चित करें कि माउस को सर्जरी से पहले दर्द उत्तेजना के लिए कोई प्रतिक्रिया नहीं है।
- आंखों पर एक नेत्र मरहम लागू करें और हीटिंग पैड या कंबल के साथ थर्मल समर्थन प्रदान करें। सर्जिकल प्रक्रिया के दौरान हर 15 मिनट में पैर की अंगुली की चुटकी के साथ संज्ञाहरण की गहराई की पुष्टि करें।
- इलेक्ट्रिक क्लिपर या हेयर रिमूवल क्रीम का उपयोग करके माउस के पेट के बालों को शेव करें। बीटाडाइन के साथ मुंडा क्षेत्र को स्वैब और पोंछें, इसके बाद 70% इथेनॉल, एक गोलाकार गति में कई बार। बाँझपन बनाए रखने के लिए दस्ताने बदलें।
- पेट की मध्य रेखा के साथ निचले पेट पर ~ 1.5 सेमी चीरा लगाने के लिए कैंची का उपयोग करें।
- आंत को सावधानीपूर्वक हटाने के लिए सामान्य खारा के साथ नम बाँझ कपास के फाहे का उपयोग करें जब तक कि इन्फ्रारेनल महाधमनी दिखाई न दे।
- लगभग 0.5 सेमी अनुभाग के लिए इन्फ्रारेनल महाधमनी से संयोजी ऊतक और वसा को विच्छेदित करें। छोटे जहाजों को पृष्ठीय पक्ष पर नोट करें और उन्हें फाड़ने से बचें। पेट की मुख्य नस से पेट की महाधमनी को अलग करने की कोई आवश्यकता नहीं है।
- पेट की महाधमनी और पेट की मुख्य नस के नीचे खारा-भिगोया हुआ रबर दस्ताने पट्टी का एक टुकड़ा पैक करें। अतिरिक्त तरल को पोंछने के लिए एक कपास के फाहे का उपयोग करें।
- 10 मिनट के लिए इन्फ्रारेनल पेट वाहिका के एडवेंटिटिया पर 0.5 एम सीएसीएल2 के साथ भिगोए गए धुंध के टुकड़े को पैक करें। शाम माउस समूह के लिए, 0.5 M CaCl2 को सामान्य खारा के साथ बदलें।
- धुंध को हटा दें और महाधमनी के एडवेंटिटी में सीटू में सीएपीओ4 क्रिस्टल उत्पन्न करने के लिए 5 मिनट के लिए पीबीएस समाधान के साथ भिगोए गए धुंध के एक और टुकड़े को पैक करें।
- रबर दस्ताने की पट्टी और धुंध को सावधानीपूर्वक हटा दें। माउस के आंत्र पथ को रीसेट करें।
- पेट के चीरे और त्वचा को 5-0 सीवन के साथ सीवन करें।
- माउस को हीटिंग पैड पर रखें जब तक कि माउस होश में न आ जाए। स्थानीय पशु नैतिकता समिति के अनुसार, पोस्टसर्जिकल दर्द वसूली आवास और एनाल्जेसिया प्रदान करें।
- माउस को अगले 14 दिनों के लिए रखें। सर्जरी के बाद माउस की बारीकी से निगरानी करें और बाद में हर दिन कम से कम 1x का निरीक्षण करें। यदि इस अवधि के दौरान कोई चूहा मर जाता है तो तुरंत एक नेक्रोपसी करें।
3. महाधमनी की इमेजिंग के लिए कटाई
- सर्जरी के 14 दिन बाद, सीओ2 का उपयोग करके चूहों का बलिदान करें।
- माउस थोरैसिक और पेट की गुहाओं को उदर रूप से काटें और दाहिने आलिंद को खोलें।
- महाधमनी में रक्त को हटाने के लिए हृदय के बाएं वेंट्रिकल के माध्यम से पीबीएस बफर के साथ चूहों को संक्रमित करें, और फिर 4% पैराफॉर्मलडिहाइड के साथ संक्रमित करें जैसा कि पहले वर्णितकिया गया था।
- स्टीरियोस्कोप के नीचे महाधमनी काटें।
- 48 घंटे के लिए 4% पैराफॉर्मलडिहाइड के 5 एमएल युक्त ट्यूबों में काटे गए महाधमनी रखें।
- स्टीरियोस्कोप के नीचे एडवेंटियल ऊतक और वसा को सावधानी से हटा दें और कीट सुइयों के साथ काले मोम प्लेट पर महाधमनी को पिन करें।
- महाधमनी छवियां प्राप्त करें।
4. लोचदार तंतुओं के क्षरण का मूल्यांकन
- महाधमनी धमनीविस्फार ऊतकों को सीरियल क्रायोसेक्शन (7 μm मोटी) में काटें।
- निर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार एक वाणिज्यिक लोचदार वैन गिसन (ईवीजी) धुंधला किट का उपयोग करके लोचदार फाइबर का विश्लेषण करें।
- इलास्टिन क्षरण को ग्रेड करें। ग्रेड 1: <25% गिरावट; ग्रेड 2: 25% से 50% गिरावट; ग्रेड 3: 50% से 75% गिरावट; या ग्रेड 4: >75% गिरावट।
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Representative Results
सीएपीओ 4 आवेदन के14 दिन बाद, सी 57बीएल / 6 जे नर चूहों को इच्छामृत्यु दी गई थी, और उनके महाधमनी को काटा और साफ किया गया था। महाधमनी की आकृति विज्ञान को एएए गठन की कल्पना करने के लिए चित्रित किया गया था। जैसा कि चित्र 1 ए-बी में दिखाया गया है, सीएपीओ 4 के आवेदन से इन्फ्रारेनल पेट महाधमनी का फैलाव हुआ। हिस्टोलॉजिकल रूप से, सीएपीओ4 के परिणामस्वरूप लोचदार तंतुओं का नाटकीय क्षरण हुआ, जैसा कि इलास्टिन ब्रेक (चित्रा 1 सी) द्वारा चित्रित किया गया है।
चित्र 1: 8 सप्ताह के नर C57BL/6J चूहों को14 दिनों के बाद खारा (शाम) या CaPO 4 के साथ इलाज किया गया था। (ए) स्टीरियोस्कोप के तहत इन्फ्रारेनल पेट महाधमनी की प्रतिनिधि छवियां। (बी) चूहों से महाधमनी की प्रतिनिधि आकृति विज्ञान छवियां; स्केल बार = 1 मिमी (सी) महाधमनी के लोचदार वैन गिसन धुंधला होने की प्रतिनिधि छवियां। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
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Discussion
सीएपीओ4 का पेरिओर्टिक अनुप्रयोग चूहों में एएए को प्रेरित करने के लिए एक मजबूत दृष्टिकोण है। कई अध्ययनों ने सीएपीओ4 मॉडल का उपयोग किया है और लगातार बताया है कि यह चूहों 7,9 में एएए का अध्ययन करने के लिए एक तेजी से और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य विधि है। इस मॉडल को मानव महाधमनी धमनीविस्फार की विशेषताओं के हिस्से को पुन: उत्पन्न करने और सूजन और बाह्य मैट्रिक्स गिरावट सहित एएए रोगजनन में यांत्रिक अंतर्दृष्टि प्रदान करने के लिए माना जाता है।
मानव एएए के जोखिम कारकों में मुख्य रूप से उम्र बढ़ने, पुरुष लिंग, धूम्रपान, हाइपरलिपिडिमिया, उच्च रक्तचाप और एथेरोस्क्लेरोसिस10 शामिल हैं। हालांकि व्यवस्थित रूप से अध्ययन नहीं किया गया था, लेकिन सीएपीओ4 मॉडल का उपयोग करते समय हाइपरलिपिडिमिया चूहों को एएए विस्तार के लिए प्रेरित करने के लिए भी पाया गया था। मनुष्यों के विपरीत, उम्र बढ़ने माउस CaPO4 मॉडल 5 में AAA गठन में एक छोटी भूमिकानिभाता है। पिछले बड़े महामारी विज्ञान के अध्ययनों से पता चला है कि मधुमेह मानव एएए11 का एक स्वतंत्र नकारात्मक जोखिम कारक है। जबकि कुछ आंकड़ों से पता चलता है कि मेटफॉर्मिन, एक मधुमेह की दवा, इस प्रभाव का कारण बनती है, वैकल्पिक रूप से यह दिलचस्प है कि, सीएपीओ4 मॉडल में, हाइपरग्लेसेमिया मैक्रोफेज सक्रियण12 के दमन से महाधमनी फैलाव को रोकता है।
वर्तमान में, कई रासायनिक रूप से प्रेरित मुराइन एएए मॉडल स्थापित किए गए हैं, जिनमें इलास्टेस इनक्यूबेशन, सीएपीओ4 इनक्यूबेशन और चमड़े के नीचे एंजीआई छिड़काव2 शामिल हैं। आम तौर पर, इलास्टेस और सीएपीओ4 मॉडल 8-10 सप्ताह के नर जंगली प्रकार के चूहों में किए गए हैं, और एंजीआई मॉडल हाइपरलिपिडिमिया चूहों (जैसे एपीओई -/ - और एलडीएलआर -/ - चूहों) या 5-6 महीने के चूहों में एएए13 को प्रेरित करने के लिए किया गया है। सभी तीन मॉडल मानव एएए की प्रमुख रोग संबंधी विशेषताओं को फेनोकॉपी करते हैं, जिसमें लोचदार फाइबर क्षरण और प्रतिरक्षा कोशिका घुसपैठ शामिल है। अन्य दो मॉडलों की तुलना में, सीएपीओ4 आवेदन सर्जरी के 7 दिनों के बाद महाधमनी के तेजी से और 1.5 गुना से अधिक विस्तार की ओर जाता है, जो नाटकीय इलास्टिन गिरावट और कैल्शियम जमाव4 से जुड़ा हुआ है। सीएपीओ4 मॉडल इन्फ्रारेनल पेट महाधमनी में एक फ्यूसीफॉर्म फैलाव को प्रेरित करता है, जो मानव एएए स्थिति की नकल करता है, जबकि एंजीआई छिड़काव सुप्रारेनल एएए और थोरैसिक महाधमनी धमनीविस्फार दोनों को प्रेरित करता है। इलास्टेस, एंजीआईआई और आसमाटिक मिनी-पंप की लागत को ध्यान में रखते हुए, सीएपीओ4 मॉडल को करना अधिक लागत प्रभावी है। हालांकि, यह कहना उचित है कि सीएपीओ4 मॉडल एएए विशेषताओं जैसे कि भित्ति थ्रोम्बस गठन और महाधमनी टूटना को प्रेरित नहीं कर सकता है, और मॉडल तेजी से है और इस प्रकार, मौजूदा एएए के साथ हस्तक्षेप अध्ययन करने के लिए कम उपयुक्त है। सीएपीओ4 मॉडल एएए विकास के लिए संवेदनशीलता का आकलन करने के लिए आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों के साथ काम करने के लिए आदर्श है।
सीएपीओ4-प्रेरित एएए गठन के अंतर्निहित तंत्र को अभी तक पूरी तरह से स्पष्ट नहीं किया गया है। पिछले अध्ययनों से संकेत मिलता है कि कैल्शियम आयन सीधे प्रमुख धमनी संरचनात्मक घटकों, इलास्टिन और कोलेजन से जुड़ सकता है, बाह्य मैट्रिक्स क्षरण की सुविधा प्रदान करता है और पोत की दीवार स्थिरतामें कमी करता है। सीएपीओ4 क्रिस्टल की पहचान महत्वपूर्ण एनओडी-जैसे रिसेप्टर प्रोटीन 3 (एनएलआरपी 3) ज्वलनशील सक्रियण और चिकनी मांसपेशी कोशिका एपोप्टोसिस 4,15 को ट्रिगर करने के लिए भी की गई है। इसके अलावा, माइक्रोकैल्सीफिकेशन क्रिस्टल ओस्टियोक्लास्ट जैसी कोशिकाओं में मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं को प्रेरित करने और मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज (एमएमपी) उत्पादन को बढ़ावा देने में सक्षम हैं और अंततः महाधमनी विस्तार16 में परिणाम हो सकते हैं।
CaPO4 मॉडल का प्रदर्शन करते समय, सफलता दर में सुधार के लिए कई मुद्दों से बचा जाना चाहिए। पृष्ठीय शाखा रक्त वाहिकाओं को फाड़ने से बचना चाहिए, पेट की गुहा में अतिरिक्त सीएसीएल2 समाधान को जोड़ने से बचना चाहिए, और संज्ञाहरण के ओवरडोज से बचना चाहिए। सर्जरी के दौरान या पोस्टऑपरेटिव संक्रमण के साथ गंभीर रक्तस्राव वाले चूहों को प्रयोग से बाहर रखा जाना चाहिए। जैसा कि पहले बताया गया है, जब अवलोकनों की संख्या पर्याप्त होती है, तो सीएपीओ4 मॉडल में महाधमनी के अधिकतम व्यास आमतौर पर सामान्य रूप से वितरित किए जाते हैं, जो एंजीआईआई मॉडल7 से अलग है। इसलिए, हम सीएपीओ4 मॉडल का उपयोग करते समय एएए घटनाओं के बजाय महाधमनी के अधिकतम व्यास की तुलना की सलाह देते हैं।
कुल मिलाकर, सीएपीओ4-प्रेरित चूहों एएए मॉडल एएए के आणविक तंत्र और चिकित्सीय रणनीतियों का पता लगाने के लिए एक तेज़ और लागत प्रभावी दृष्टिकोण है और मानव एएए की विशेषताओं की पूरी तरह से नकल करने के लिए अन्य मॉडलों के समानांतर लागू किया जा सकता है।
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Acknowledgments
इस शोध को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (एनएसएफसी, 81730010, 91839302, 81921001, 31930056 और 91529203) और चीन के राष्ट्रीय कुंजी आर एंड डी कार्यक्रम (2019वाईएफए 0801600) से वित्त पोषण द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| CaCl2 | MECKLIN | C805225 | |
| NaCl | Biomed | SH5001-01 | |
| PBS | HARVEYBIO | MB5051 | |
| Small animal ventilator | RWD | H1550501-012 |
References
- Kent, K. C.
- Patelis, N., et al. Animal models in the research of abdominal aortic aneurysms development. Physiological Research. 66 (6), 899-915 (2017).
- Gertz, S. D., Kurgan, A., Eisenberg, D. Aneurysm of the rabbit common carotid artery induced by periarterial application of calcium-chloride in vivo. Journal of Clinical Investigation. 81 (3), 649-656 (1988).
- Yamanouchi, D., et al. Accelerated aneurysmal dilation associated with apoptosis and inflammation in a newly developed calcium phosphate rodent abdominal aortic aneurysm model. Journal of Vascular Surgery. 56 (2), 455-461 (2012).
- Wang, Y. T., et al. Influence of apolipoprotein E, age and aortic site on calcium phosphate induced abdominal aortic aneurysm in mice. Atherosclerosis. 235 (1), 204-212 (2014).
- Zhao, G., et al. Unspliced xbp1 confers VSMC homeostasis and prevents aortic aneurysm formation via foxo4 interaction. Circulation Research. 121 (12), 1331-1345 (2017).
- Jia, Y., et al. Targeting macrophage TFEB-14-3-3 epsilon interface by naringenin inhibits abdominal aortic aneurysm. Cell Discovery. 8 (1), 21 (2022).
- Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of Visualized Experiments. (65), e3564 (2012).
- Yu, B., et al. CYLD deubiquitinates nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4 contributing to adventitial remodeling. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (8), 1698-1709 (2017).
- Altobelli, E., Rapacchietta, L., Profeta, V. F., Fagnano, R. Risk factors for abdominal aortic aneurysm in population-based studies: A systematic review and meta-analysis. International Journal of Environmental Research and Public Health. 15 (12), 2805 (2018).
- Theivacumar, N. S., Stephenson, M. A., Mistry, H., Valenti, D. Diabetes mellitus and aortic aneurysm rupture: A favorable association. Vascular and Endovascular Surgery. 48 (1), 45-50 (2014).
- Tanaka, T., Takei, Y., Yamanouchi, D. Hyperglycemia suppresses calcium phosphate-induced aneurysm formation through inhibition of macrophage activation. Journal of the American Heart Association. 5 (3), 003062 (2016).
- Lu, H., et al. Subcutaneous angiotensin II infusion using osmotic pumps induces aortic aneurysms in mice. Journal of Visualized Experiments. (103), e53191 (2015).
- Urry, D. W. Neutral sites for calcium ion binding to elastin and collagen: A charge neutralization theory for calcification and its relationship to atherosclerosis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 68 (4), 810-814 (1971).
- Li, Z. Q., et al. Runx2 (runt-related transcription factor 2)-mediated microcalcification is a novel pathological characteristic and potential mediator of abdominal aortic aneurysm. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 40 (5), 1352-1369 (2020).
- Kelly, M. J., Igari, K., Yamanouchi, D. Osteoclast-like cells in aneurysmal disease exhibit an enhanced proteolytic phenotype. International Journal of Molecular Sciences. 20 (19), 4689 (2019).
