Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

एक संशोधित मुराइन हेटरोटोपिक हार्ट ट्रांसप्लांट प्रोटोकॉल सड़न रोकनेवाला तकनीक, संज्ञाहरण और एनाल्जेसिया के समकालीन मानकों से मेल खाता है

Published: September 28, 2022 doi: 10.3791/64284
Automatic Translation
1, 2, 1,3, 1, 1, 1, 1, 1,4, 5
1Medical School, The University of Western Australia, 2Animal Care Services, The University of Western Australia, 3Western Australian Liver and Kidney Transplant Service, Sir Charles Gairdner Hospital, 4Department of Immunology, Sir Charles Gairdner Hospital and Pathwest Laboratory Medicine, 5School of Biomedical Sciences, The University of Western Australia

Summary

वर्तमान पेपर में अद्यतन सड़न रोकनेवाली तकनीक, एनाल्जेसिया और संज्ञाहरण के साथ हेटरोटोपिक संवहनी हृदय प्रत्यारोपण के लिए एक संशोधित तकनीक का वर्णन किया गया है।

Abstract

जानवरों में हृदय प्रत्यारोपण के प्रयोगात्मक मॉडल के विकास ने प्रतिरक्षा विज्ञान और ठोस अंग प्रत्यारोपण के क्षेत्र में कई प्रगति में योगदान दिया है। जबकि हेटरोटोपिक संवहनी म्यूरिन कार्डियक प्रत्यारोपण मॉडल का उपयोग शुरू में बेमेल इनब्रेड माउस उपभेदों के संयोजन का उपयोग करके ग्राफ्ट अस्वीकृति के अध्ययन में किया गया था, आनुवंशिक रूप से संशोधित उपभेदों और चिकित्सीय तौर-तरीकों तक पहुंच शक्तिशाली नई प्रीक्लिनिकल अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकती है। मौलिक रूप से, इस तकनीक के लिए शल्य चिकित्सा पद्धति इसके विकास के बाद से नहीं बदली है, विशेष रूप से सड़न रोकनेवाला तकनीक, संज्ञाहरण और एनाल्जेसिया जैसे महत्वपूर्ण कारकों के संबंध में, जो पोस्टसर्जिकल रुग्णता और मृत्यु दर पर भौतिक प्रभाव डालते हैं। इसके अतिरिक्त, पेरीओपरेटिव प्रबंधन में सुधार पशु कल्याण और प्रयोगात्मक परिणामों दोनों में सुधार प्रदान करने की उम्मीद है। यह पेपर पशु चिकित्सा संज्ञाहरण में एक विषय वस्तु विशेषज्ञ के सहयोग से विकसित एक प्रोटोकॉल पर रिपोर्ट करता है और पेरीओपरेटिव प्रबंधन पर जोर देने के साथ सर्जिकल तकनीक का वर्णन करता है। इसके अतिरिक्त, हम इन परिशोधनों के निहितार्थों पर चर्चा करते हैं और इस प्रक्रिया के लिए महत्वपूर्ण शल्य चिकित्सा चरणों के समस्या निवारण पर विवरण प्रदान करते हैं।

Introduction

हम पशु विषयों का उपयोग करके ठोस अंग प्रत्यारोपण के प्रयोगात्मक मॉडल के आधार पर अनुसंधान के लिए इम्यूनोलॉजी और प्रत्यारोपण की हमारी समझ का श्रेय देते हैं। स्तनधारियों1 में संवहनी हृदय प्रत्यारोपण के पहले विवरण के बाद से, ऐसे मॉडलों ने व्यापक डोमेन में ज्ञान में योगदान दिया है, जिसमें हाइपोथर्मिया2 के चिकित्सीय अनुप्रयोग, विशेष सीवन3 का उपयोग करने के लाभ और कुल फेफड़े और हृदय होमोट्रांसप्लांटेशन के लिए तकनीकशामिल हैं। चूहों 5,6 में कार्डियक प्रत्यारोपण मॉडल के विकास ने विभिन्न प्रजनन लाइनों की उपलब्धता के कारण प्रतिरक्षात्मक प्रयोग के लिए व्यापक गुंजाइश प्रदान की। उपलब्ध इनब्रेड और उत्परिवर्ती माउस उपभेदों की काफी विस्तृत श्रृंखला ने कोरी एट अल.7 को मुराइन हेटरोटोपिक कार्डियक प्रत्यारोपण की एक तकनीक विकसित करने के लिए प्रेरित किया क्योंकि यह सीमा प्रत्यारोपण अनुसंधान के लिए काफी फायदे लाती है। इस मॉडल का व्यापक रूप से उपयोग किया गया है और ग्राफ्ट अस्वीकृति8 और चिकित्सीय9 की अधिक समझ में योगदान दिया है। अपने पहले विवरण के बाद से, हालांकि, तकनीक कुछ मामूली तकनीकी विवरणों के अलावा काफी हद तक अपरिवर्तित रही है जैसे कि एनास्टोमोटिक साइटों की स्थिति में समायोजन10,11।

हमारे प्रयोगों में कोरी एट अल.7 की तकनीक के एकीकरण के बाद से, हमने प्रोटोकॉल में सुधार के लिए वादे के क्षेत्रों की पहचान की है, अर्थात् सड़न रोकनेवाला तकनीक, संज्ञाहरण और एनाल्जेसिया। इन क्षेत्रों में सुधार से प्रयोगात्मक परिणामों पर सकारात्मक प्रभाव पड़ने और पशु कल्याण में सुधार की उम्मीद थी। यह पहले दिखाया गया है जब छोटी जानवरों की सर्जरी में सड़न रोकनेवाला तकनीक का उपयोग किया जाता है क्योंकि यह पोस्टऑपरेटिव संक्रमण12 को कम करने में सहायता करता है, जो न केवल रुग्णता और मृत्यु दर को प्रभावित करता है, बल्कि प्रत्यारोपण सर्जरी के बाद प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का आकलन करने के लिए डिज़ाइन किए गए प्रयोगों से भी समझौता कर सकता है। संज्ञाहरण और एनाल्जेसिक दृष्टिकोण से, एक परिष्कृत आहार का उपयोग जानवरों की लागत को कम करने और प्रयोगात्मक विषयों के दर्द और पीड़ा को कम करके इस सर्जिकल मॉडल के नैतिक तर्क को संतुलित करने में मदद करता है। इसके अलावा, उचित संज्ञाहरण और एनाल्जेसिया दर्द से जुड़े तनाव प्रतिक्रिया को सीमित करते हैं, पोस्टऑपरेटिव रिकवरी की गुणवत्ता में सुधार करते हैं और अंततः, सर्जिकल सफलता दरमें वृद्धि करते हैं।

पशु कल्याण और प्रयोगात्मक परिणामों दोनों में सुधार के उद्देश्य से, इन अंतरालों को पाटने के लिए समायोजन के साथ एक प्रोटोकॉल विकसित किया गया था। इस प्रोटोकॉल को मूल रूप से एक पशु चिकित्सा एनेस्थेटिस्ट के परामर्श के साथ और एनेस्थेटिक और एनाल्जेसिक आहार में उपयोग किए जाने वाले औषधीय हस्तक्षेप के प्रभावों और अवधि दोनों के लिए उचित विचार के साथ कॉरी एट अल.7 द्वारा वर्णित से अनुकूलित किया गया है। यह दृष्टिकोण उचित पेरीओपरेटिवदेखभाल सुनिश्चित करने के लिए संतुलित संज्ञाहरण और मल्टीमॉडल एनाल्जेसिया के सिद्धांतों पर आधारित था। सड़न रोकनेवाला तकनीक के आवेदन के अलावा, ओपिओइड बुप्रेनोर्फिन और स्थानीय एनेस्थेटिक बुपिवैकेन को पूर्व-निर्धारित रूप से प्रशासित किया गया था। सामान्य संज्ञाहरण इनहेलेंट एनेस्थेटिक एजेंट आइसोफ्लुरेन का उपयोग करके किया गया था।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

यह शोध वैज्ञानिक उद्देश्यों के लिए जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए अभ्यास संहिता15 के अनुसार किया गया था और पशु नैतिकता प्रोटोकॉल आरए / 3/100/1568 और एई 173 (पश्चिमी ऑस्ट्रेलिया पशु नैतिकता समिति विश्वविद्यालय और हैरी पर्किन्स इंस्टीट्यूट ऑफ मेडिकल रिसर्च एनिमल एथिक्स कमेटी, क्रमशः) के तहत अनुमोदित किया गया था। इस प्रोटोकॉल में उपयोग की जाने वाली सभी सामग्रियों, उपकरणों और जानवरों के बारे में विवरण के लिए सामग्री की तालिका देखें।

1. सर्जरी के लिए जानवर की तैयारी

नोट: कार्मिक या तो सर्जरी करने या प्रक्रिया के दौरान संज्ञाहरण की निगरानी की भूमिका के लिए समर्पित हैं।

  1. प्रीऑपरेटिव एनाल्जेसिया के लिए, प्राप्तकर्ता सर्जरी की शुरुआत से कम से कम 1 घंटे पहले प्राप्तकर्ता माउस को ब्यूप्रेनोर्फिन (0.05-0.1 मिलीग्राम / किग्रा, सोडियम क्लोराइड 0.9% के साथ 0.03 मिलीग्राम / एमएल तक पतला) की खुराक दें। एनेस्थेटिक रिकॉर्ड में दवाओं के प्रशासन, उनकी खुराक, प्रशासन के समय और उनके प्रभावों से संबंधित सभी विवरण दर्ज करें।
    नोट: दाता के लिए यह दृष्टिकोण आवश्यक रूप से आवश्यक नहीं है क्योंकि यह एक गैर-वसूली सर्जरी है, जहां दाता को अंग की फसल के तुरंत बाद सामान्य एनेस्थेटिक के तहत इच्छामृत्यु दी जाती है।
  2. संज्ञाहरण का प्रेरण
    1. माउस को एनेस्थेटिक श्वास प्रणाली के प्रेरण कक्ष में 4% आइसोफ्लुरेन के साथ 1-2 एल-मिन-1 के ऑक्सीजन प्रवाह के साथ रखें। पुनरावृत्ति, राइटिंग रिफ्लेक्स की हानि, और श्वसन दर में कमी को देखकर पर्याप्त संज्ञाहरण की पुष्टि करें।
    2. एक बार पर्याप्त रूप से एनेस्थेटाइज्ड होने के बाद, माउस को प्रेरण कक्ष से हटा दें और बालों को हटाने के लिए क्लिपर का उपयोग करके उदर पेट को बारीकी से शेव करें। दाता के मामले में, जननांग से उदर वक्ष के ऊपरी मार्जिन तक फैले क्षेत्र को शेव करें। प्राप्तकर्ता के मामले में, जननांग से कॉस्टल मार्जिन तक फैले क्षेत्र को शेव करें। दोनों मामलों में, सुनिश्चित करें कि शेव किया गया क्षेत्र पार्श्व रूप से मिडएक्सिलरी लाइन तक पहुंचता है।
  3. संज्ञाहरण को बनाए रखने के लिए, श्वास प्रणाली (गैर-श्वास) के नाक शंकु से एनेस्थेटिक और ऑक्सीजन प्राप्त करने के लिए माउस को पृष्ठीय पुनरावृत्ति में रखें, जो 1 एल-मिन-1 और आइसोफ्लुरेन (1.5% - 2.5%) की दर से ऑक्सीजन वितरित करता है।
    नोट: सर्जिकल कार्य सतह एक हीटिंग पैड पर एक सर्जिकल बोर्ड है, और माउस के प्रत्येक अंग को माइक्रोप्रोम टेप का उपयोग करके सुरक्षित किया जाता है।
  4. चूहों में संज्ञाहरण से जुड़े शारीरिक परिवर्तनों की व्यापक निगरानी में कठिनाई को देखते हुए, सीमित मापदंडों की निगरानी और रिकॉर्ड करें। संज्ञाहरण की अवधि के लिए कम से कम हर 5 मिनट में तापमान, संज्ञाहरण की गहराई और श्वसन दर की निगरानी करें।
    1. गंभीर हाइपोथर्मिया और हाइपरथर्मिया (हीट पैड द्वारा सक्रिय वार्मिंग से) को रोकने के लिए, पूरी प्रक्रिया में शरीर के तापमान की निगरानी करें। जानवर के मलाशय में एक साफ, चिकनाई युक्त रेक्टल जांच डालें और फिर इसे माइक्रोप्रोम टेप का उपयोग करके सर्जिकल बोर्ड पर सुरक्षित करें।
      नोट: यह जांच एक गतिशील प्रणाली (एनेस्थेटिक डिलीवरी सिस्टम की एक विशेषता) पर वापस फ़ीड करती है, जो शरीर के तापमान को प्रबंधित करने के लिए हीटिंग पैड के तापमान को संशोधित करती है।
    2. एनेस्थीसिया के लिए जिम्मेदार व्यक्ति को एट्रोमैटिक फोर्स, पैल्पेब्रल रिफ्लेक्स और मांसपेशियों की टोन द्वारा लगाए गए दबाव से पंजे या पूंछ की उत्तेजना के लिए प्रतिक्रियाओं को देखकर एनेस्थेटिक गहराई का आकलन करना चाहिए।
    3. ज्वारीय मात्रा का आकलन करने के लिए व्यक्तिपरक रूप से श्वसन प्रयास का अवलोकन करते हुए छाती की दीवार की गति को देखकर श्वसन दर को मापें। सांस की दर /मिनट निर्धारित करने के लिए 10-15 सेकंड की अवधि में सांसों की गिनती करके और क्रमशः 6 या 4 से गुणा करके श्वसन दर की गणना करें।
  5. त्वचा को तैयार करने के लिए, बाँझ कपास-टिंप एप्लिकेटर का उपयोग करके सर्जिकल साइट को कीटाणुरहित करें। एक गोलाकार में क्लोरहेक्सिडाइन लागू करें, सर्जिकल साइट के केंद्र से किनारों तक काम करने वाली गति का विस्तार करें। क्लोरहेक्सिडाइन और इथेनॉल के संयोजन के अंतिम अनुप्रयोग से पहले इस प्रक्रिया को 3x (हर बार एक नए कपास-युक्त एप्लिकेटर के साथ) दोहराएं, एक ही पैटर्न में एक नए बाँझ कपास-टिंप वाले एप्लिकेटर के साथ, सर्जिकल साइट के केंद्र से किनारे तक जाएं।
  6. बाँझ सर्जिकल गाउन और बाँझ सर्जिकल दस्ताने पहनने से पहले सर्जन को इथेनॉल-आधारित हैंड जेल लागू करें।
  7. सर्जिकल क्षेत्र तैयार करने के लिए, सर्जिकल बोर्ड के दोनों ओर बाँझ सर्जिकल ड्रेप (25 सेमी x 25 सेमी तक प्रीकट) रखें, जो बाँझ उपकरणों को रखने के लिए साइट के रूप में कार्य करते हैं। एक छोटे (चीरा स्थल से थोड़ा लंबा), अंडाकार आकार के उद्घाटन को काटने के लिए 25 सेमी x 40 सेमी बाँझ ड्रेप को काटने के लिए बाँझ कैंची का उपयोग करें। इस ड्रेप को जानवर के शीर्ष पर इस तरह से बिछाएं कि प्रस्तावित चीरा स्थल पर पंख स्थित हो। सुनिश्चित करें कि इस तीसरे ड्रेप के पार्श्व छोर एक निरंतर सर्जिकल क्षेत्र बनाने के लिए दोनों तरफ दो छोटे पर्दे को ओवरलैप करते हैं।

2. दाता सर्जरी

नोट: दाता सर्जरी के प्रमुख पहलुओं के लिए पूरक चित्रा एस 1 देखें।

  1. सर्जिकल दूरबीन माइक्रोस्कोप की सहायता से दाता सर्जरी करें। शुरू करने के लिए, 8x के आवर्धन का उपयोग करें, और सर्जिकल स्केलपेल ब्लेड (# 23) का उपयोग करके एक वेंट्रल मिडलाइन त्वचा चीरा करें। सुनिश्चित करें कि चीरा शेव किए गए क्षेत्र के पुच्छल छोर से कॉस्टल मार्जिन तक फैला हुआ है, जिसमें दोनों छोर पर तैयार त्वचा का बरकरार मार्जिन है।
    नोट: सर्जरी की शुरुआत में विषय की मैक्रोस्ट्रक्चर के पर्याप्त विज़ुअलाइज़ेशन को सक्षम करने के लिए 8x का प्रारंभिक आवर्धन चुना जाता है। इस बिंदु से, आवर्धन ऑपरेटर के विवेक पर है और इसे कम आवर्धन द्वारा प्रदान की गई स्थितिजन्य जागरूकता और उच्च आवर्धन के साथ कल्पना की जा सकने वाली बारीक जानकारी के बीच एक उपयुक्त संतुलन प्रदान करने के लिए चुना जाना चाहिए।
  2. गर्म सामान्य खारा के साथ नम दो बाँझ कपास-टिंप एप्लिकेटर का उपयोग करके, पेट की महाधमनी और अवर वेना कावा (आईवीसी) को उजागर करने के लिए छोटी आंत को स्थानांतरित करें। आसपास के ऊतक से इन वाहिकाओं को स्पष्ट रूप से विच्छेदित करने के लिए एप्लिकेटर का उपयोग करें।
  3. हेपरिनाइज्ड सोडियम क्लोराइड 0.9% समाधान के 100 आईयू-एमएल-1 के 2.5 एमएल को खींचने के लिए सुई में 30 ग्राम, 0.5 एमएल के साथ 3.0 एमएल सिरिंज का उपयोग करें (सर्जरी के दौरान आवश्यक होने तक 4 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा गया)। इन्फ्रा-डायाफ्रामिक क्षेत्र में पेट की महाधमनी को सुरक्षित करने के लिए गैर-प्रमुख हाथ के साथ सीधे-टिप, गोल-शरीर सीवन बल का उपयोग करके, हृदय की दिशा में महाधमनी में 1.5 एमएल घोल इंजेक्ट करने के लिए प्रमुख हाथ का उपयोग करें। एक कपास युक्त एप्लिकेटर से दबाव के साथ परिणामी ऑर्टोटॉमी को सील करें।
  4. आईवीसी को सही करने के लिए सीधे-टिंप माइक्रोसर्जिकल कैंची का उपयोग करें ताकि एक्ससेंग्यूनेशन की अनुमति मिल सके।
  5. द्विपक्षीय मिडएक्सिलरी लाइनों में दो चीरे लगाने के लिए सर्जिकल कैंची का उपयोग करके थोराकोटॉमी करें। इस बिंदु पर, जानवर की मौत की पुष्टि करें और आइसोफ्लुरेन वेपोराइज़र को बंद कर दें।
  6. माइक्रो-बुलडॉग क्लैंप का उपयोग करके वक्ष दीवार के परिणामी मध्य खंड को सुरक्षित करें। इसे गैर-बाँझ सर्जिकल सहायक को पास करें जो माइक्रोप्रोम सर्जिकल टेप का उपयोग करके नाक शंकु को सुरक्षित कर सकता है।
    नोट: लक्ष्य वक्ष के इस खंड पर कर्षण प्रदान करना है, जो हृदय के ऊतकों के संपर्क में सहायता करता है।
  7. गोल शरीर सीवन बल का उपयोग करके, इंट्रा-थोरेसिक आईवीसी की पहचान करें और जुटाएं।
    नोट: आदर्श रूप से, सीधे-तिरपे बल गैर-प्रमुख हाथ में और घुमावदार बल प्रमुख हाथ में होना चाहिए।
  8. गैर-प्रमुख हाथ के बल में सुरक्षित आईवीसी के साथ, 100 आईयू-एमएल - 1 हेपरिनाइज्ड सोडियम क्लोराइड 0.9% समाधान के शेष 1.5 एमएल को हृदय में इंजेक्ट करने के लिए प्रमुख हाथ का उपयोग करें।
  9. बल के दोनों सेटों का उपयोग करके, 2 सेमी लंबाई के 7/0 चोटी वाले रेशम का उपयोग करके आईवीसी को अलग करें। सुरक्षा के लिए दो अतिरिक्त थ्रो के साथ सर्जन की गाँठ बांधने वाले उपकरण का उपयोग करें। इस गाँठ को बर्तन के साथ हृदय तक यथासंभव समीपस्थ बनाएं।
  10. धमनी बल का उपयोग करके इस गाँठ के दो सिरों को सुरक्षित करें। इन बलों को इस तरह रखें कि वे पुच्छल दिशा में हृदय का कोमल कर्षण प्रदान करें ताकि बाद के विच्छेदन के लिए इष्टतम पोत स्थिति की सुविधा मिल सके।
  11. दिल के एंटीरोसुपीरियर पहलू पर थाइमस की पहचान करें। बेहतर वेना कावा (एसवीसी) की पहचान करने के लिए दाता से इस अंग को विच्छेदित करने के लिए बल का उपयोग करें।
  12. बल का उपयोग करके एसवीसी के एडवेंटिटिया और संबंधित ऊतकों को हटा दें। घुमावदार बल का उपयोग करके स्पष्ट रूप से विच्छेदन करें और पोत के पीछे एक छोटा चैनल बनाएं। सुनिश्चित करें कि यह चैनल जितना संभव हो उतना दिल के समीपस्थ है।
  13. इस चैनल के माध्यम से 2 सेमी लंबाई के 7/0 चोटी वाले रेशम के एक टुकड़े को बल का उपयोग करके पास करें और फिर उपरोक्त तकनीक का उपयोग करके इसे बांध दें।
  14. इस बंधाव से लगभग 2 मिमी (दिल के विपरीत तरफ) एक बिंदु पर, घुमावदार माइक्रोसर्जिकल कैंची का उपयोग करके एसवीसी को विभाजित करें।
  15. कपास से ढके हुए एप्लिकेटर का उपयोग करके, दिल को शारीरिक दाईं ओर घुमाएं।
  16. दिल के शारीरिक बाईं ओर एज़िगोस नस की पहचान करें। बल का उपयोग करके, इसे आसपास की संरचनाओं से स्पष्ट रूप से विच्छेदित करें। पहले की तरह, इस पोत के पीछे एक छोटा चैनल बनाने के लिए घुमावदार-टिंप बल का उपयोग करें।
  17. एक ही गाँठ बांधने की तकनीक का उपयोग करके दिल के अधिकतम निकटता पर एज़िगोस नस को अलग करने के लिए 7/0 चोटी वाले रेशम के तीसरे टुकड़े का उपयोग करें। बर्तन को दिल से दूर की तरफ बंधाव से 2 मिमी काट लें।
  18. कॉटन-टिंप एप्लीकेटर्स का उपयोग करके, दिल के शीर्ष को शारीरिक बाईं ओर वापस पलटें। आरोही महाधमनी को पहचानने और जुटाने के लिए बल का उपयोग करें। आरोही और अवरोही महाधमनी के बीच एक चैनल बनाने के लिए महाधमनी मेहराब के नीचे घुमावदार बल को पारित करें।
  19. सीधे-टिप माइक्रोसर्जिकल कैंची का उपयोग करके, महाधमनी चाप को उसकी शाखाओं के समीप सही करें।
  20. बल का उपयोग करके, फुफ्फुसीय धमनी की पहचान करें और जुटाएं। घुमावदार बल का उपयोग करके, पोत के पीछे एक चैनल बनाएं।
  21. सीधी-सीधी माइक्रोसर्जिकल कैंची का उपयोग करके, धमनी को उसके विभाजन के ठीक समीप एक बिंदु पर सही करें।
  22. फुफ्फुसीय धमनी के माध्यम से हेपरिनाइज्ड सोडियम क्लोराइड 0.9% के 2 मिलीलीटर 10 आईयू-एमएल-1 को धीरे-धीरे इंजेक्ट करने के लिए एक राइक्रॉफ्ट सिंचाई प्रवेशनी का उपयोग करें और हृदय से किसी भी शेष रक्त को फ्लश करने के लिए आरोही महाधमनी का उपयोग करें।
    नोट: कोरोनरी वाहिकाओं से दिखाई देने वाले रक्त की निकासी से एक पर्याप्त फ्लश का संकेत मिलता है।
  23. 7/0 चोटी वाले रेशम के 3 सेमी टुकड़े का उपयोग करके, शेष पीछे की वाहिकाओं (फुफ्फुसीय नसों) को एक सर्जन की गाँठ का उपयोग करके दो बाद के थ्रो के साथ एक साथ जोड़ दें। सर्जिकल कैंची का उपयोग करके सावधानीपूर्वक काटकर दिल को पीछे की वक्ष दीवार से अलग करें।
  24. धीरे से छाती से दिल को हटा दें, इसे विस्कॉन्सिन समाधान विश्वविद्यालय (यूडब्ल्यूएस) में डुबोएं, और फिर इसे भंडारण (4 डिग्री सेल्सियस पर) के लिए बर्फ पर रखें।

3. प्राप्तकर्ता सर्जरी

  1. खंड 1 में वर्णित पशु की तैयारी के बाद, आंखों के स्नेहक लागू करें। योजनाबद्ध चीरा स्थल के साथ उदर पेट के चमड़े के नीचे के ऊतक में बूपिवैकेन की वजन-आधारित खुराक (8 मिलीग्राम / किग्रा) (सोडियम क्लोराइड 0.9% समाधान में 0.25% पतला 0.625 मिलीग्राम / एमएल) इंजेक्ट करें। इस इंजेक्शन के लिए 29 ग्राम इंसुलिन सिरिंज का उपयोग करें और दिखाई देने वाली ब्लीबिंग की एक सीधी रेखा देखें जो नियोजित चीरा (पूरक चित्रा एस 2 ए-सी) की सीमा को कवर करती है।
    नोट: स्थानीय एनेस्थेटिक के चरम प्रभाव के लिए समय की अनुमति देने के लिए पांच-सात मिनट दिए जाने चाहिए।
  2. माइक्रोस्कोप को 8x आवर्धन पर सेट करने के साथ, एक बाँझ सर्जिकल स्केलपेल ब्लेड (# 23) का उपयोग करके एक वेंट्रल मिडलाइन त्वचा चीरा लगाएं। सुनिश्चित करें कि लैप्रोटॉमी निचले पेट से कॉस्टल मार्जिन तक फैली हुई है। सर्जिकल क्षेत्र को अधिकतम करने के लिए एक रिकॉलर डालें (पूरक चित्रा एस 2 डी)।
  3. गर्म 0.9% सोडियम क्लोराइड घोल के साथ बाँझ धुंध के 5 सेमी x 5 सेमी खंड को नम करें और इसे सर्जिकल साइट के बेहतर पहलू पर रखें। बाँझ कपास की कलियों का उपयोग करके, धीरे से आंतों को अलग करें, उन्हें इस धुंध के शीर्ष पर रखें, और अंग के चारों ओर धुंध लपेटें (पूरक चित्रा एस 3 ए)।
    नोट: यह प्रक्रिया सर्जरी के दौरान अविवेकपूर्ण द्रव हानि को कम करने में मदद करती है और वापसी में सहायता करती है।
  4. एक कुंद विच्छेदन तकनीक का उपयोग करके आसपास के ऊतकों से पेट की महाधमनी और आईवीसी को मुक्त और जुटाएं। इस चरण के लिए कपास-टिंप एप्लिकेटर और गोल-शरीर सीवन बल के संयोजन का उपयोग करें। सुनिश्चित करें कि निकासी का क्षेत्र वाहिकाओं के इन्फ्रा-रीनल पहलू के बीच और महाधमनी के विभाजन के ठीक ऊपर है (पूरक चित्रा एस 3 बी)।
    नोट: इस बिंदु पर उचित विज़ुअलाइज़ेशन उच्च गुणवत्ता वाले संवहनी एनास्टोमोसेस की सुविधा प्रदान करेगा।
  5. पीछे की पेट की वाहिकाओं की पहचान करें। बल का उपयोग करके, महाधमनी को धीरे-धीरे कशेरुक स्तंभ से दूर एक दिशा में कर्षण करें (यानी, पेट की वाहिकाओं की धुरी के लिए अनुदैर्ध्य)।
    नोट: यह महत्वपूर्ण है कि केवल महाधमनी और आईवीसी को इस तरह से संभाला जाता है न कि आईवीसी को उत्तरार्द्ध की स्थिरता के कारण।
  6. नियोजित एनास्टोमोटिक क्षेत्र में पहचाने जाने वाले प्रत्येक पेट वाहिका को लिगेट करें। इन वाहिकाओं के दोनों ओर एक चैनल बनाएं, दोनों तरफ पेट की वाहिकाओं के पीछे घुमावदार बल को पारित करके सेफलोकॉडली बनाएं। उपकरणों के साथ बंधे 10/0 नायलॉन की लंबाई का उपयोग करके प्रत्येक पोत को एक अतिरिक्त थ्रो (पूरक चित्रा एस 3 सी) के साथ सर्जन की समुद्री मील में इस तरह से पहचाना और जुटाया गया।
  7. एनास्टोमोटिक साइट को परिसंचरण से अलग करें। ऐसा करने के लिए, सिर और फिर पेट की वाहिकाओं के पुच्छल सिरों पर एक सर्जिकल क्लैंप स्थापित करें (महत्वपूर्ण रूप से, उस सटीक क्रम में)। सुनिश्चित करें कि क्लैंप पूर्ण रोड़ा सुनिश्चित करने के लिए दोनों वाहिकाओं को पर्याप्त डिग्री तक पार करते हैं।
  8. महाधमनी को स्थिर करने के लिए गैर-प्रमुख हाथ में बल का उपयोग करके, महाधमनी के पूर्ववर्ती पहलू पर 30 ग्राम सुई का उपयोग करके एक ऑर्टोटॉमी करें। सीधे-टिंप माइक्रोसर्जिकल कैंची (पूरक चित्रा एस 3 डी) का उपयोग करके इसका विस्तार करें।
  9. वेनोटॉमी करें। सीधे बल का उपयोग करके, ऑर्टोटॉमी के मध्य के अनुरूप बिंदु पर आईवीसी पर कोमल पूर्वकाल कर्षण लागू करें। ऑर्टोटॉमी (पूरक चित्रा एस 4 ए) के बराबर लंबाई के आईवीसी के एक खंड को हटाने के लिए अवतल पक्ष के साथ घुमावदार माइक्रोसर्जिकल कैंची का उपयोग करें।
  10. 10 IU-mL-1 हेपरिनाइज्ड सोडियम क्लोराइड समाधान का उपयोग करके, शेष रक्त के खुले वाहिकाओं के अंदरूनी हिस्सों को धो लें।
  11. दाता के दिल को पेट में रखें। सुनिश्चित करें कि स्थिति ऐसी है कि आरोही महाधमनी सीधे पेट के ऑर्टोटॉमी के साथ है और हृदय को घुमाया जाता है ताकि फुफ्फुसीय धमनी को दूसरे एनास्टोमोसिस के लिए खींचा जा सके।
  12. 10/0 नायलॉन का उपयोग करके, ऑर्टोटॉमी की 12 बजे की स्थिति और आरोही महाधमनी के लुमेन के संबंधित छोर के बीच एक स्टे सीवन रखें। इसे सीधे-सीधे बल और एक माइक्रोसर्जिकल सुई धारक का उपयोग करके करें और इसे एक सर्जन की गाँठ का उपयोग करके तीन बाद के थ्रो के साथ बांध दें। लगभग 2 मिमी सीवन छोड़ने के लिए सिरों को काट लें।
  13. ऑर्टोटॉमी की 6 बजे की स्थिति और आरोही महाधमनी के संबंधित पहलू के बीच एक दूसरा स्टे सीवन रखें। चूंकि यह सीवन बाद में चलने वाले सीवन के लिए आधार के रूप में भी काम करेगा, इसलिए अंतिम टाई-ऑफ के लिए पूंछ का कम से कम 10 मिमी छोड़ दें।
  14. ऑर्टोटॉमी के शारीरिक दाहिने किनारे और आरोही महाधमनी के संबंधित मुक्त किनारे का विरोध करने के लिए आरोही तरीके से 10/0 नायलॉन की एक निरंतर चलने वाली सीवन रखें। इस लाइन के लिए लगभग चार थ्रो का उपयोग करें।
  15. ऑर्टोटॉमी के शेष मुक्त किनारे के साथ अपस्थिति को प्रभावित करने के लिए शारीरिक बाईं ओर एक दूसरी निरंतर चलने वाली सीवन रखने से पहले डिस्टल स्टे सीवन के चारों ओर सीवन के मुक्त छोर को पारित करें। दो अतिरिक्त थ्रो के साथ सर्जन की गाँठ का उपयोग करके सीवन को पूंछ से बांध दें।
  16. आईवीसी वेनोटॉमी की 12 बजे की स्थिति और फुफ्फुसीय धमनी के लुमेन के संबंधित छोर के बीच एक स्टे सीवन रखें।
  17. इस लंगर बिंदु से, फुफ्फुसीय धमनी के शारीरिक बाएं किनारे और वेनोटॉमी के संबंधित किनारे के बीच अवरोही तरीके से एक निरंतर चलने वाली सीवन रखें। इस लाइन के लिए औसतन चार थ्रो का उपयोग करें, इसके बाद वेनोटॉमी की 6 बजे की स्थिति और फुफ्फुसीय धमनी लुमेन के संबंधित छोर के बीच एक का उपयोग करें। फुफ्फुसीय धमनी और वेनोटॉमी के अंतिम मुक्त किनारों को एक साथ खींचने के लिए चार और थ्रो बनाएं।
  18. सीवन के मुक्त छोर को लंगर के छोर से बांधें, एक उपकरण का उपयोग करके सर्जन की गाँठ को दो अतिरिक्त थ्रो के साथ बांध दें।
  19. कपास की कलियों का उपयोग करके पेट में केंद्रीय रूप से बैठने के लिए दिल को पुनर्स्थापित करें। घुमावदार के लिए वाहिकाओं की जांच करें, जो रक्त प्रवाह में हस्तक्षेप करेगा।
  20. सभी सीवन लाइनों (पूरक चित्रा एस 4 बी) पर जेल फोम की स्थिति बनाएं। उनके चारों ओर लगभग 2 मिमी के दो टुकड़े रखें और ढालें ताकि सभी दृश्यमान सीवन रेखाएं कवर हों।
  21. संवहनी क्लैंप छोड़ें: पहले पुच्छल क्लैंप, और फिर सेफलो-क्लैंप। चूंकि रक्तस्राव की एक छोटी मात्रा की उम्मीद की जानी चाहिए, इसलिए दबाव प्रदान करने के लिए एनास्टोमोटिक साइटों पर कपास-युक्त एप्लीकेटर्स को पहले से ही स्थिति में रखें।
  22. एक बार अवलोकन योग्य लीक से मुक्त होने के बाद, धड़कन के लिए दिल का आकलन करें (पूरक चित्रा एस 4 सी)। यदि ऐसा नहीं हो रहा है, तो यह सुनिश्चित करने के लिए जांचें कि हृदय वाहिकाओं का कोई मोड़ नहीं हुआ है (विशेष रूप से आईवीसी के लिए)।
  23. आंतों को अब दिल के ऊपर और आसपास पुनर्स्थापित करें। यदि सूखा दिखाई देता है, तो गर्म सोडियम क्लोराइड समाधान का उपयोग करके पेरिटोनियल गुहा को नम करें।
  24. परतों द्वारा गैर-अवशोषक 6/0 प्रोलीन मोनोफिलामेंट का उपयोग करके पेट की गुहा को बंद करें:
    पहले मांसपेशियों की परत, और फिर त्वचा (पूरक चित्रा एस 4 डी)। निरंतर गैर-बाधित तकनीक का उपयोग करें।
  25. धीरे से प्राप्तकर्ता को सर्जिकल बोर्ड से हटा दें और इसे एनेस्थेटिक से हटा दें।
  26. 1 मिलीलीटर गर्म खारा चमड़े के नीचे प्रशासित करें और प्राप्तकर्ता को पोस्टऑपरेटिव रिकवरी प्रोटोकॉल (पूरक चित्रा एस 4 ई) के अनुसार अवलोकन के लिए वार्मिंग के साथ एक पूर्वतैयार पिंजरे में रखें।

4. पोस्टऑपरेटिव देखभाल

  1. सर्जरी के तुरंत बाद, प्राप्तकर्ता को कम से कम 3 घंटे के लिए करीबी निगरानी में हीटिंग पैड पर एक साफ पिंजरे में रखें। इस अवधि के दौरान, कम से कम हर 30 मिनट में विभिन्न मापदंडों (गतिविधि, शरीर की मुद्रा, कोट की स्थिति, चेहरे की अभिव्यक्ति, चाल, वेंटिलेशन, सर्जिकल साइट की उपस्थिति, स्पष्ट पेट की धड़कन की उपस्थिति) की निगरानी करें। प्रत्येक पैरामीटर (0 = सामान्य, 1 = थोड़ा या रुक-रुक कर असामान्य, 2 = मध्यम या लगातार असामान्य) के लिए एक स्कोर विशेषता दें।
    नोट: हस्तक्षेप इस मॉडल से संबंधित नैतिकता प्रोटोकॉल द्वारा निर्दिष्ट कल्याण स्कोर से अधिक निगरानी मापदंडों के योग से शुरू होते हैं।
  2. प्राप्तकर्ताओं को 25 डिग्री सेल्सियस पर रखे गए गर्म कैबिनेट में ले जाएं, जहां वे पोस्ट-ऑप दिन 7 तक रहते हैं। पहले 3 दिनों के दौरान, उन्हें कम से कम 2 x दैनिक निगरानी करें। शेष 4 दिनों में, उन्हें दैनिक रूप से कम से कम 1 गुना निगरानी करें। पोस्ट-ऑपरेटिव एनाल्जेसिया के लिए, सर्जरी के बाद शाम को प्राप्तकर्ता माउस को ब्यूप्रेनोर्फिन (0.5-0.1 मिलीग्राम / किग्रा, सोडियम क्लोराइड 0.9% के साथ 0.03 मिलीग्राम / एमएल तक पतला और अगले 3 पोस्टऑपरेटिव दिनों के लिए प्रतिदिन दो बार) की खुराक दें।
  3. एक बार गर्म कैबिनेट से हटा दिए जाने के बाद, उचित प्रयोगात्मक समापन बिंदु तक प्राप्तकर्ताओं की कम से कम 2x साप्ताहिक निगरानी करें।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

घाव भरने और माउस रिकवरी के अच्छे परिणामों को बढ़ावा देने में सर्जिकल तकनीक की प्रभावशीलता का निर्धारण करने के लिए, प्रयोगशाला में शुरुआती प्रयोगों ने प्राप्तकर्ता को परिवर्तनीय इम्युनोजेनेसिटी के हृदय ग्राफ्ट की एक श्रृंखला की उत्तरजीविता विशेषताओं को निर्धारित किया। इनमें कॉन्जेनिक (एन = 5) और सिंजेनिक (एन = 5) ग्राफ्ट शामिल थे, जो प्राप्तकर्ता के समान प्रमुख हिस्टोकम्पैटिबिलिटी कॉम्प्लेक्स (एमएचसी) मार्कर साझा करते हैं, और प्रमुख बेमेल ग्राफ्ट (एन = 9), जिसमें ग्राफ्ट और प्राप्तकर्ता के पास अलग-अलग एमएचसी मार्कर होते हैं। हमने चल रहे ग्राफ्ट फ़ंक्शन और व्यवहार्यता का आकलन करने के लिए हेटरोटोपिक पेट की धड़कन के प्रत्यक्ष झुकाव का उपयोग किया, जो अस्वीकृति बनाम सहिष्णुता के प्रॉक्सी मार्कर के रूप में कार्य करता है।

दोनों नियंत्रण समूहों में, सभी ग्राफ्ट 100 दिनों के प्रयोगात्मक समय समापन बिंदु (मतलब अपरिभाषित) पर व्यवहार्य थे। बेमेल समूह के पास 9 दिनों का औसत जीवित रहने का समय था। चित्र 1 में कपलान-मीयर उत्तरजीविता वक्रों को प्रस्तुत किया गया है जो बेमेल और नियंत्रित हृदय ग्राफ्ट16 के बीच ग्राफ्ट उत्तरजीविता में स्पष्ट अंतर को दर्शाता है। ये डेटा प्रक्रिया के बाद उचित उपचार प्रतिक्रिया को बढ़ावा देने के लिए तकनीक के पर्याप्त होने का संकेत देते हैं। पैथोलॉजिकल सूजन की उपस्थिति में, हालांकि, इस मामले में बेमेल स्थिति में ग्राफ्ट अस्वीकृति द्वारा दर्शाया गया है, ऊतक विनाश से कार्य का तेजी से नुकसान होता है।

Figure 1
चित्रा 1: ऑर्थोटोपिक हृदय प्रत्यारोपण के अस्तित्व पर बेमेल का प्रभाव। सर्जरी के बाद कम से कम 100 दिनों के लिए सिंजेनिक (एन = 5) और कॉन्जेनिक (एन = 5) हेटेरोटोपिक म्यूरिन हार्ट ट्रांसप्लांट की पूर्ण वसूली और स्वीकृति को दर्शाने वाले उत्तरजीविता वक्र सर्जरी के बाद 7 वें दिन से प्रमुख बेमेल (एन = 7) हेटरोटोपिक मुराइन हृदय प्रत्यारोपण की तेजी से अस्वीकृति के विपरीत। ये डेटा Prosser et al.16 में प्रकाशित किए गए थे। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

सर्जरी चरण कोल्ड इस्किमिया का समय गर्म इस्किमिया का समय
दाता 13 - 15 मिनट
भंडारण 4 °C 20- 25 मिनट
प्राप्तकर्ता 22 - 25 मिनट

तालिका 1: ऑर्थोटोपिक हृदय प्रत्यारोपण से जुड़े दाता और प्राप्तकर्ता सर्जरी के लिए गर्म और ठंडे इस्किमिया समय की सीमा।

पूरक चित्रा एस 1: दाता सर्जरी के प्रमुख पहलू। (ए) आइसोफ्लोरेन एनेस्थीसिया; (बी) हेपरिन इंजेक्शन; (सी) दाता हृदय उजागर; (डी) हेपरिनाइज्ड खारा के साथ दिल का फ्लश; (ई) जहाज को बांधना; (एफ) कोल्ड इस्किमिया भंडारण के लिए दाता हृदय। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक चित्रा एस 2: प्राप्तकर्ता सर्जरी-तैयारी और कटी हुई त्वचा वाहिकाओं के संयोजन के प्रमुख पहलू। (ए) प्राप्तकर्ता सर्जिकल साइट तैयारी; (बी) बुपिवाकेन इंजेक्शन; (सी) सर्जिकल साइट का बाँझ सर्जिकल ड्रेपिंग; (डी) कटी हुई त्वचा वाहिकाओं का संकुचन। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक चित्रा एस 3: प्राप्तकर्ता सर्जरी के प्रमुख पहलू- आंतों की पुनर्स्थापना से लेकर ऑर्टोटॉमी तक। (ए) आंतों की अस्थायी पुनर्स्थापना; (बी) हीन वेना कावा उजागर और दबा हुआ; (सी) स्टे सीवन रखना; (डी) पहला चरण: ऑर्टोटॉमी। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक चित्रा एस 4: प्राप्तकर्ता सर्जरी के प्रमुख पहलू- वेनोटॉमी से वसूली तक। (ए) दूसरा चरण: वेनोटॉमी; (बी) जेल फोम रखना; (ग) रीपरफ्यूजन; (डी) सर्जिकल बंद; (ई) वसूली। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

मुराइन ऑर्थोटोपिक हृदय प्रत्यारोपण मॉडल एक मजबूत प्रीक्लिनिकल मॉडल है जिसका उपयोग मुख्य रूप से इम्यूनोलॉजिकल अस्वीकृति के स्तर और प्रकृति पर एमएचसी बेमेल के प्रभावों की जांच करने के लिए किया जाता है और हाल ही में, ग्राफ्ट ऊतक-निवासी प्रतिरक्षा16 के प्रतिधारण पर प्रत्यारोपण का प्रभाव। शुरुआत में कोरी एट अल.7 प्रोटोकॉल का बारीकी से पालन करते हुए, हमने सड़न रोकनेवाला तकनीक, एनाल्जेसिया और संज्ञाहरण के सर्वोत्तम अभ्यास मानकों को शामिल करने के लिए प्रोटोकॉल को परिष्कृत किया है। इन नई प्रथाओं का अद्यतन अतिरिक्त प्रशिक्षण, बाँझ सर्जिकल दस्ताने, गाउन और सर्जिकल ड्रेप के प्रावधान, अतिरिक्त संज्ञाहरण के आवेदन और एनाल्जेसिया खुराक के अद्यतन के माध्यम से हासिल किया गया था। इस तरह के परिवर्तनों से सर्जिकल सेटअप समय और प्रति सर्जरी अतिरिक्त लागत में थोड़ी वृद्धि हुई।

महत्वपूर्ण अनुसंधान चिंताओं को दूर करने के लिए जानवरों के उपयोग को शोधकर्ताओं और एक पशु नैतिकता समिति (एईसी) के बीच एक अनुबंध के तहत अनुमति दी जाती है ताकि इस तरह के काम करने के लिए सामाजिक लाइसेंस बनाए रखा जा सके। एक एईसी के निर्णय स्पष्ट नैतिक दिशानिर्देशों15 पर आधारित होते हैं, जिसमें समाज के लाभों के खिलाफ जानवर की लागत को संतुलित करने का एक अभिभावी सिद्धांत होता है। तीन रुपये (कमी, प्रतिस्थापन और शोधन) की अवधारणा यह संबोधित करने में महत्वपूर्ण है कि परियोजना की लागत को कैसे कम किया जाता है।

प्रजातियों-उपयुक्त, पेरीओपरेटिव एनाल्जेसिया और संज्ञाहरण को अपनाने से शामिल जानवरों को नुकसान को कम करने से सर्जरी के पशु मॉडल में एक अपूरणीय भूमिका है और शोधन का एक उदाहरण है। इसके अतिरिक्त, देखभाल और तकनीक ें जो सर्जिकल प्राप्तकर्ता को संक्रमण के पर्यावरणीय और व्यवहारिक वैक्टर के जोखिम को कम करती हैं, रुग्णता और मृत्यु दर के संदर्भ में जानवर को नुकसान को कम करने और असफल सर्जरी को दोहराने से जुड़ी वित्तीय लागतों को कम करने में मदद करने के लिए सकारात्मक प्रभाव डालती हैं। यद्यपि प्रयोगात्मक पशु "ऑपरेटिंग थिएटर" की स्वच्छता अस्पताल के समकक्ष के करीब नहीं है, लेकिन इस तरह के काम में यह एक विचार नहीं होना चाहिए।

वैज्ञानिक दृष्टिकोण से, पोस्टऑपरेटिव संक्रमण आवश्यक रूप से भड़काऊ साइटोकिन्स और प्रतिरक्षा कोशिकाओं की प्रोफ़ाइल को प्रभावित करते हैं, जो प्रत्यारोपण वसूली या अस्वीकृति का आकलन करने वाले प्रयोगों के लिए विशिष्ट रीडआउट हैं। इसलिए, पोस्टऑपरेटिव संक्रमण को नियंत्रित करने के लिए अधिकतम प्रयास किया जाना चाहिए, यह देखते हुए कि अनुसंधान की वैधता पर इसका प्रतिकूल प्रभाव पड़ सकता है। पशु कल्याण के दृष्टिकोण से एनाल्जेसिया पर ध्यान केंद्रित करना महत्वपूर्ण है। पशु प्रत्यारोपण सर्जरी प्रमुख प्रक्रियाएं हैं, और विषयों के अनावश्यक दर्द और पीड़ा को कम करने में बहुत प्रयास किया जाना चाहिए। इस फोकस के व्यावहारिक परिणामों पर लौटने के लिए, प्रभावी दर्द नियंत्रण का एक अतिरिक्त व्यावहारिक लाभ संकट के दर्द से जुड़े संकेतों के कारण प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल से जानवरों को हटाए जाने की कम संभावना है।

चूंकि इस प्रक्रिया को पहली बार वर्णित किया गया था, इसलिए कई लेखकों ने प्रक्रिया10,11 के दौरान होने वाली सामान्य समस्याओं के निवारण की सूचना दी है। क्लैंप की रिहाई के बाद रक्तस्राव का नियंत्रण अच्छी तरह से वर्णित है और मानव सर्जरी में उपयोग की जाने वाली तकनीकों को प्रतिबिंबित करता है, अर्थात् रक्तस्राव की साइट पर दबाव का उपयोग, आगे की ट्यूरिंग, और हेमोस्टैटिक एजेंट। हमने देखा है कि रक्तस्राव अक्सर दो मुख्य साइटों में से एक से होता है: एनास्टोमोसिस साइटें या मायोकार्डियम को नुकसान। दिल से रक्तस्राव को रोकने के दृष्टिकोण को नीमी10 द्वारा रिपोर्ट किया गया है, जिन्होंने एट्रियम के बंधाव के माध्यम से हृदय से रक्तस्राव को नियंत्रित किया। हमारे अनुभव में, मायोकार्डियम से रक्त प्रवाह का उपजी होना अपने समृद्ध वैस्कुलराइजेशन के कारण असाधारण रूप से चुनौतीपूर्ण है।

इसलिए, इस तरह की चोट से बचने के लिए उचित देखभाल की जानी चाहिए, जो आमतौर पर सर्जरी के दौरान हृदय की मांसपेशियों से संपर्क करने वाले एक अनियंत्रित बल टिप के कारण होती है। इसलिए, हम केवल नम कपास-युक्त एप्लिकेटर का उपयोग करके हृदय की मांसपेशियों से सीधे संपर्क करना चाहते हैं। दिल के हेरफेर में सीधे संपर्क को कम करने के लिए, अंतिम रेशम बंधाव के मुक्त सिरों का उपयोग हृदय को स्थानांतरित करने के लिए किया जा सकता है, जैसे कि इसे यूडब्ल्यूएस से वक्ष गुहा में ले जाते समय।

दूसरी बड़ी चुनौती पोस्टऑपरेटिव हिंद-लिंब पैरालिसिस की रोकथाम है, एक जटिलता जो इच्छामृत्यु को अनिवार्य करती है। उपाख्यानात्मक रूप से, हमने पाया है कि >30 मिनट का गर्म इस्केमिक समय इस पक्षाघात के उच्च जोखिम से जुड़ा हुआ है। हमारे इस्केमिक समय की सख्ती से निगरानी की जाती है और प्रदर्शन के अनौपचारिक मानक के रूप में दर्ज किया जाता है। हालांकि, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि इस्केमिक समय इस जटिलता की विश्वसनीय भविष्यवाणी नहीं करता है। उदाहरण के लिए, निमी10, पर्याप्त ऑपरेटिव अनुभव (3,000 से अधिक सर्जरी) के एक सर्जन ने बताया कि 2 घंटे तक के इस्केमिक समय स्वीकार्य हैं।

शायद इससे भी अधिक चौंकाने वाला, एबॉट एट अल.5, जिन्होंने चूहों में एक समान तकनीक विकसित की, लेकिन पेट में एंड-टू-एंड एनास्टोमोटिक सेटअप का उपयोग किया (यानी, आईवीसी और पेट की महाधमनी को स्थायी रूप से बंद कर दिया गया था), ने दो चूहों पर रिपोर्ट की, जिन्हें बिना किसी स्पष्ट दुष्प्रभाव के 100 दिनों से अधिक समय तक जीवित रहने वाले लोगों के रूप में रखा गया था। परिणामों में इन अंतरसमूह अंतरों को शायद सूक्ष्म रूप से विभिन्न तकनीकों द्वारा समझाया जाता है या, वैकल्पिक रूप से, चूहों के विभिन्न उपभेदों के बीच आनुवंशिक अंतर द्वारा। उदाहरण के लिए, हम ध्यान दें कि एलवाई 5.1 चूहे बीएएलबी / सी चूहों की तुलना में इस जटिलता के लिए अधिक संवेदनशील हैं। हिंद-अंग पक्षाघात की घटनाओं पर इस्केमिक समय के प्रभावों पर स्पष्टता में सुधार करने के लिए, पेट वाहिका रोड़ा समय की लंबाई के प्रभाव की जांच की जा सकती है।

सारांश में, यह वर्णित प्रोटोकॉल आसानी से उपलब्ध दवाओं और सामग्रियों का उपयोग करके स्थापित तकनीकों के लिए सीधा शोधन प्रदान करता है। ये परिष्करण उस मानक को संरेखित करते हैं जिसके लिए इस सर्जिकल मॉडल को नैदानिक पशु चिकित्सा मानकों के साथ किया जाता है और जानवरों और अंततः, अनुसंधान को लाभ होता है।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है।

Acknowledgments

लेखक पश्चिमी ऑस्ट्रेलिया विश्वविद्यालय और हैरी पर्किन्स इंस्टीट्यूट ऑफ मेडिकल रिसर्च के पशु देखभाल कर्मचारियों के शानदार प्रयासों को स्वीकार करना चाहते हैं, जिनके समर्पण और विशेषज्ञता ने इन सर्जरी की व्यवहार्यता और सफलता में योगदान दिया।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
2030 Rycroft irrigating cannula 30 G McFarlane 56005HU
Braided surgical silk 7-0
Bulldog clamp curved - 35 mm  Roboz RS-7441-5
Bupivacaine 0.25% 
Buprenorphine
Castroviejo needle holder catch curved -  145 mm Haag-Streit 11.62.15
Chlorhexidine 5% solution Ebos JJ61371
Cotton-tipped applicator - 7.5 cm Dove SN109510
Ethanol 70% solution Ebos WH130192EE
Gauze 5 x 5 cm white Aero AGS50
Gelfoam 80 mm x 125 mm  Pfizer 7481D
Hair clipper Wahl 9860L
Heparin 1,000 IU in 1 mL
Iris SuperCut scissors straight - 11.5 cm   Inka Surgical  11550.11
Isoflurane vaporiser Darvall 9176
Micro bulldog clamp - 3.7 cm Greman 14119-G
Micro scissors curved 105 mm 
Micropore plain paper surgical tape - 2.5 cm wide Ebos 7810L
Microsurgical scissors - curved tip
Monofilament polyprolene suture - 5/0 Surgipro P-205-X
Myweigh i101 Precision Scale 100 g x 0.005 g Myweigh Kit00053
Needle - 30 G x 0.5 inch BD BD304000
Needleholder 15 cm curved "super fine" Surgical Specialists ST-B-15-8.2
Nylene 10/0 x 15 cm on 3.8 mm 3/8 circle round bodied taper (diam 0.07mm) CV300
Round body suture forceps curved 0.3 mm 120 mm B. Braun FD281R
Round body suture forceps straight 0.3 mm 120 mm B. Braun FD280R
Round handled vannas spring scissors-str/12.5 cm 15400-12
Spring scissors-Cvd Sm blades 15001-08
Stevens scissors blunt straight 110 mm
Surgical backboard Rigid laminated cardboard. 15 x 15 cm
Surgical drapes Cut into two sizes. 25 cm x 25 cm, and 25 cm x 40 cm 
Surgical microscope
Syringe - 1 mL BD 592696
Syringe - 3 mL Leica M651
Toothed forceps BD 309657
University of Wisconsin Solution
Warming pad Far infrared warming pad 20 x 25 cm
Westcott spring scissors
Yasargil clip applier bayonet Aesculap FE582K
Yasargil titanium clip perm 6.6 mm Aesculap A19FT222T
Mouse usage
Strain/SEX/Weight Donor Recipent
BALB/c, female, 19-23 g 7 21
C57BL/6, female, 17-20 g 7
CD45.1 BALB/c, female, 17-21 g 5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Mann, F. C., Priestley, J. T., Markowitz, J., Yater, W. M. Transplantation of the intact mammalian heart. Archives of Surgery. 26 (2), 219-224 (1933).
  2. Neptune, W. B., Cookson, B. A., Bailey, C. P., Appler, R., Rajkowski, F. Complete homologous heart transplantation. A.M.A. Archives of Surgery. 66 (2), 174-178 (1953).
  3. Downie, H. G. Homotransplantation of the dog heart. A.M.A. Archives of Surgery. 66 (5), 624-636 (1953).
  4. Blanco, G., Adam, A., Rodriguezperez, D., Fernandez, A. Complete homotransplantation of canine heart and lungs. A.M.A. Archives of Surgery. 76 (1), 20-23 (1958).
  5. Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. A technique for heart transplantation in the rat. Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).
  6. Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).
  7. Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection. Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).
  8. Joffre, O., et al. Prevention of acute and chronic allograft rejection with CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T lymphocytes. Nature Medicine. 14 (1), 88-92 (2008).
  9. Gregori, S., et al. Regulatory T cells induced by 1 alpha,25-dihydroxyvitamin D3 and mycophenolate mofetil treatment mediate transplantation tolerance. The Journal of Immunology. 167 (4), 1945-1953 (2001).
  10. Niimi, M. The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: Experience of 3000 operations by one surgeon. The Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).
  11. Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy. Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).
  12. Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. Techniques in aseptic rodent surgery. Current Protocols in Immunology. 82, 1-14 (2008).
  13. Navarro, K. L., et al. Mouse anesthesia: The art and science. ILAR Journal. , (2021).
  14. Adams, S., Pacharinsak, C. Mouse anesthesia and analgesia. Current Protocols in Mouse Biology. 5 (1), 51-63 (2015).
  15. Australian code for the care and use of animals for scientific purposes. NHMRC. , Available from: https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes (2013).
  16. Prosser, A., et al. Dynamic changes to tissue-resident immunity after MHC-matched and MHC-mismatched solid organ transplantation. Cell Reports. 35 (7), 109141 (2021).

Tags

इम्यूनोलॉजी और संक्रमण अंक 187
एक संशोधित मुराइन हेटरोटोपिक हार्ट ट्रांसप्लांट प्रोटोकॉल सड़न रोकनेवाला तकनीक, संज्ञाहरण और एनाल्जेसिया के समकालीन मानकों से मेल खाता है
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Singer, D. A., Musk, G. C., Huang,… More

Singer, D. A., Musk, G. C., Huang, W. H., Liu, L., Kaur, J., Watson, M., Prosser, A., Lucas, M., Lucas, A. A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia. J. Vis. Exp. (187), e64284, doi:10.3791/64284 (2022).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter