Summary
Questo studio descrive una tecnica per stabilire un modello di ratto di silicosi con l'inalazione di silice attraverso tutto il corpo in una camera di inalazione. I ratti con silicosi potrebbero imitare da vicino il processo patologico della silicosi umana in modo semplice, economico e con una buona ripetibilità.
Abstract
La causa principale della silicosi è l'inalazione di silice nell'ambiente di lavoro. Nonostante alcune differenze anatomiche e fisiologiche, i modelli di roditori continuano ad essere uno strumento essenziale per lo studio della silicosi umana. Per la silicosi, il classico processo patologico deve essere inducibile attraverso l'inalazione di particelle di quarzo appena generate, il che significa indurre specificamente malattie professionali umane. Questo studio ha descritto una tecnica per stabilire e imitare efficacemente il processo di evoluzione dinamica patologica della silicosi. Inoltre, la tecnica ha avuto una buona ripetibilità senza alcun intervento chirurgico. Il sistema di esposizione per inalazione è stato fabbricato, convalidato e utilizzato per studi tossicologici sull'inalazione di particelle respirabili. I componenti critici erano i seguenti: (1) generatore di polveri SiO2 a secco sfuso regolato con un regolatore del flusso d'aria; (2) camera di esposizione per inalazione di 0,3 m3 per tutto il corpo in grado di ospitare fino a 3 ratti adulti; (3) un sistema di monitoraggio e controllo per regolare la concentrazione di ossigeno, la temperatura, l'umidità e la pressione in tempo reale; e (4) una barriera e un sistema di smaltimento dei rifiuti per proteggere i tecnici di laboratorio e l'ambiente. In sintesi, il presente protocollo riporta l'inalazione attraverso tutto il corpo e la camera di inalazione ha creato un modello silicotico di ratto affidabile, ragionevole e ripetibile con bassa mortalità, meno lesioni e più protezione.
Introduction
La silicosi, causata dall'inalazione di silice, è la malattia professionale più grave in Cina, rappresentando oltre l'80% del numero totale di segnalazioni di malattie professionali ogni anno1. L'eziologia della silicosi è chiara e può essere prevenuta e controllata, ma non è disponibile un metodo di trattamento efficace2. Molti farmaci si sono dimostrati efficaci negli studi di base, ma hanno effetti clinici imprecisi 3,4. Pertanto, i meccanismi patologici e fisiologici della silicosi devono ancora essere esplorati.
Molti studi hanno utilizzato un'infusione una tantum di silice nella trachea di ratti o topi per studiare la patogenesi della silicosi 5,6. Sebbene questi modelli silicotici di roditori potessero essere ottenuti in breve tempo7, questi metodi presentavano ancora delle sfide, come traumi animali e un'elevata mortalità. Alcuni studi hanno coinvolto l'instillazione di silice immagazzinata nei polmoni per indurre una reazione polmonare non specifica, ma non hanno menzionato i noduli silicotici nei topi8. Inoltre, lontano dalla silicosi acuta, l'esposizione cronica alla silice negli ambienti di lavoro ha indotto un'infiammazione polmonare significativamente più bassa e ha elevato i livelli di marcatori anti-apoptotici, piuttosto che di marcatori pro-apoptotici, nei polmoni9. Pertanto, è necessario un modello animale affidabile, ragionevole e ripetibile per esplorare ulteriormente la patogenesi della silicosi.
Il presente studio descrive un metodo per imitare il processo patologico dei pazienti con silicosi attraverso l'inalazione di silice attraverso tutto il corpo, particelle erogate dall'aria in una camera di inalazione, che comprendeva un generatore di silice erogato dall'aria, una camera per tutto il corpo e un sistema di smaltimento dei rifiuti. Questo metodo è semplice, facile da usare e imita efficacemente il processo di evoluzione dinamica patologica della silicosi. Inoltre, molti possibili meccanismi e la patogenesi della silicosi sono identificati utilizzando questo metodo 10,11,12. Si prevede che il protocollo proposto aiuterà ulteriori indagini nel campo correlato della ricerca sulla silicosi.
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Protocol
Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati condotti secondo la Guida del National Institutes of Health degli Stati Uniti per la cura e l'uso degli animali da laboratorio e approvati dal Comitato per l'etica della North China University of Science and Technology (codice protocollo LX2019033 e 2019-3-3 di approvazione). Per il presente studio sono stati utilizzati ratti Wistar maschi, di 3 settimane di età. Tutti i ratti sono stati tenuti in gabbie statiche con trucioli di legno. Gli animali sono stati mantenuti in un ciclo luce/buio di 12 ore/12 ore e sono stati forniti di cibo e acqua ad libitum. Gli esperimenti di follow-up sono stati condotti dopo 1 settimana di alimentazione adattativa.
1. Preparazione dell'animale
- All'arrivo, alloggia tutti i ratti in una stanza specifica priva di agenti patogeni (SPF).
- Dividi in modo casuale i ratti sani in due gruppi (n = 10): ratti di controllo che inalano aria pura e ratti con silicosi che inalano silice.
2. Preparazione della silice
ATTENZIONE: La polvere di silice inalata dal corpo umano può danneggiare i polmoni. Pertanto, le persone devono indossare tute, guanti medici e maschere protettive (N95) durante le operazioni.
- Macinare le particelle di silice (vedi Tabella dei materiali) con una malta d'agata per 1,5 ore prima di ogni esposizione. Questo perché il quarzo appena fratturato produce maggiori quantità di specie di ossigeno attivo rispetto al quarzoinvecchiato 13 e la silice con un diametro di 1-5 μm è la più patogeno.
- Pesare la silice (30 g) utilizzando una bilancia elettronica dopo la macinazione, metterla in un contenitore di vetro e cuocerla a 180 °C per 6 ore in un essiccatore elettrico a riscaldamento (vedi Tabella dei materiali) per eliminare gli agenti patogeni dalla superficie delle particelle di silice.
3. Esposizione alla silice per i ratti
- Collegare l'iniezione e i sistemi di generazione disponibili in commercio (vedere la tabella dei materiali) e inserire la silice (30 g) nel generatore. Controllare se la tubazione di connessione è normale, il cavo di alimentazione è collegato e l'alimentazione è normale.
- Controllare manualmente il livello dell'acqua della torre di spruzzatura e dell'umidificatore del dispositivo di trattamento dei gas di scarico (vedi Tabella dei materiali) e aggiungere acqua se è insufficiente (non fino alla linea standard).
- Aggiungere acqua di rubinetto alla torre di spruzzatura del dispositivo di trattamento dei gas di scarico e acqua distillata all'umidificatore (Figura 1).
- Accendere il dispositivo di scarico dei gas di scarico (vedere la tabella dei materiali) e l'interruttore della fonte d'aria per verificare se l'interno dell'armadio di schermatura è in uno stato di pressione negativa.
- Verificare che la miscelazione di liquidi, polveri, valvole di controllo del flusso di gas puro e valvola di scarico delle acque reflue sotto la camera di inalazione siano chiuse.
- Mettere un totale di 10 ratti nella camera di inalazione (vedere la tabella dei materiali) e chiudere lo scomparto di inalazione e le porte dell'armadio schermate.
- Impostare i seguenti parametri sperimentali sul quadro strumenti o nel computer: pressione dell'armadio: da -50 a -30 Pa; concentrazione di ossigeno: 21%; temperatura dell'armadio: 26-30 °C; umidità: 30%-70%; velocità di ingresso della polvere: 2,0-2,5 mL/min; e concentrazione di polvere dell'armadio: 60 ± 5 mg/m3.
NOTA: Osservare continuamente i dati sperimentali e lo stato dell'apparecchiatura durante l'esperimento. L'allarme di guasto dell'apparecchiatura ha richiesto un'elaborazione tempestiva.- Esporre ogni animale alla silice continuamente per 3 ore al giorno, 5 giorni alla settimana, e consentire agli animali del gruppo di controllo di inalare aria pura.
- Al termine dell'esperimento, chiudere la valvola di controllo del flusso di gas miscelato e aprire la valvola di flusso del gas puro. Iniettare continuamente il gas puro nella camera di inalazione.
NOTA: Nel presente studio, il flusso di gas puro (7,0-7,5 m3/h) è stato iniettato per almeno 20 minuti fino a quando il gas velenoso nella camera di inalazione è stato completamente sostituito.- Chiudere la valvola del flusso d'aria pura, aprire la porta, far uscire i ratti e rimandarli nella stanza priva di agenti patogeni.
- Rimuovere la rastrelliera per topi e i componenti del tubo di derivazione in sequenza e posizionarli nel lavandino per la pulizia. Dopo il risciacquo, chiudere la valvola di pulizia automatica e aprire il portello.
- Pulisci la parete interna con un panno pulito o accendi il gas puro per asciugare il serbatoio. Infine, effettuare la disinfezione. Dopo la pulizia e la disinfezione con etanolo al 75%, chiudere la saracinesca di scarico e, appena possibile, aprire leggermente la porta della cabina di inalazione per far evaporare l'umidità, in modo che l'interno della cabina di inalazione rimanga asciutto.
- Controllare la concentrazione di silice nell'armadio con un campionatore atmosferico completo seguendo le istruzioni del produttore (vedi Tabella dei materiali) due volte alla settimana per garantire la stabilità della concentrazione di silice durante l'esperimento. Calibrare il campionatore atmosferico prima del campionamento.
- Per la determinazione gravimetrica è possibile utilizzare una bilancia analitica digitale a piatto singolo. La concentrazione di silice calcolata è stata di 65 mg/m3 (Figura 1 e Tabella 1).
NOTA: Pesare la carta da filtro prima e dopo l'assorbimento della silice. La concentrazione di silice è stata calcolata utilizzando la seguente formula12:
dove W2 = peso della carta da filtro dopo il campionamento, W1 = peso della carta da filtro prima del campionamento e V = volume dell'aria.
- Per la determinazione gravimetrica è possibile utilizzare una bilancia analitica digitale a piatto singolo. La concentrazione di silice calcolata è stata di 65 mg/m3 (Figura 1 e Tabella 1).
4. Acquisizione e fissazione dei tessuti polmonari
- Sopprimere i ratti mediante iniezione intraperitoneale di pentobarbital (100 mg/kg di peso corporeo) e lidocaina (4 mg/kg di peso corporeo). Valutare la morte per perdita del battito cardiaco14.
- Alla fine dell'esperimento, fissare il polmone inferiore destro, il rene, il fegato, la milza e l'osso con paraformaldeide al 4% per almeno 24 ore, incorporare in paraffina e tagliare in sezionida 5 μm 7,15.
5. Colorazione con ematossilina ed eosina (H&E)
- Deparaffinizzare le sezioni di paraffina nello xilolo (vedere Tabella dei materiali) due volte per 10 minuti ogni16 e reidratare in etanolo al 100%, etanolo al 95%, etanolo al 90%, etanolo all'80%, etanolo al 70% e acqua distillata per 3 minuti ciascuna.
- Colorare le sezioni con ematossilina (vedere la tabella dei materiali) per 5 minuti, quindi lavare le sezioni con acqua10.
- Mettere le sezioni in alcool cloridrico al 2% e poi in acqua distillata fino a quando il colore non cambia in blu.
- Colorare le sezioni con eosina per 1 minuto, disidratarle con etanolo al 95%, renderle trasparenti con xilene, sigillarle con gomma neutra e osservare al microscopio ottico12.
6. Colorazione immunoistochimica
- Lavare regolarmente le sezioni di paraffina con acqua.
- Esporre gli antigeni ad alta pressione (60 kPa) e ad alta temperatura (100 °C) per 80 s e poi bloccare con un bloccante della perossidasi endogena (3%) per 15 min per eliminare le perossidasi endogene7.
- Incubare i campioni con anticorpi diretti contro CD68 (diluizione 1:200 - aggiungere 4 μL di CD68 a 396 μL di diluente anticorpale; vedere Tabella dei materiali) a 4 °C per una notte.
- Incubare i campioni con un anticorpo secondario (polimero IgG anti-topo di capra coniugato con HRP; vedere la tabella dei materiali) a 37 °C per 30 minuti, quindi lavare i campioni con 1x PBS.
- Visualizzare l'immunoreattività con la 3,3-diaminobenzidina (DAB; vedere la tabella dei materiali). Dopo aver applicato DAB sul tessuto, osservare la colorazione del tessuto al microscopio ottico10.
NOTA: Il tempo di colorazione variava da pochi secondi a pochi minuti in base al tempo di colorazione del tessuto. La procedura di colorazione è stata interrotta mettendo le sezioni in acqua. In questo studio, la colorazione marrone del tessuto ha rappresentato l'espressione positiva di CD68. Tutti gli anticorpi sono stati diluiti in 1x PBS.
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Representative Results
Utilizzando il metodo proposto, sono stati esplorati alcuni potenziali meccanismi e la patogenesi della silicosi nei ratti. Lo schema della camera di inalazione è mostrato in Figura 1. La camera era costituita da un generatore di silice erogato ad aria, da una camera a corpo intero e da un sistema di smaltimento dei rifiuti, come descritto in precedenza17. Le funzioni polmonari, i livelli di fattori infiammatori nel siero e nel polmone, la deposizione di collagene e la differenziazione dei miofibroblasti sono stati riportati negli studi precedenti 10,18,19. L'espressione differenziale di miRNA, lncRNA e mRNA è stata riportata nei nostri precedenti rapporti 20,21,22. Nessun ratto è morto dopo l'esposizione alla silice negli studi multi-lotto sopra menzionati.
Le classiche caratteristiche patologiche dei ratti con silicosi sono state riassunte in precedenza23. I noduli silicotici erano costituiti da macrofagi contenenti silice. La Figura 2 presenta la deposizione di collagene nei ratti con silicosi. La lente polarizzata ha rivelato la silice nei macrofagi. La Figura 3 presenta l'evoluzione dinamica dei noduli silicotici mediante colorazione immunoistochimica di CD68; Altri marcatori alternativi includevano l'ossido nitrico sintasi inducibile o l'arginasi-124. Come accennato in precedenza23, i ratti esposti alla silice per 24 settimane hanno mostrato lesioni visibili e osservabili, tra cui la deposizione di collagene in noduli silicotici, la colorazione periodica acido-Schiff positiva e le funzioni polmonari compromesse. D'altra parte, gli altri organi (cuore, milza e fegato) non hanno mostrato differenze morfologiche tra i ratti di controllo e i ratti con silicosi (Figura 4). Il rene dei ratti esposti alla silice per 24 settimane ha avuto lievi cambiamenti degenerativi nei tubuli contorti prossimali. Il metabolismo osseo anormale è stato ben documentato nei nostri studi precedenti10,17. Nel complesso, questi studi hanno evidenziato che il protocollo proposto potrebbe imitare bene la progressione della silicosi negli esseri umani.
Figura 1: Schema dell'apparecchio di controllo dell'esposizione. (A) Generatore di silice erogata ad aria. (B) Camera per tutto il corpo. (C) Cruscotti. (D) Apparecchiature per il controllo dell'esposizione. (E) Tutti i componenti sono assemblati per formare uno strumento di lavoro; La camera comprende un generatore di silice erogato ad aria, una camera per tutto il corpo e un sistema di smaltimento dei rifiuti. (F,G) Rilevatore d'aria. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 2: Colorazione H&E e deposizione di collagene nei ratti con silicosi. Colorazione H&E di ratti esposti alla silice per 2 e 24 settimane. La struttura alveolare dei ratti era ancora intatta e la parete alveolare era ispessita dopo 2 settimane di inalazione di silice. La struttura alveolare dei ratti è scomparsa e si sono formate ampie aree di fibrosi dopo 24 settimane di inalazione di silice. Le particelle di silice sono rimaste intrappolate nei lobi polmonari dei ratti (2 e 24 settimane) e le fibre di collagene dei ratti (24 settimane) sono state osservate al microscopio a luce polarizzata. Barra graduata: 50 μm. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 3: Evoluzione dinamica dei noduli silicotici rilevati mediante colorazione immunoistochimica di CD68. (A) Con l'aumentare del tempo di esposizione (da 2 a 24 settimane), l'area dei noduli silicotici è aumentata gradualmente e i noduli silicotici adiacenti si sono gradualmente fusi in noduli di grandi dimensioni. (B) Il modello dei noduli di silicio. Barra graduata: 50 μm. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 4: Colorazione H&E dei polmoni, dei reni, del fegato, della milza e dell'osso di controllo ratti e ratti con silicosi. (A) Colorazione H&E dei polmoni, dei reni, del fegato, della milza e dell'osso dei ratti di controllo. Barra della scala: 1 mm. (B) Colorazione H&E dei polmoni, dei reni, del fegato, della milza e dell'osso dei ratti di controllo. Barra graduata: 50 μm. Lesioni fibrotiche multiple di varie dimensioni si sono formate nei ratti esposti alla silice rispetto ai ratti di controllo. Non sono state riscontrate differenze significative nei reni, nel fegato e nella milza tra i ratti di controllo e i ratti con silicosi, ma la perdita ossea è stata osservata nei ratti con silicosi. (C) Colorazione H&E dei polmoni, dei reni, del fegato, della milza e delle ossa di ratti con silicosi. Barra della scala: 1 mm. (D) Colorazione H&E dei polmoni, dei reni, del fegato, della milza e delle ossa di ratti con silicosi. Barra graduata: 50 μm. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
| Tempo di misurazione (min) | Volume (L) | W1 (g) | W2 (g) | Concentrazioni (mg/m3) |
| 10 | 460 | 0.40 | 0.43 | 65.22 |
| 20 | 923 | 0.40 | 0.46 | 65.01 |
| 30 | 1404 | 0.40 | 0.49 | 64.1 |
Tabella 1: Concentrazioni di silice nella camera di tutto il corpo.
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Discussion
Essendo la principale causa di silicosi, la silice svolge un ruolo decisivo nello stampaggio. Le particelle di silice inalate dai pazienti con pneumoconiosi sono particelle di silice fresca e libera prodotte dal taglio meccanico. La silice può generare specie reattive dell'ossigeno direttamente sulle superfici delle particelle appena scisse o indirettamente attraverso il suo effetto sui macrofagi25. Pertanto, la macinazione delle particelle di silice è di grande importanza. Nel protocollo proposto, la silice è stata macinata con malta di agata per più di 90 minuti per renderla più fine, più irregolare e aumentare la superficie. Come riportato, le concentrazioni nell'aria di silice cristallina26 non devono essere inferiori a 0,05 mg/m3. Tuttavia, questo protocollo potrebbe avere un problema con concentrazioni di polvere imprecise; L'incertezza della concentrazione di polveri è stata principalmente associata all'assenza di un sistema integrato di monitoraggio della concentrazione di polveri. La concentrazione effettiva di silice è stata calcolata utilizzando la massa di SiO2 che entra nell'armadio della polvere e la portata del gas. Il volume di SiO2 si basava sulla velocità della piastra rotante, piuttosto che sulla massa di SiO2 che entrava effettivamente nell'armadio. Quindi, le possibili soluzioni al problema erano il controllo del volume di silice nella camera due volte alla settimana per assicurarsi che i ratti fossero esposti ogni volta allo stesso volume di silice o l'inserimento di un dispositivo di misurazione della concentrazione nella camera della polvere, quest'ultima era la soluzione migliore.
Anche i limiti di questo modello erano evidenti: (1) la relazione tra la dose di esposizione e il suo effetto biologico è solo approssimativa perché il tratto respiratorio dei ratti è diverso da quello degli esseri umani; (2) esisteva l'incertezza della concentrazione di polveri; (3) il metodo richiesto l'acquisto di attrezzature speciali; (4) il volume della camera della polvere e il numero di ratti infetti da polvere erano limitati; (5) il modello di silicosi murina non poteva essere costruito perché il tratto respiratorio dei topi era stretto e la polvere di silice non poteva depositarsi nei polmoni; inoltre, il modello murino era più economico ed era facile generare topi transgenici o KO.
La costruzione convenzionale del modello animale di silicosi comprendeva principalmente due metodi: l'iniezione bronchiale e l'inalazione di SiO2. Nell'iniezione bronchiale, la mortalità era strettamente correlata alla dose di perfusione e la chirurgia invasiva causava inevitabilmente ulteriori danni collaterali27. Per sostituire il modello di iniezione intratracheale, alcuni studiosi hanno stabilito un modello di silicosi utilizzando una sospensione di silice atomizzata ad ultrasuoni per inalazione28. Tuttavia, l'atomizzazione ad ultrasuoni non poteva controllare la concentrazione di silice nell'aria dopo l'atomizzazione, la ripetibilità era scarsa e le tipiche lesioni fibrotiche non potevano essere formate utilizzando questo metodo di modellazione. Un altro modello economico, pratico ed efficace era il modello di gocciolamento nasale di topo29, ma questo metodo iniettava silice liquida nella trachea e non era buono come inalarlo. L'apparato di controllo dell'esposizione è dotato di un sistema di aspirazione dell'aria multipla in modo che la silice nella camera di inalazione sia distribuita uniformemente, i dati siano accurati e la distribuzione della polvere nella camera della polvere sia uniforme. Pertanto, l'ambiente di prova è rimasto stabile per lungo tempo e i parametri pertinenti sono stati osservati e registrati in qualsiasi momento.
L'importanza della creazione di modelli di malattie o lesioni animali è quella di imitare il più possibile il processo patologico di malattia o lesione causata da fattori patogeni. Pertanto, un buon modello animale è il più vicino possibile alla malattia umana. Esponendo per inalazione alla silice, i ratti potevano inalare liberamente particelle di silice patogene nella camera della polvere. Le sessioni di esposizione settimanali e giornaliere hanno anche imitato completamente l'orario di lavoro dei lavoratori della pneumoconiosi. Utilizzando questo metodo di modellazione, abbiamo identificato cambiamenti patologici come la transizione epiteliale-mesenchimale, l'attivazione dei segnali del fattore di crescita di trasferimento, l'attivazione dei macrofagi e l'attivazione dei segnali correlati alla senescenza durante la silicosi nei ratti. Alcuni dei risultati sono stati confermati in campioni umani18. Recentemente, abbiamo anche iniziato a studiare i cambiamenti patologici dinamici nell'evoluzione della silicosi con questo metodo23.
Questo protocollo semplice, a basso costo e facilmente ripetibile è anche di grande importanza in un momento in cui l'incidenza della silicosi sta tornando in auge nel mondo30. Dopo l'esposizione per inalazione di 8 settimane a 100 mg di quarzo/m3, il 20% della silice è rimasto nei polmoni del ratto dopo 6 e 12 mesi31. Inoltre, i ricercatori hanno studiato la misura in cui un animale in un dispositivo simile potrebbe inalare ed espirare aria; La concentrazione del gas inalato dagli animali è leggermente cambiata32. Il protocollo è ancora molto promettente, ad esempio, combinandolo con la tomografia microcomputerizzata per osservare l'evoluzione dinamica della silicosi e combinandolo con il database del trascrittoma per verificare il processo patologico della silicosi e validare nuove terapie sistemiche antinfiammatorie e antifibrotiche.
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Disclosures
Gli autori dichiarano di non avere alcun conflitto di interessi.
Acknowledgments
Questo lavoro è stato finanziato dalla National Natural Science Foundation of China (82003406), dalla Natural Science Foundation of Hebei Province (H2022209073) e dal Science and Technology Project del Dipartimento dell'Educazione dell'Hebei (ZD2022127).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Air detector (compressive atmospheric sampler) | Qingdao Xuyu Environmental Protection Technology Co. LTD | ||
| Anatomical table | No specific brand is recommended. | ||
| Antibody of CD68 | Abcam | ab201340 | |
| DAB | ZSGB-BIO | ZLI-9018 | |
| Electric heating air-blowing drier | Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., LTD | ||
| Electronic balance | OHRUS | ||
| Embedding machine | leica | ||
| Exhaust gas discharge device | HOPE Industry and Trade Co. Ltd. | ||
| Generator systems | HOPE Industry and Trade Co. Ltd. | ||
| Gloves (thin laboratory gloves) | The secco medical | ||
| Hematoxylin and eosin | BaSO Diagnostics Inc. | BA4025 | |
| HOPE MED 8050 exposure control apparatus | HOPE Industry and Trade Co. Ltd. | ||
| Inhalation chamber | HOPE Industry and Trade Co. Ltd. | ||
| Injection syringe | No specific brand is recommended. | ||
| Light microscope | olympus | ||
| Object slide | shitai | ||
| PV-6000 (HRP-conjugated goat anti-mouse IgG polymer) | Beijing Zhongshan Jinqiao Biotechnology Co. Ltd | s5631 | |
| Silicon dioxide | Sigma-Aldrich | ||
| Slicing machine | leica | RM2255 | |
| Waste gas treatment device | HOPE Industry and Trade Co. Ltd. | ||
| Wet box | Cooperative plastic Products Factory | ||
| Xylol | Tianjin Yongda Chemical Reagent Co., LTD |
References
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