Summary
Här testar vi upplösningen av Rhodiola granulat (RG) in vitro, ritar upplösningskurvor av salidrosid, gallinsyra och etylgallat i ultrarent vatten och anpassar kurvorna till olika matematiska modeller. Detta protokoll ger information och vägledning för in vivo bioekvivalens och in vivo-in vitro korrelationsstudier av RG.
Abstract
Sammansättningen av det tibetanska läkemedlet Rhodiola granulat (RG) är komplext, och den övergripande kvaliteten på RG är svår att bestämma. Därför är upprättandet av en metod för att bestämma multikomponentupplösningen in vitro av RG av stor betydelse för kvalitetskontrollen. Denna studie använder den andra paddelmetoden i den fjärde allmänna regeln 0931 från den kinesiska farmakopén (2020-upplagan), kompatibel med apparat 2 i USA: s farmakopé (USP). Upplösningsapparaten var inställd på en rotationshastighet på 100 rpm med ultrarent vatten som upplösningsmedium. En provvolym på 1 ml samlades in vid varje tidpunkt. Vidare bestämdes den kumulativa upplösningen av gallinsyra, salidrosid och etylgallinsyra i RG vid olika tidpunkter med högpresterande vätskekromatografi (HPLC). Slutligen ritades upplösningskurvorna och kurvorna anpassades till GompertzMod, Gompertz, Logistik och Weibull. Resultaten visade att den kumulativa upplösningen av gallinsyra i RG var över 80% vid 1 min, den kumulativa upplösningen av salidroside och etylgallinsyra var över 65% vid 5 min och den kumulativa upplösningen av varje indexkomponent minskade efter 30 min. Kurvanpassningen visade att GompertzMod-ekvationen var den bäst passande modellen för varje indexkomponent i RG. Sammanfattningsvis är upplösningstestmetoden som beskrivs i detta protokoll enkel, exakt och pålitlig. Det kan karakterisera upplösningsbeteendet hos indexkomponenterna i RG in vitro, vilket ger en metodologisk referens för kvalitetskontroll av RG och kvalitetsutvärdering av andra etniska föreningar.
Introduction
I Kina fortsätter förekomsten av hjärt-kärlsjukdomar att öka, och sjukligheten och dödligheten i hjärt-kärlsjukdomar rankas först bland kinesiska invånare1. Angina pectoris av kranskärlssjukdom orsakas av luminal stenos på grund av koronar ateroskleros, vilket leder till relativt otillräcklig koronar blodtillförsel och myokardiell ischemi och hypoxi2. Under de senaste åren har den härdande effekten av traditionell kinesisk medicin vid behandling av kranskärlssjukdom erkänts av många läkare3.
Traditionell kinesisk medicin spelar en viktig roll för att lindra kliniska symtom och förbättra livskvaliteten hos patienter4. Rhodiola granulat (RG) extraheras och raffineras från den tibetanska platån medicinalväxt Rhodiola rosea L. Huvudkomponenterna i RG är salidroside, rhodiosin och flavonoider 5,6. RG har effekten att komplettera Qi7 och aktivera och främja blodcirkulationen för att lindra smärta. Kliniskt används det för att behandla bröstkorgsobstruktioner orsakade av Qi-brist och blodstasis, kranskärlssjukdom, angina pectoris8. Enbart innehållsbestämning återspeglar inte helt läkemedlens inneboende kvalitet, eftersom både sönderfall och upplösning in vitro kan påverka läkemedlets biotillgänglighet och effekt 9,10. Inspektionsmetoderna för upplösning av kinesisk medicin inkluderar rotationskorgmetoden, paddelmetoden och den lilla koppmetoden. Nackdelen med den roterande korgmetoden är att endast den yttre delen av den roterande korgen kommer i kontakt med upplösningsmediet under rotation, vilket inte återspeglar det verkliga upplösningsbeteendet. Paddelmetoden kan övervinna ovanstående brist, vilket gör den mer lämplig än korgmetoden för vissa fasta kinesiska medicinpreparat11. För närvarande finns det ingen rapport om in vitro-upplösningsanalysen av RG. För att kontrollera kvaliteten på RG mer omfattande undersöktes upplösningsbeteendet hos de tre indexkomponenterna (gallinsyra, salidrosid och etylgallat) i RG. Denna studie ger data för kvalitetskontroll av RG och en metodologisk referens för kvalitetsutvärdering av andra etniska föreningar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Beredning av lösning
- Bered referensämnets stamlösning: Väg upp 10,6 mg salidrosid, 5,24 mg gallinsyra och 5,21 mg etylgallinsyra separat på en elektronisk analysvåg och tillsätt dem individuellt i en 5 ml mätkolv. Tillsätt sedan metanol av HPLC-kvalitet för att lösa upp och späd till 5 ml. Skaka slutligen väl för att erhålla stamlösningen av referenssubstansen med masskoncentrationer på 2,120 mg/ml, 1,048 mg/ml respektive 1,042 mg/ml.
Anmärkning: Referenssubstansens stamlösning innehåller 2,120 mg/ml salidrosid, 1,048 mg/ml gallinsyra och 1,042 mg/ml etylgallat som stamlösning av varje lösning i den efterföljande standardkurvan. - Bered provlösningen. Extrahera 2,8 g RG (Table of Materials) med 10 ml metanol av HPLC-kvalitet med hjälp av en ultraljudsrengöringsmaskin (effekt: 200 W, frekvens: 40 kHz) i 30 minuter och filtrera den sedan med ett 0,22 μm-filter för systemets anpassningstest.
- Bered en blandad referenslösning som innehåller 0,590 mg/ml salidrosid, 2,030 mg/ml gallinsyra och 1,930 mg/ml etylgallat.
OBS: Varje standard (2,950 mg salidrosid, 10,150 mg gallinsyra och 9,650 mg etylgallinsyra) löses i en 5 ml mätkolv i metanol av HPLC-kvalitet som upplösningsmedium. - Erhålla det teoretiska innehållet i varje karakteristisk komponent i RG för ultraren vattenutvinning.
- Placera 2,8 g RG i en 500 ml E-kolv, tillsätt 200 ml ultrarent vatten och ultraljud extrahera (effekt: 200 W, frekvens: 40 kHz) i 60 minuter. Filtrera den sedan med ett 0,22 μm filter.
- Bestäm innehållet i testlösningen enligt den linjära ekvation som erhållits i följande experiment.
2. Kromatografiska tillstånd
- Ställ in de kromatografiska förhållandena som visas i tabell 1 för vätskekromatografi med hög prestanda. Mer information om det instrument som används finns i materialförteckningen.
3. Provning av systemets anpassningsförmåga
- Undersök det linjära förhållandet.
- Späd referensstamlösningarna av gallinsyra och etylgallat 5, 10, 25, 50 och 125 gånger och referensstamlösningarna av salidrosid med 2, 4, 8, 16 och 32 gånger så att gradientkoncentrationslösningen erhålls för att rita en standardkurva.
Anmärkning: Justera utspädningsfaktorn för standardkurvan enligt det preliminära experimentet för provbehandlingen. I det preliminära experimentet späddes stamlösningarna av de tre standarderna först 5, 10, 25, 50 och 125 gånger, och sedan plottades den första standardkurvan. När testprovets koncentration detekterades fann man emellertid att koncentrationerna av salidrosid inte föll inom det linjära området för denna standardkurva och därför justerades koncentrationerna för att inkludera dem i kurvan. Sammanfattningsvis användes ovanstående preliminära experiment för att bestämma de slutliga utspädningskoncentrationerna för de tre testproverna för efterföljande experimentella studier.
- Späd referensstamlösningarna av gallinsyra och etylgallat 5, 10, 25, 50 och 125 gånger och referensstamlösningarna av salidrosid med 2, 4, 8, 16 och 32 gånger så att gradientkoncentrationslösningen erhålls för att rita en standardkurva.
- Precisionsprovning: Injicera 10 μl av den blandade referenslösningen i HPLC-systemet sex gånger dagligen och kör proverna med samma HPLC-förhållanden som beskrivs i steg 2.1. Registrera toppområdet för varje funktionskomponent.
- Stabilitetstestexperiment: Injicera 10 μl av den beredda provlösningen och bestäm HPLC:s topparea enligt kromatografiska förhållanden efter 0 timmar, 6 timmar, 10 timmar, 12 timmar, 14 timmar, 16 timmar, 18 timmar, 20 timmar respektive 24 timmar.
OBS: Toppområdena registreras automatiskt av HPLC-systemet. - Reproducerbarhetstest: Ta sex prover av samma sats RG för att bereda provlösningen enligt metoden i steg 1.2. Injicera 10 μl av varje prov i HPLC-systemet. Kör exemplen enligt beskrivningen i steg 2.1 och bestäm reproducerbarheten.
OBS: Repeterbarheten utvärderades genom att jämföra koncentrationsskillnaderna mellan de sex proverna. - Experiment med återhämtning
- Bered sex portioner av samma sats RG för testlösningen. Tillsätt sedan cirka 50 % av referensämnet för varje indexkomponent i testlösningen för att beräkna återvinningsgraden. Kör dessa exempel i HPLC-systemet med samma förhållanden som beskrivs i steg 2.1.
- Beräkna återvinningsgraden.
Anmärkning: Återvinningshastighet = (C - A) / B x 100, där A är mängden komponent som ska mätas i testlösningen, B är mängden tillsatt referensämne och C är det uppmätta värdet för lösningen som innehåller referensämnet och RG-provet. Se steg 2.1 för kromatografiska förhållanden för att utföra ovanstående steg (dvs. steg 3.1-3.5).
4. Test av upplösning in vitro
- Utför upplösningstestet med paddelmetoden för den andra metoden med allmän regel 0931 från den kinesiska farmakopén (2020-upplagan)12.
OBS: Provtagningsteknik och utrustning: Läkemedelsupplösningsapparaten (materialtabell) har en upplösningskopp, en paddel, ett temperaturkontrollsystem och ett hastighetsjusteringssystem. Innan upplösningsexperimentet påbörjas förvärms vattnet till en inställd temperatur och sedan ställs motsvarande hastighet in. Börja registrera tiden omedelbart efter att du har lagt till RG. - Tillsätt 100 ml ultrarent vatten i upplösningskoppen på läkemedelsupplösningsapparaten och håll temperaturen vid 37 °C ± 0,5 °C. Ställ in rotationshastigheten på 100 rpm.
OBS: Upplösningsapparaten har en värmeanordning som gör att temperaturen kan ställas in i systemet. Det fanns ingen signifikant skillnad i upplösningshastigheten för salidrosid i vatten, konstgjord magsaft (16,4 ml utspädd saltsyra [234 ml koncentrerad saltsyra utspädd till 1000 ml med vatten] med cirka 800 ml vatten och 10 g pepsin, väl skakad och utspädd med vatten till 1 000 ml) och konstgjord tarmjuice (fosfatbuffert [pH 6,8] innehållande trypsin)13. Det mest lättillgängliga vattnet (ultrarent) valdes som upplösningsmedium. - Tillsätt 2,8 g RG i en upplösningskopp och börja registrera upplösningstiden omedelbart. Samla upp totalt 1 ml av provet med en injektor (se materialförteckning) vid 1 min, 5 min, 10 min, 20 min, 30 min och 60 min och fyll omedelbart på volymen i upplösningskoppen med upplösningsmediet vid samma temperatur.
OBS: Provtagningsröret i upplösningsbägaren kan inte samla upp små provvolymer, så injektorn används för att samla upp provet. Prover måste samlas in snabbt för att undvika att missa angivna insamlingstider. - Filtrera omedelbart de uppsamlade proverna genom ett 0,22 μm mikroporöst membran och ta det efterföljande filtratet. Bestäm innehållet i varje komponent vid varje tidpunkt med HPLC (enligt steg 2.1) och beräkna den kumulativa upplösningen.
- För att beräkna den kumulativa upplösningen, beräkna upplösningen av varje tidpunkt (Xn):
Xn = A / B x 100, där A är mängden komponenter mätt vid varje tidpunkt och B är det teoretiska innehållet i varje komponent. - Beräkna sedan den kumulativa upplösningen (Y):
Y = X n + (X 1 + ... + X n-1) x V 2 / V 1, där V1 är upplösningsmediets totala volym och V 2 är volymen löst ämne tillsatt efter varje provtagning.
OBS: På grund av de låga responsvärdena för salidrosid och gallinsyra i kromatogrammet plottades inte den kumulativa upplösningen av salidrosid och etylgallat vid 1 min tidpunkt i upplösningskurvan.
- För att beräkna den kumulativa upplösningen, beräkna upplösningen av varje tidpunkt (Xn):
5. Montering av upplösningsmodellen
- Importera kumulativa upplösningsdata vid varje tidpunkt till dataanalysprogramvaran.
- Använd plugin-programmet för analys av läkemedelsupplösning i dataanalysprogramvaran för att passa GompertzMod-ekvationen, Gompertz-ekvationen, logistikekvationen och Weibull-ekvationen14. Ju större värde R2 har, desto bättre är kurvanpassningseffekten.
- Starta programvaran, välj Book1-fönstret för att öppna fönstret Origin Data Editing .
- I den första kolumnen A (X)-Long Name anger du Time som time och anger varje upplösningsbestämningstid. Indata i den andra kolumnen B(Y)-Long Name, definiera Data som den kumulativa upplösningen, mata in den kumulativa upplösningsprocenten för varje upplösningsbestämningstid.
- Efter datainmatning väljer du kolumnerna A(X) och B(Y) och väljer plugin-programmet Drug Dissolution Analysis i programvarans menyrad och klickar på Fit Dissolution Data > Concatenate Fit > OK. Programvaran genererar passande resultat för varje modell.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I denna studie låg precisionen, stabiliteten, repeterbarheten och provåtervinningen av RG alla inom det metodologiska intervall som anges i den kinesiska farmakopén (volym 4, 2020)12, vilket indikerar att metoden var genomförbar. Efter upprepad felsökning bestämdes att elueringsgradienten som användes i denna studie hade god upplösning (figur 1) för de tre indexkomponenterna i RG. De tre indexkomponenterna i RG hade ett bra linjärt förhållande inom ett specifikt koncentrationsområde (tabell 2). Precisionstestresultaten (tabell 3) visade att den relativa standardavvikelsen (RSD) för toppområdena för salidrosid, gallinsyra och etylgallat var 1,95%, 2,83% respektive 1,42%, vilket indikerar att instrumentets precision var bra. Stabilitetstestresultaten (tabell 4) visade att RSD för toppområdena för salidrosid, gallinsyra och etylgallat var 2,37%, 2,47% respektive 2,82%, vilket tyder på att provlösningen var stabil inom 24 timmar. Resultaten av repeterbarhetstestet (tabell 5) visade att RSD för toppområdena för salidrosid, gallinsyra och etylgallat var 2,79%, 2,67% respektive 1,55%, vilket visar att repeterbarheten för denna metod var god. Resultaten från återhämtningsexperimentet indikerade att de genomsnittliga återvinningarna av salidrosid, gallinsyra och etylgallat var 99,91%, 100,40% respektive 102,80% (tabell 6).
In vitro-upplösningsexperimentet i denna studie var att bestämma innehållet av tre karakteristiska komponenter (salidrosid, gallinsyra och etylgallat) i RG-prover vid varje tidpunkt med HPLC och sedan beräkna den kumulativa upplösningen. Upplösningskurvorna för varje komponent visas i figur 2. Efter att provet lagts i upplösningskoppen var den kumulativa upplösningen av gallinsyra i RG över 80% efter 1 min. Den kumulativa upplösningen av salidrosid och etylgallinsyra var över 65% efter 5 minuter, vilket återspeglades i data att varje indexkomponent kunde lösa över 60% efter 5 minuter. Den kumulativa upplösningen av varje indexkomponent minskade dock efter 30 minuter. Vidare anpassades upplösningskurvorna till GompertzMod-ekvationen, Gompertz-ekvationen, Logist-ekvationen och Weibull-ekvationen. Resultaten visade att GompertzMod-ekvationen var den bäst passande modellen för de tre indexkomponenterna (salidroside, gallinsyra och etylgallat) i RG. Resultaten från upplösningsmodellens anpassning av tre indexkomponenter i RG visas i tabell 7.
Figur 1: Representativa kromatogram för de tre karakteristiska komponenterna efter inställning av de kromatografiska betingelser som anges i steg 2.1 (n = 1). a) Provlösningens kromatogram. Topp 1 är gallinsyra, topp 2 är salidrosid, och topp 3 är etylgallat. b) Referenslösningens kromatogram. Topp 1 är gallinsyra, topp 2 är salidrosid, och topp 3 är etylgallat. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 2: Upplösningskurva för karakteristiska komponenter (n = 4). (A) Kumulativ upplösning av gallinsyra vid 1 min, 5 min, 10 min, 20 min, 30 min och 60 min efter administrering. (B) Kumulativ upplösning av salidrosid vid 5 min, 10 min, 20 min, 30 min och 60 min efter administrering. (C) Kumulativ upplösning av etylgallat vid 5 min, 10 min, 20 min, 30 min och 60 min efter administrering. Klicka här för att se en större version av denna figur.
| Tillstånd | Parameter |
| Kromatografisk kolonn | C18 (4,6 mm x 250 mm, 5 μm) |
| Mobil fas | Acetonitril (A)-0,2% ättiksyra (B) |
| Gradient eluering | 0–5 minuter, 0 % –4 % A; 5–15 minuter, 4 %–5 %A; 15–20 minuter, 5 %–7 %A; 20–30 minuter, 7 %–14 %A; 30–40 minuter, 14 %–13 %A; 40–45 min, 13 %–4 % |
| Flöde | 1,0 ml/min |
| Kolonnens temperatur | 30 °C |
| Detektering av våglängd | 275 nm |
| Provets volym | 10 μL |
Tabell 1: De kromatografiska betingelser som fastställts i detta experiment. Tabellen visar detaljer om den kromatografiska kolonnen, den mobila fasen, gradientelueringen, flödeshastigheten, kolonntemperaturen, detektionsvåglängden och provvolymen.
| Indexera komponenter | Linjär ekvation | R2 | Linjäritetsintervall (mg/ml) |
| Salidroside | Y = 2221X - 19,742 | 0.9996 | 0.06625–2.12 |
| Gallinsyra | Y = 29497X - 224 | 0.9997 | 0.008384–1.048 |
| Etylgallat | Y = 28902X - 86,171 | 0.9999 | 0.008336–1.042 |
Tabell 2: Det linjära förhållandet mellan indexkomponenterna i RG. De tre indexkomponenterna i RG hade ett bra linjärt förhållande i ett specifikt koncentrationsområde.
| Topparea för indexkomponenter | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD % |
| Salidroside | 900.6 | 917.4 | 899.8 | 917.4 | 940.1 | 890.5 | 1.95 |
| Gallinsyra | 6430.2 | 6544.2 | 6281.2 | 6327.7 | 6142.5 | 6636.9 | 2.83 |
| Etylgallat | 12748.9 | 12833.1 | 13190.4 | 13152.3 | 13128.3 | 13090.5 | 1.42 |
Tabell 3: Resultaten av precisionsmätningen. RSD för toppområdena för salidrosid, gallinsyra och etylgallat var 1,95%, 2,83% och 1,42% (n = 6).
| Topparea för indexkomponenter | 0 tim | 6 timmar | 12 timmar | 18 timmar | 21 timmar | 24 timmar | RSD % |
| Salidroside | 486.6 | 509 | 479 | 505.1 | 502.8 | 492 | 2.37 |
| Gallinsyra | 3236.5 | 3359.8 | 3152.2 | 3347.6 | 3337 | 3319.9 | 2.47 |
| Etylgallat | 442 | 413 | 421 | 429 | 443.8 | 436 | 2.82 |
Tabell 4: Resultaten av stabilitetstestet. RSD för toppområdena salidrosid, gallinsyra och etylgallat var 2,37%, 2,47% och 2,82% (n = 6).
| Topparea för indexkomponenter | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD % |
| Salidroside | 1337.3 | 1276.5 | 1283.7 | 1286.8 | 1242.6 | 1237.2 | 2.83 |
| Gallinsyra | 8432.1 | 8976.1 | 8792 | 9083.1 | 9040.2 | 8751.4 | 2.74 |
| Etylgallat | 422.8 | 415.3 | 421.9 | 416.3 | 428.9 | 406.1 | 1.87 |
Tabell 5: Resultaten av reproducerbarhetstestet. RSD för toppområdena för salidrosid, gallinsyra och etylgallat var 2,83%, 2,74% och 1,87% (n = 6).
| Känt innehåll (mg) | Tillsats av kvantitet (mg) | Mätmängd (mg) | Återkrav (%) | Genomsnittliga återvunna belopp (%) | RSD (%) |
| 0.5838 | 0.406 | 0.9783 | 97.18 | 99.91 | 2.70 |
| 0.5743 | 0.406 | 0.9984 | 104.47 | ||
| 0.5751 | 0.406 | 0.9755 | 98.63 | ||
| 0.5764 | 0.406 | 0.9776 | 98.81 | ||
| 0.5906 | 0.406 | 0.991 | 98.6 | ||
| 0.5802 | 0.406 | 0.9934 | 101.77 | ||
| 0.1234 | 0.118 | 0.2424 | 100.87 | 100.4 | 1.67 |
| 0.1214 | 0.118 | 0.2428 | 102.85 | ||
| 0.1216 | 0.118 | 0.2396 | 100 | ||
| 0.1218 | 0.118 | 0.2389 | 99.19 | ||
| 0.1249 | 0.118 | 0.2406 | 98.09 | ||
| 0.1226 | 0.118 | 0.2423 | 101.4 | ||
| 0.0221 | 0.386 | 0.4232 | 103.91 | 103.8 | 2.02 |
| 0.0218 | 0.386 | 0.4115 | 100.97 | ||
| 0.0218 | 0.386 | 0.4176 | 102.55 | ||
| 0.0218 | 0.386 | 0.4337 | 106.7 | ||
| 0.0224 | 0.386 | 0.4302 | 105.65 | ||
| 0.022 | 0.386 | 0.4198 | 103.05 |
Tabell 6: Resultaten av mätningen av provtagningsåtervinningsgraden. RSD för återvinningsgraden för salidrosid, gallinsyra och etylgallat var 2,70%, 1,67% respektive 2,02%.
| Indexera komponenter | Ekvation för upplösning | R2 |
| Gallinsyra | GompertzMod | 0.4978 |
| Gompertz | 0.3740 | |
| Logistiska | 0.3739 | |
| Weibull | 0.3739 | |
| Salidroside | GompertzMod | 0.9894 |
| Gompertz | 0.9783 | |
| Logistiska | 0.9781 | |
| Weibull | 0.9781 | |
| Etylgallat | GompertzMod | 0.9895 |
| Gompertz | 0.9852 | |
| Logistiska | 0.9853 | |
| Weibull | 0.9853 |
Tabell 7: Kurvanpassningsresultat för upplösningsmodellen av tre indexkomponenter i ultrarent vatten. Anpassningsresultaten för varje indexkomponent i RG var bäst med GompertzMod-ekvationen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Upplösningstestet är en idealisk in vitro-metod för att simulera sönderfall och upplösning av fasta orala preparat i mag-tarmkanalen 15. Det är ett viktigt index för att utvärdera och kontrollera kvaliteten på fasta orala preparat. Därför spelar upplösningstestet en viktig roll i utvecklingen av fasta orala läkemedelspreparat16. I synnerhet, med utvecklingen av traditionell kinesisk medicin (TCM) kvalitetskontrollteknik, har bestämningen av upplösning gradvis tillämpats på screeningstudierna av kinesiska och etniska medicinföreningspreparat17,18.
För närvarande är bestämningen av upplösningen av TCM och etnisk medicin in vitro huvudsakligen baserad på detektering av en enda indexkomponent. Den fasta beredningen av traditionell kinesisk medicin och etnisk medicin är emellertid ett komplex, och deras upplösning påverkas av många faktorer (t.ex. temperatur, upplösningsmedium etc.) och deras komplexa kemiska sammansättning19,20. Därför kan detektering av multiindexkomponenter bättre återspegla det ömsesidiga inflytandet och upplösningsskillnaden mellan olika komponenter. I detta dokument mättes in vitro-upplösningstestet av de tre indexkomponenterna (gallinsyra, salidrosid och etylgallat) i RG och upplösningskurvorna för dessa tre karakteristiska komponenter plottogs, vilket gav en referens för kvalitetskontrollen av RG.
Under experimentet bör följande två punkter särskilt noteras. För det första, vid provtagning för upplösningstestet enligt den kinesiska farmakopén 2020 utgåva12, bör en lika stor volym upplösningsmedium vid en temperatur av 37 °C ± 0,5 °C fyllas på omedelbart efter provtagning, vilket är det viktigaste steget i experimentprocessen. För det andra bör proverna samlas in från ett område halvvägs mellan bladets ovansida och upplösningsmediets yta, ~ 10 mm från upplösningskoppens innervägg. Detta beror på att det finns en koncentrationsgradient från början av upplösningen av läkemedlet till tiden för fullständig upplösning. Koncentrationsgradienten är omvänt proportionell mot omrörningshastigheten, så koncentrationen av upplöst läkemedel är högst nära det oupplösta läkemedlet och den lägsta där omrörningen är svag. Därför bör provtagning vid dessa två ytterligheter undvikas21.
Även om detektion av multiindexkomponenter bättre kan återspegla upplösningsvariationen av olika komponenter i TCM / etnisk medicin sammansatta formuleringar jämfört med detektering av enindexkomponenter, har den vissa begränsningar. Det finns risk för mänskliga fel när du använder en spruta för att samla in proverna. Mätningens precision och noggrannhet kan förbättras om automatiska mätningar av läkemedelsupplösning kan genomföras22.
Sammanfattningsvis har vi etablerat en in vitro-upplösningsmetod för bestämning av multiindexkomponenter i RG, vilket ger en grund för vidare studier av RG. Detta experiment kan ge information och vägledning för bioekvivalensstudier in vivo och in vivo-in vitro-korrelationsstudier av andra etniska läkemedel23.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Detta arbete finansierades av Kinas nationella nyckelforsknings- och utvecklingsprogram (2017YFC1703904), samarbetsprojektet (Chengdu University of TCM) - företag (Tibet Rhodiola Pharmaceutical Holding Co. LTD) (1052022040101); det regionala innovations- och samarbetsprojektet vid avdelningen för vetenskap och teknik i Sichuanprovinsen (2020YFQ0032); och det viktiga FoU- och omvandlingsprogrammet för vetenskaps- och teknikavdelningen i Qinghai-provinsen (2020-SF-C33).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chromatographic column | ZORBAX Eclipse | XDB-C18 | 4.6 mm x 250 mm, 5 µm |
| Drug dissolution tester | Shanghai Huanghai Pharmaceutical Inspection Instrument Co., Ltd. | RCZ-6B3 | |
| Electronic analytical balance | Shanghai Liangping Instruments Co., Ltd. | FA1004 | |
| Ethyl gallate (HPLC, ≥98%) | Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd. | DSTDM006301 | |
| Function drawing software | OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA | 2022 | |
| Gallic acid (HPLC, ≥98%) | Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd. | DSTDM000802 | |
| High performance liquid chromatography | Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. | Agilent 1260 Infinity  |
|
| HPLC grade methanol | Thermo Fisher Scientific (China) Co., Ltd. | 216565 | |
| Injector | Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instrument Co., Ltd. | 0.7 (22 G) | |
| Millipore filter | Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd | φ13 0.22 Nylon66 | |
| Rhodiola granules | Tibet Nodikang Pharmaceutical Co., Ltd. | 210501 | |
| Salidroside (HPLC, ≥98%) | Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd. | DST200425-037 | |
| Ultra pure water systemic | Merck Millipore Ltd. | Milli-Q | |
| Ultrasonic cleansing machine | Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd | SB-8200 DTS |
References
- Smith, S. C., Zheng, Z. J. The impending cardiovascular pandemic in China. Circulation Cardiovascular Quality and Outcomes. 3 (3), 226-227 (2010).
- Wang, D., Wang, P., Zhang, R., Xi, X. Efficacy and safety of Xuefu Zhuyu decoction combined with Western medicine for angina pectoris in coronary heart disease: A protocol for systematic review and meta-analysis. Medicine. 99 (50), 23195 (2020).
- Yang, X., et al. The role of traditional Chinese medicine in the regulation of stress in treating coronary heart disease. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2019, 3231424 (2019).
- Yang, J., Tian, S., Zhao, J., Zhang, W. Exploring the mechanism of TCM formulae in the treatment of different types of coronary heart disease by network pharmacology and machining learning. Pharmacological Research. 159, 105034 (2020).
- Pu, W. L., et al. Anti-inflammatory effects of Rhodiola rosea L.: A review. Biomedicine & Pharmacotherapy. 121, 109552 (2020).
- Tao, H., et al. Rhodiola species: A comprehensive review of traditional use, phytochemistry, pharmacology, toxicity, and clinical study. Medicinal Research Reviews. 39 (5), 1779-1850 (2019).
- Li, M., et al. Exploring the biochemical basis of the meridian tropism theory for the qi-invigorating traditional Chinese medicine herb Panax ginseng. Journal of Evidence-Based Integrative Medicine. 26, 2515690 (2021).
- Pang, Y., Liang, J. Q. Effect of Nordicam on hemodynamics in rats with myocardial ischemia-reperfusion injury. Journal of Chinese Medicinal Materials. 36 (2), 276-279 (2013).
- Nickerson, B., Kong, A., Gerst, P., Kao, S. Correlation of dissolution and disintegration results for an immediate-release tablet. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 150, 333-340 (2018).
- Kambayashi, A., Yomota, C. Exploring clinically relevant dissolution specifications for oral solid dosage forms of weak acid drugs using an in silico modeling and simulation approach. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 159, 105728 (2021).
- Meng, S., Jiang, T. Y., Bu, C. J., Liu, J. Q. Research progress on the dissolution of traditional Chinese medicine preparations. Chinese Journal of Clinical Rational Drug Use. 8 (32), 180-181 (2015).
- Chinese Pharmacopoeia Committee. Pharmacopoeia of the People's Republic of China. 4, Chinese Medical Science and Technology Press. (2020).
- Lin, J. Z. Evaluation on Pre-Preparation of Rhodiola Extract. , Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. (2013).
- Zhou, Y. B., et al. Calculation of drug solubility Weibull distribution parameters by Origin software. Herald of Medicine. 30 (06), 721-723 (2011).
- Hu, C. Q., Pan, R. X. Progress in evaluation/prediction of bioequivalence of solid oral preparations by dissolution test. Chinese Journal of New Drugs. 23 (01), 44-51 (2014).
- Zhang, H., Yu, L. X. Dissolution testing for solid oral drug products: Theoretical considerations. American Pharmaceutical Review. 7 (5), 26-30 (2004).
- Ren, J. L., et al. Analytical strategies for the discovery and validation of quality-markers of traditional Chinese medicine. Phytomedicine. 67, 153165 (2020).
- Li, H., et al. Establishment of modified biopharmaceutics classification system absorption model for oral Traditional Chinese Medicine (Sanye Tablet). Journal of Ethnopharmacology. 244, 112148 (2019).
- Song, X. Y., Li, Y. D., Shi, Y. P., Jin, L., Chen, J. Quality control of traditional Chinese medicines: a review. Chinese Journal of Natural Medicines. 11 (6), 596-607 (2013).
- Wu, X., et al. Quality markers based on biological activity: A new strategy for the quality control of traditional Chinese medicine. Phytomedicine. 44, 103-108 (2018).
- Wei, N. -N., Wang, X., Su, M.
- Chi, Z., Azhar, I., Khan, H., Yang, L., Feng, Y. Automatic dissolution testing with high-temporal resolution for both immediate-release and fixed-combination drug tablets. Scientific Reports. 9 (1), 17114 (2019).
- Haidar, S. H., et al. Bioequivalence approaches for highly variable drugs and drug products. Pharmaceutical Research. 25 (1), 237-241 (2008).
