Summary
Het onderstaande artikel presenteert een protocol voor het meten van zaadkieming, zaailinggroei en fysiologische indexen van twee pepervariëteiten met zouttolerantieverschillen in reactie op zes gemengde zoutconcentraties. Dit protocol kan worden gebruikt om de zouttolerantie van pepervariëteiten te evalueren.
Abstract
Om de zouttolerantie en het fysiologische mechanisme van peper (Capsicum annuum L.) in het kiemstadium te bepalen, worden de variëteiten Hongtianhu 101 en Xinxiang 8, die grote verschillen in zouttolerantie hebben, gebruikt als studiemateriaal. Zes gemengde zoutconcentraties van 0, 3, 5, 10, 15 en 20 g/l, afgeleid met gelijke molaire verhoudingen van Na2CO3, NaHCO3, NaCl, CaCl2, MgCl2, MgSO4 en Na2SO4 worden gebruikt. Om hun effecten te bepalen, worden de gerelateerde indexen van zaadkieming, zaailinggroei en fysiologie gemeten en wordt zouttolerantie uitgebreid geëvalueerd met behulp van lidmaatschapsfunctieanalyse. De resultaten tonen aan dat naarmate de gemengde zoutconcentratie toeneemt, het kiempotentieel, de kiemingsindex, de kiemkracht, de kiemkrachtindex, de wortellengte en het wortelverse gewicht van de twee cultivars aanzienlijk afnemen, terwijl de relatieve zoutsnelheid geleidelijk toeneemt. De hypocotyllengte en het versgewicht bovengronds nemen eerst toe en nemen vervolgens af, terwijl de malondialdehyde (MDA), proline (Pro) -inhoud, catalase (CAT), peroxidase (POD) en superoxide dismutase (SOD) -activiteit afnemen en vervolgens toenemen. Het kiempotentieel, de kiemingsindex, de kiemkracht, de kiemkrachtindex, de wortellengte, het versgewicht van de wortel, het MDA- en Pro-gehalte en de CAT-activiteit van de Hongtianhu 101-zaden zijn hoger dan die van Xinxiang 8 voor alle zoutconcentraties die hier worden gebruikt. Hypocotyllengte, versgewicht bovengronds en relatieve zoutsnelheid zijn echter lager in Hongtianhu 101 dan in Xinxiang 8. De uitgebreide evaluatie van zouttolerantie laat zien dat de totaal gewogen waarden van de twee lidmaatschapsfunctie-indexen eerst toenemen en vervolgens afnemen naarmate de gemengde zoutconcentratie toeneemt. Vergeleken met 5 g/L, dat de hoogste lidmaatschapsfunctiewaarde heeft, daalt de index onder zoutconcentraties van 3 g/L, 10 g/L en 15 g/L met respectievelijk 4,7%-11,1%, 25,3%-28,3% en 41,4%-45,1%. Deze studie biedt theoretische richtlijnen voor de veredeling van zouttolerante pepervariëteiten en een analyse van de fysiologische mechanismen die betrokken zijn bij zouttolerantie en zouttolerante teelt.
Introduction
Het zoutgehalte is wereldwijd een belangrijke beperkende factor voor de gewasproductiviteit1. Op dit moment wordt bijna 19,5% van 's werelds geïrrigeerde land en 2,1% van het droge land beïnvloed door zoutgehalte, en ongeveer 1% van de landbouwgrond degenereert elk jaar in zout-alkaliland. Tegen 2050 zal naar verwachting 50% van het bouwland worden aangetast door verzilting 2,3. Naast natuurlijke factoren, zoals natuurlijke rotsverwering en zout regenwater in de buurt van of rond de kust, hebben snelle oppervlakteverdamping, lage regenval en onredelijke landbouwbeheermethoden het proces van bodemverzilting verergerd. Bodemverzilting remt de groei van plantenwortels en vermindert de opname en het transport van water en voedingsstoffen van de plantenwortels naar de bladeren. Deze remming resulteert in fysiologische watertekorten, voedingsonevenwichtigheden en ionentoxiciteit, wat leidt tot verminderde gewasproductiviteit en een volledig verlies van gewasopbrengst. De verzilting van gecultiveerd land wordt geleidelijk een van de meest kritische abiotische stressfactoren die van invloed zijn op de wereldwijde landbouwproductievoedselproductie 4. Zoutstress vermindert het voor landbouw beschikbare bouwland, wat kan leiden tot een aanzienlijk onevenwicht tussen vraag en aanbod van toekomstige landbouwproducten. Daarom is het onderzoeken van de effecten van bodemverzilting op gewasgroei en fysiologische en biochemische mechanismen bevorderlijk voor het kweken van zouttolerante variëteiten, het duurzame gebruik van zoute grond en de veiligheid van landbouwproducten.
Peper (Capsicum annuum L.) wordt wereldwijd aangeplant vanwege de hoge voedingswaarde en medicinale waarde. Capsaïcine is bijvoorbeeld een alkaloïde die verantwoordelijk is voor de pittige smaak van peper. Capsaïcine kan worden gebruikt voor pijnverlichting, gewichtsverlies, verbetering van cardiovasculaire, gastro-intestinale en ademhalingssystemen, en in verschillende andere toepassingen5. Peper is ook rijk aan bioactieve stoffen, vooral verschillende antioxidanten (carotenoïden, fenolen en flavonoïden) en vitamine C6. Momenteel wordt gemeld dat peper het groentegewas is met het grootste teeltareaal in China, met een jaarlijks plantoppervlak van meer dan 1,5 x 106 ha, goed voor 8% -10% van het totale groenteplantareaal in China. De peperindustrie is uitgegroeid tot een van de grootste groente-industrieën in China en heeft de hoogste outputwaarde7. Peperteelt wordt echter vaak onderworpen aan een verscheidenheid aan biologische (plagen en schimmels) en abiotische stress, met name zoutstress, wat een directe negatieve invloed heeft op de kieming, groei en ontwikkeling van zaden, wat resulteert in de vermindering van de opbrengst van pepervruchten en kwaliteit8.
Zaadkieming is de eerste fase van interactie tussen planten en de omgeving. Zaadkieming is zeer gevoelig voor schommelingen in de omringende media, met name bodemzoutstress, die omgekeerde effecten op de fysiologie en het metabolisme kan uitoefenen en uiteindelijk de normale groei, ontwikkeling en morfogenese van gewassen kan verstoren9. In eerdere studies werden de kieming van peperzaad en de groei van zaailingen onder zoutstress uitgebreid onderzocht; de meeste studies gebruikten echter NaCl als het enige zout voor stressinductie 10,11,12. Bodemzoutschade is echter voornamelijk te wijten aan Na+, Ca2+, Mg2+, Cl-, CO32- en SO42- ionentoxiciteit gegenereerd door de dissociatie van natrium-, calcium- en magnesiumzouten. Vanwege de synergie en het antagonisme tussen ionen kunnen de effecten van gemengd zout en enkelvoudig zout op de groei en ontwikkeling van gewassen heel verschillend zijn. De overeenkomstige kenmerken van de kieming en groei van peperzaad in gemengd zout zijn echter nog onduidelijk. Daarom worden in deze studie twee pepervariëteiten met opmerkelijke verschillen in zouttolerantie als materiaal gebruikt. Het analyseren van de effecten van verschillende zoutconcentraties op de kieming, groei en fysiologische en biochemische indexen van peperzaad na equimolaire menging van zeven zouten kan het reactiemechanisme van de kieming van peperzaad op zoutgehaltestress onthullen. Het kan ook een theoretische basis bieden voor het kweken van sterke peperzaailingen, evenals een hoge opbrengst en hoogwaardige teelt in zout gecultiveerd land.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
OPMERKING: Hier presenteren we een protocol voor het beoordelen van de responskenmerken en interne mechanismen van de kieming van peperzaad en de groei van zaailingen onder verschillende gemengde zoutspanningen, die kunnen dienen als referentiemethode voor de evaluatie van de zaadzouttolerantie.
1. Experimentele voorbereiding
- Bereid gewaszaden voor cultivars-Hongtianhu 101 met sterke zouttolerantie en Xinxiang 8 met lage tolerantie.
- Bereid 0,2% KMnO4-oplossing als zaaddesinfectiereagens. Weeg eerst 4,0 g KMnO4 en voeg vervolgens 2.000 ml gedestilleerd water toe.
OPMERKING: Kaliumpermanganaat is meestal onstabiel vanwege de sterke oxidatie; dienovereenkomstig wordt het onmiddellijk voor gebruik bereid. - Bereid de gemengde zouten met behulp van zeven zouten, waaronder natriumcarbonaat, natriumbicarbonaat, natriumchloride, calciumchloride, magnesiumchloride, magnesiumsulfaat en natriumsulfaat13. Voeg dezelfde molaire hoeveelheid van elk toe, die achtereenvolgens goed zijn voor respectievelijk 14,8%, 11,7%, 8,2%, 15,5%, 13,3%, 16,7% en 19,8% van de totale massaverhouding van de gemengde zouten.
- Bereid petrischalen (eenmalig gebruik) en filtreerpapier (kwalitatief filterpapier met gemiddelde snelheid), beide met een diameter van 9 cm.
OPMERKING: Het materiaal van de petrischaal kan worden gewijzigd; de diameter van de petrischaal en het filterpapier moet echter hetzelfde zijn.
2. Zaad weken en voorbereiding voor ontkieming
- Voor zaadoptimalisatie selecteert u peperzaden met een consistente grootte en volledige deeltjes van elke variëteit, met een gemiddelde diameter van respectievelijk 4,2 mm en 3,7 mm voor Hongtianhu 101 en Xinxiang 8 zaden. Bereken het totale aantal zaden dat is geselecteerd op basis van de testbelasting.
- Week voor zaaddesinfectie geselecteerde peperzaden gedurende 15 minuten in 0,2% KMnO4-oplossing en spoel vervolgens vijf keer met gedestilleerd water.
- Breng voor het weken van het zaad de gesteriliseerde zaden over in gedestilleerd water en laat ze 24 uur weken. Spoel de zaden meerdere keren af met gedestilleerd water en droog voor verder gebruik.
OPMERKING: De weektijd van zaden voor verschillende gewassen kan variëren.
3. Zaadontkieming en zaailinggroei
- Bereid zes concentraties van de gemengde zouten: 0 (controle), 3, 5, 10, 15 en 20 g/l. Meet de geleidbaarheid van de zoutoplossing met behulp van een geleidbaarheidsmeter; de EC-waarden voor de geleidbaarheid van de oplossing zijn respectievelijk 0,092, 3,05, 4,73, 8,33, 11,53 en 15,22 ms/cm.
- Voor zaadbereiding, plaats 40 peperzaden gelijkmatig in een petrischaal met twee lagen filterpapier. Bereid de zaden voor zes experimentele behandelingen voor en herhaal elke behandeling vijf keer.
- Voeg voor zaadkieming een geschikte hoeveelheid van de zes gemengde zoutconcentraties toe aan de petrischaal om ervoor te zorgen dat het filterpapier vochtig blijft. Plaats de zaden in een luchtincubator bij 28 °C en 80% luchtvochtigheid voor ontkieming in het donker.
- Laat de zaailingen na het ontkiemen van het zaad gedurende 14 dagen na het zaaien in het licht (lichtintensiteit van ongeveer 450 Lux; lichtcyclus van 12/12 uur) in de broedmachine blijven groeien. De temperatuur en vochtigheid in het groeistadium van de zaailing moeten dezelfde zijn als die welke in het kiemstadium worden gebruikt.
- Vul de oplossing in de kweekschaal om de 12 uur aan om een vochtig filterpapier vast te houden en was het filtreerpapier om de 24 uur volledig met de overeenkomstige concentratie van de gemengde zoutoplossing om een constante gemengde zoutconcentratie in de petrischaal te behouden.
OPMERKING: De hoeveelheid zoutoplossing die aan natte zaden wordt toegevoegd, kan worden aangepast aan de kiem- en groeistadia van het zaad. Er zijn veel methoden beschikbaar voor het handhaven van een constante concentratie van zoutoplossingen in kweekgerechten. Naast de methoden die in dit experiment worden beschreven, kan de strategie van het toevoegen van gedestilleerd water op gewicht worden gebruikt.
4. Meting en berekening van indicatoren
- Bepaling van de kiemingsindexen van het zaad
- Bepaal de kiemkracht dagelijks na het zaaien, waarbij de radikelbrekende zaadlaag de helft van de zaaddiameterlengte bereikt als kiemmarker.
- Bereken de kiemkracht, kiemkracht, relatieve zoutsnelheid, kiemindex en kiemkrachtindex voor zaden met behulp van de volgende formules:
Kiemkracht (%) = (aantal normale ontkiemde zaden op dag 7 na het zaaien/aantal geteste zaden) × 100
Kiempotentieel (%) = (aantal normale ontkiemde zaden op dag 3 na het zaaien/aantal geteste zaden) × 100
Relatieve zoutsnelheid (%) = (controlekiemingssnelheid - kiemkracht van de behandeling)/controlekiemingssnelheid × 100
berekend aan de hand van de kiemkracht van het zaad op dag 7 na het zaaien
Kiemindex (GI) = ∑ [Gt/Dt]
waarbij Gt verwijst naar het kiemnummer van het zaad op een bepaalde periode (t) na het zaaien en Dt verwijst naar de overeenkomstige kiemdagen
Kiemkrachtindex zaad (VI) = GI x S
waarbij S de wortellengte is
- Bepaling van de groei-index van de zaailing
- Selecteer op dag 14 na het zaaien willekeurig 10 representatieve zaailingen uit elke petrischaal en meet de wortellengte en hypocotyllengte.
- Gebruik een mes om de peperzaailingen in twee delen te verdelen: radikel en bovengrondse delen. Verwijder het water uit de zaailingen door af te vegen en weeg de zaailingen afzonderlijk om het verse gewicht te bepalen.
- Bepaal de antioxidant enzymactiviteit, malondialdehyde (MDA) niveau, en proline (Pro) gehalte in peper als volgt.
- Om de peperzaailingen te behouden, selecteert u representatieve hele peperzaailingen (ongeveer 24,0 g) van elke behandeling op dag 14 na het zaaien. Na het verwijderen van het oppervlaktewater vriest u de zaailingen onmiddellijk in vloeibare stikstof gedurende 1 minuut en bewaart u ze in een koelkast bij een ultralage temperatuur (-80 °C).
OPMERKING: Het monsteraantal peperzaailingen dat in de koelkast met ultralage temperatuur is bewaard, moet voldoende zijn, voor het geval sommige indicatoren opnieuw moeten worden getest. - Haal ongeveer 1,0 g zaailingmonster op van elke behandeling die in drievoud is verzameld. Plaats het zaailingmonster in een centrifugebuis, voeg vloeibare stikstof toe en maal het monster met behulp van een maalstaaf om de fysiologische indexen van de zaailingen te bepalen. De vastgestelde indexen en het meetschema worden hieronder weergegeven.
- Bepaal de beschermende enzymactiviteit van de zaailing (peroxidase [POD], catalase [CAT], superoxide dismutase [SOD]), malondialdehyde (MDA) en proline (Pro) met behulp van een in de handel verkrijgbare kit (op basis van spectrofotometrie) voor elke factor14.
OPMERKING: Eerdere waarnemingen onthulden geen verschil in zoutspanning tussen de gemengde zoutconcentraties van 15 en 20 g / L. Als gevolg hiervan worden slechts vijf zoutconcentraties (0, 3, 5, 10 en 15 g / L) gemeten.
- Om de peperzaailingen te behouden, selecteert u representatieve hele peperzaailingen (ongeveer 24,0 g) van elke behandeling op dag 14 na het zaaien. Na het verwijderen van het oppervlaktewater vriest u de zaailingen onmiddellijk in vloeibare stikstof gedurende 1 minuut en bewaart u ze in een koelkast bij een ultralage temperatuur (-80 °C).
- Uitgebreide evaluatie van zouttolerantie met behulp van de lidmaatschapsfunctiemethode
OPMERKING: De lidmaatschapsfunctie maakt gebruik van een vage wiskundige methode, die kwalitatieve evaluatie omzet in kwantitatieve evaluatie15, om een verscheidenheid aan fysiologische indexen te evalueren die worden beïnvloed door zoutschade.- Bereken de waarde van de lidmaatschapsfunctie met behulp van de volgende formule van Zhoubin Liu et al.15:
Ri = (Xi - Xmin)/(Xmax - Xmin)
Als een eigenschap negatief gecorreleerd is met zouttolerantie, bereken dan de inverse lidmaatschapsfunctie met behulp van:
Ri = 1 - (Xi - Xmin)/(Xmax - Xmin)
Accumuleer de lidmaatschapswaarden van elke fysiologische index, waarbij Xi de gemeten waarde van een bepaalde eigenschap is, Xmax en Xmin respectievelijk de maximale en minimale waarden voor Xi en Ri de lidmaatschapswaarde van die eigenschap. - Neem de volgende relevante indicatoren op: kiemkrachtkenmerken van zaden (kiemkracht, kiemkracht, kiemkrachtindex en kiemkrachtindex), groeikenmerken van zaailingen in het kiemstadium (wortellengte, hypocotyllengte, vers wortelgewicht en vers gewicht bovengronds), MDA, Pro en beschermende enzymactiviteit (CAT, POD, SOD) voor de berekening van de lidmaatschapsfunctiewaarde. De waarden van de lidmaatschapsfunctie worden verkregen uit elke indicator.
- Bereken de waarde van de lidmaatschapsfunctie met behulp van de volgende formule van Zhoubin Liu et al.15:
- Gebruik spreadsheet- en SPSS-software (versie 22.0) om de testgegevens te analyseren en te verwerken en pas de LSD-methode (Least Significant Difference) toe voor meerdere vergelijkingen om significante verschillen te identificeren. Gebruik de correlatieanalyse van Pearson om de correlatie tussen zaadkieming en fysiologische indexen van peper onder samengestelde zoutstress te onderzoeken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Kiemeigenschappen van zaden
Naarmate de gemengde zoutconcentratie toeneemt, neemt het kiempotentieel en de kiemingsindex van Hongtianhu 101 en Xinxiang 8 aanzienlijk af. Beide cultivars hebben een sterke daling van de zoutconcentraties van 0-3 g/L en een langzame en gestage daling van de zoutconcentraties van 3-20 g/L (figuur 1A,B). De kiemkracht van de twee variëteiten neemt geleidelijk af naarmate de gemengde zoutconcentraties toenemen en de relatieve zoutsnelheid voor de variëteiten geleidelijk toeneemt. Er is geen significant verschil in de kiemkracht en relatieve zoutsnelheid bij zoutconcentraties van 3-15 g/L. Het verschil is echter significant bij alle andere zoutconcentraties (figuur 1C,D). Wat betreft zouttolerantie tussen de twee variëteiten, zijn het kiempotentieel, de kiemingsindex en de kiemkracht van Hongtianhu 101-zaden met toenemende gemengde zoutconcentraties hoger dan die van Xinxiang 8, terwijl de relatieve zoutsnelheid lager is dan die van Xinxiang 8.
Naarmate de gemengde zoutconcentratie toeneemt (0-15 g/L), neemt de kiemkrachtindex van de twee variëteiten aanzienlijk af. Wanneer de gemengde zoutconcentratie 15 g / L is, daalt de zaadkiemingskrachtindex van Hongtianhu 101 en Xinxiang 8 met respectievelijk 91,0% en 94,6% in vergelijking met die van de controle. Opmerkelijk is dat de afname niet significant is wanneer de gemengde zoutconcentratie verder toeneemt van 15 tot 20 g/L. De kiemkrachtindex van Hongtianhu 101 is hoger dan die van Xinxiang 8 bij elk gemengd zoutconcentratieniveau (figuur 1E).
Groeikenmerken van zaailingen
Naarmate de gemengde zoutconcentratie toeneemt (0-15 g / L), nemen de wortellengte en het wortelverse gewicht van Hongtianhu 101 en Xinxiang 8 aanzienlijk af. Wanneer de gemengde zoutconcentratie 15 g / L is, neemt de wortellengte van Hongtianhu 101 en Xinxiang 8 af met respectievelijk 89,4% en 91,1% en neemt het versgewicht van de wortel af met respectievelijk 81,7% en 71,2% in vergelijking met die van de controlegroep. Wanneer de zoutconcentratie echter 15-20 g/L is, veranderen de wortellengte en het wortelverse gewicht van de twee variëteiten niet significant (figuur 2A,C). De wortellengte en het wortelverse gewicht van Hongtianhu 101 zijn over het algemeen hoger dan die van Xinxiang 8 met toenemende gemengde zoutgehaltes, met duidelijke verschillen bij concentraties variërend van 0 tot 10 g / L.
De hypocotyllengte en het versgewicht bovengronds van de twee variëteiten nemen toe en nemen vervolgens af met toenemende gemengde zoutconcentratie. Beide indexen bereiken hun hoogste waarden bij een zoutconcentratie van 5 g/L. Evenzo, wanneer de zoutconcentratie 15-20 g / L is, nemen de hypocotyllengte en het verse gewicht bovengronds van de twee variëteiten enigszins af. Op basis van de rasverschillen zijn de hypocotyllengte en het versgewicht bovengronds van Xinxiang 8 hoger dan die van Hongtianhu 101 bij elke zoutconcentratie (figuur 2B,D).
Membraan lipideperoxidatie en osmotische aanpassing stofgehalte
Naarmate de gemengde zoutconcentratie toeneemt, neemt het MDA- en Pro-gehalte van de twee variëteiten af en neemt het vervolgens toe. De MDA- en Pro-gehalten bereiken hun laagste waarden bij concentraties van respectievelijk 5 g/l en 3 g/l (figuur 3A,B). Het MDA-gehalte neemt licht af bij zoutconcentraties van 0-5 g/l en neemt snel toe bij 10 g/l. In vergelijking met de behandeling met 5 g/l neemt het MDA-gehalte na de behandeling met 10 g/l toe met 59,9%-64,8%, en blijft dan ongewijzigd. Het MDA-gehalte van Hongtianhu 101 is hoger dan dat van Xinxiang 8 bij verschillende zoutconcentraties (figuur 3A). De afname van het Pro-gehalte bij 0-3 g/L is niet significant en er wordt weinig verschil gevonden tussen de twee variëteiten. Wanneer de zoutconcentratie 3-15 g/L is, neemt het Pro-gehalte van Xinxiang 8 langzaam toe en blijft het relatief stabiel, terwijl het Pro-gehalte van Hongtianhu 101 snel toeneemt. Vergeleken met 3 g/L neemt het Pro-gehalte van Hongtianhu 101 aanzienlijk toe met 440,2% bij 15 g/L (figuur 3B).
Beschermende enzymactiviteit
Naarmate de gemengde zoutconcentratie toeneemt, nemen de CAT-, POD- en SOD-activiteiten van de zaailingen van Hongtianhu 101 en Xinxiang 8 af en nemen vervolgens toe, met de laagste waarden verkregen bij een concentratie van 3 g / L (figuur 4A-C). De CAT- en POD-activiteiten van de twee variëteiten variëren enigszins bij zoutconcentraties van 0-5 g / L, en het verschil tussen hen is klein. Daarna nemen de CAT- en POD-activiteiten van de twee variëteiten aanzienlijk toe met toenemende zoutconcentratie. Verder zijn de CAT- en POD-activiteiten van Hongtianhu 101 hoger dan die van Xinxiang 8 en neemt het verschil tussen hen geleidelijk toe (figuur 4A, B). De SOD-activiteit van de twee variëteiten varieert enigszins bij zoutconcentraties van 0-10 g / L en neemt vervolgens snel toe. De SOD-activiteit van Xinxiang 8 is hoger dan die van Hongtianhu 101 bij zoutconcentraties van 0-10 g / L; voor de resterende concentraties is de activiteit lager dan die van Hongtianhu 101 (figuur 4C).
Correlatieanalyse van de kiemingsindexen van peper en uitgebreide evaluatie van zoutstress
Uit de correlatieanalyse (tabel 1) blijkt dat de wortellengte en het versgewicht van de wortel voor de karakteristieke indexen voor de groei van de zaailing significant positief gecorreleerd zijn met de kiemingsindexen (kiempotentieel, kiemkrachtsnelheid, kiemingsindex, kiemkrachtindex voor zaden, enz.); er wordt echter geen expliciete relevantie gevonden tussen de hypocotyllengte, het versgewicht bovengronds en de kiemingsindexen. Er wordt een significante negatieve correlatie gevonden tussen de indexen van de groeikenmerken van zaailingen en de activiteit van beschermende enzymen (CAT, POD en SOD). Er wordt ook een significante negatieve correlatie gevonden tussen de hypocotyllengte en de inhoud van MDA en Pro, en tussen het verse gewicht van de shoot en het MDA-gehalte. Met uitzondering van de significante correlatie tussen de kiemkrachtindex voor zaad en beschermende enzymactiviteit, wordt er geen significante correlatie gevonden tussen de kiemingskarakteristiekindexen en fysiologische indexen van zaailingen (beschermende enzymactiviteit en MDA- en Pro-gehalte).
De zouttolerantie van de twee pepervariëteiten onder samengestelde zoutstress wordt geëvalueerd met behulp van de lidmaatschapsfunctiemethode voor meerdere eigenschappen. Omdat de peperzaailingen niet worden blootgesteld aan zoutstress wanneer de gemengde zoutconcentratie 0 g / L is, wordt hun lidmaatschapsfunctiewaarde niet berekend. Als gevolg hiervan wordt alleen de behandeling met zoutstress beoordeeld met behulp van lidmaatschapsfunctieanalyse. MDA blijkt negatief gecorreleerd te zijn met de zouttolerantie van peperzaailingen en wordt berekend met behulp van de inverse lidmaatschapsfunctiemethode; andere indexen worden berekend met behulp van de lidmaatschapsfunctiemethode. Tabel 2 laat zien dat naarmate de gemengde zoutconcentratie toeneemt, de totaalgewogen waarden van elke indexfunctie van de twee variëteiten toenemen en vervolgens dalen, om uiteindelijk een maximum te bereiken bij een zoutconcentratie van 5 g/l. In vergelijking met de behandeling van 5 g/l worden de waarden verkregen met de 3 g/l, 10 g/l, en 15 g/L zoutconcentratiebehandelingen dalen met respectievelijk 4,7%-11,1%, 25,3%-28,3% en 41,4%-45,1%. Daarom kan de zouttolerantie van peper onderworpen aan 5 g / L, 3 g / L, 10 g / L en 15 g / L zoutconcentratiebehandelingen worden gecategoriseerd als respectievelijk beste, op één na beste, slechte en slechtste.
Figuur 1: Effecten van toenemende gemengde zoutconcentraties op de zaadkieming van peper. (A), (B), (C), (D) en (E) vertegenwoordigen respectievelijk de responskenmerken van het kiempotentieel van peperzaad, kiemingsindex, kiemkracht, relatieve zoutsnelheid en zaadkiemingskrachtindex ten opzichte van samengestelde zoutstress. Verschillende kleine letters in de figuur duiden op significante verschillen tussen behandelingen, die worden geanalyseerd door de Tukey's multiple range test (p < 0,05). Foutbalken geven standaarddeviaties aan (n = 5). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: Effecten van toenemende gemengde zoutconcentraties op de kieming van zaden en morfologische indexen van peper. (A), (B), (C) en (D) vertegenwoordigen de responskenmerken van respectievelijk de wortellengte van peperzaailingen, hypocotyllengte, wortel vers gewicht en vers gewicht bovengronds op samengestelde zoutstress. Verschillende kleine letters in de figuur duiden op significante verschillen tussen behandelingen, die worden geanalyseerd door de Tukey's multiple range test (p < 0,05). Foutbalken geven de standaarddeviatie aan (n = 5). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3: Effecten van toenemende gemengde zoutconcentraties op het MDA- en Pro-gehalte van peperzaailingen. (A) en (B) vertegenwoordigen de responskenmerken van respectievelijk het MDA- en Pro-gehalte van paprikazaailingen op samengestelde zoutstress. Verschillende kleine letters in de figuur duiden op significante verschillen tussen behandelingen, die worden geanalyseerd door de Tukey's multiple range test (p < 0,05). Foutbalken geven de standaarddeviatie aan (n = 3). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 4: Effecten van toenemende gemengde zoutconcentraties op CAT-, POD- en SOD-activiteiten van peperzaailingen. (A), (B) en (C) vertegenwoordigen de responskenmerken van peperzaailing CAT-, POD- en SOD-activiteiten op respectievelijk samengestelde zoutstress. Verschillende kleine letters in de figuur duiden op significante verschillen tussen behandelingen, die worden geanalyseerd door de Tukey's multiple range test (p < 0,05). Foutbalken geven de standaarddeviatie aan (n = 3). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Tabel 1: Correlatieanalyse tussen peperkieming en fysiologische indicatoren onder samengestelde zoutspanning (n = 30). Pearson's correlatieanalyse wordt gebruikt om de correlatie te onderzoeken tussen zaadkieming en fysiologische indexen van peper onder samengestelde zoutstress. * p < 0,05; ** p < 0,01. Klik hier om deze tabel te downloaden.
Tabel 2: De gewogen lidmaatschapsfunctiewaarde van peperkieming en fysiologische indicatoren van zaailingen onder gemengde zoutstress. Klik hier om deze tabel te downloaden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Deze onderzoeksmethode bestaat uit vier belangrijke stappen die van invloed zijn op de nauwkeurigheid van de experimentele resultaten. Ten eerste moeten de gewogen reagentia volledig in een mortel worden gemalen vanwege de slechte oplossing van gemengde zoutzouten als gevolg van het slechte oplossen van gemengde zouten als gevolg van het verhoogde opgeloste gehalte in oplossingen met een hoge zoutconcentratie en de lage oplosbaarheid van reagentia zoals calciumchloride, die moeilijker op te lossen zijn in water. Verder moeten de reagentia worden opgelost via ultrasone golven voordat de capaciteit wordt bepaald. Ten tweede moet de geconfigureerde zoutoplossing elke keer volledig worden geschud en voor gebruik aan de petrischaal worden toegevoegd. Ten derde moeten de petrischalen na toevoeging van de zoutoplossing een geschikte waterlaag behouden en moet de waterstatus van elke petrischaal relatief consistent zijn. Ten slotte moeten de lichtomstandigheden consistent zijn na het ontkiemen van het zaad.
In deze studie kan het aantal testzaden in een enkele petrischaal worden aangepast door de diameter van de geselecteerde petrischaal te variëren. Afhankelijk van de specifieke situatie van bodemzoutstress in verschillende plantgebieden, kan het aandeel van elke afzonderlijke zouttoevoeging worden aangepast om consistentie mogelijk te maken met de werkelijke situatie van zoutstress in de lokale bodem. Hoewel deze methode praktisch is, leiden problemen zoals operationele problemen bij het bepalen van de lengte van de zaailing en het verse gewicht, of de beschikbaarheid van zeer weinig zaden in een enkel kweekgerecht om de gegevens te herhalen, voor kleinere zaden (zoals raapzaad, ijsplant en amarant) of grotere zaden (zoals zwaardbonen en tuinbonen), tot problemen bij het bestuderen van zouttolerantie met behulp van deze methode.
De hier beschreven methode wordt gebruikt om de kiemingskenmerken van het zaad en de groei van zaailingen onder verschillende gemengde zoutconcentraties te bepalen en het veranderingsmechanisme te onthullen door interne fysiologische enzymactiviteit, die van groot belang is voor het objectief evalueren van de zouttolerantiekenmerken van zaden. Deze technologie kan een technische referentie bieden voor de evaluatie van de zouttolerantie van andere gewassen. Zaadkieming en zaailinggroei zijn de stadia waarin gewassen het meest gevoelig zijn voor zoutstress. Deze methode kan dus effectief een referentie bieden voor zouttolerante teelt en gewasveredeling.
In de meeste gewassen kan zoutstress de kieming van zaden en de groei van zaailingen onder biotische stress remmen. Een dergelijke remming kan te wijten zijn aan een vermindering van de opname van zaadwater door het osmotische potentieel van de zoutoplossing onder zoute omstandigheden te verminderen. Zoutionenstress en toxiciteit kunnen de activiteit van beschermende enzymen (POD, CAT, SOD, enz.) en eiwitmetabolisme tijdens zaadkieming veranderen en de endogene hormoonbalans vernietigen11,16. Zhani et al. rapporteerden dat het kiemproces voornamelijk werd veranderd door een verminderde kiemkracht en langdurige kieming onder zout (NaCl) stress. Verder werd een significant verschil gevonden in de kiemkracht tussen verschillende variëteiten (10% -50%) bij een zoutconcentratie van 8 g / L17. De huidige studie onthult ook dat naarmate de gemengde zoutconcentratie toeneemt, het kiempotentieel, de kiemingsindex, de kiemkracht en de kiemkrachtindex van Hongtianhu 101 en Xinxiang 8 aanzienlijk afnemen en de relatieve zoutsnelheid geleidelijk toeneemt. Volgens Patanè et al., hoewel zoutstress de kiemtijd van zoete sorghumzaden verlengde, had toenemende zoutstress een nadelig effect op de uiteindelijke kieming van zaden18. Gerelateerde studies suggereren echter dat NaCl-behandeling de kieming en groei van peperzaad kan bevorderen19, wat verband kan houden met verschillen in zoutconcentratieniveaus.
Het verhogen van het niveau van zoutstress heeft een significant effect op de groei van peperzaailingen, en op basis van deze studie namen de wortellengte en het wortelverse gewicht van de twee variëteiten aanzienlijk af met toenemende gemengde zoutconcentraties. Deze bevinding is vergelijkbaar met die van Mirosavljević et al., die suggereerden dat de wortellengte en het wortelgewicht afnamen naarmate de zoutstress toenam, en de verschillen tussen de behandelingen waren significant20. Dit resultaat geeft aan dat het wortelstelsel in het bodemmedium werd geplaatst in direct contact met de bodemoplossing en dat de wortellengte en het wortelgewicht gevoeliger waren voor NaCl osmotische stress. Wortellengte en wortelgewicht zijn belangrijke indicatoren van de reactie van planten op zoutstress. Volgens deze studie, naarmate de zoutconcentratie toeneemt, nemen de hypocotyllengte en het verse gewicht van de bovengrondse delen toe en nemen vervolgens af, met maximale waarden bereikt bij 5 g / L. Khan et al. suggereerden ook dat naarmate het zoutgehalte (NaCl) toeneemt (0-9 ms / cm), de scheutlengte van peper eerst toeneemt en vervolgens afneemt, met de beste prestaties verkregen bij 3 ms / cm12, 21. De geleidbaarheid van de zoutconcentratie in deze studie was 4,73 ms/cm wanneer de waarde van de hypocotyllengte van de zaailing en het versgewicht bovengronds het hoogst waren, wat hoger is dan de waarde gerapporteerd door Khan et al.21. Dit resultaat kan te wijten zijn aan de hoge tolerantie van peper bovengronds voor samengestelde zoutstress in vergelijking met enkelvoudige zoutspanning.
Zoutstress belemmert niet alleen de groei van gewassen, maar veroorzaakt ook aanzienlijke fysiologische veranderingen in planten. Zoutstress kan de niveaus van reactieve zuurstofsoorten (ROS) verhogen. Als ROS niet op tijd worden gewist, kunnen membraanlipideperoxidatie en oxidatieve stress, die ernstige schade aan het celmembraan van de plant kunnen veroorzaken, optreden. MDA is de laatste metaboliet van membraanlipideperoxidatie en intracellulaire MDA-concentratie wordt vaak gebruikt als indicator om de mate van schade aan planten onder stress te beoordelen22. In de huidige studie, naarmate de gemengde zoutconcentratie toeneemt, neemt het MDA-gehalte van de zaailingen van de twee variëteiten eerst af en neemt vervolgens toe. Opmerkelijk is dat de afname niet significant is bij zoutconcentraties variërend van 0-5 g / L. Er wordt echter een snelle toename waargenomen van 5-10 g / L. Daarna blijven de waarden ongewijzigd, wat aangeeft dat de mate van membraanlipideperoxide van peperzaden verandert van algemeen, naar snel toenemend, naar stabiel. Er wordt gespeculeerd dat zoutstress een ernstige impact heeft op de permeabiliteit van het celmembraan wanneer de gemengde zoutconcentratie hoger is dan 10 g / L. Guzmán-Murillo et al. rapporteerden een vergelijkbare conclusie van een afname en vervolgens een toename van het membraanlipideperoxideniveau in paprikazaailingen naarmate de NaCl-concentratie toenam (0-50 nmol / L). Verder was het niveau van lipideperoxidatie het laagst bij 25 nmol/L NaCl23.
Planten hebben verschillende strategieën ontwikkeld om met zoutstress om te gaan. Aan de ene kant verbeteren gewassen de eiwitstabiliteit en membraanintegriteit door osmotische aanpassingsstoffen, zoals proline, te verhogen en het verlies van intracellulair water te verminderen, waardoor de zouttolerantie wordt verbeterd24. In de huidige studie, naarmate de gemengde zoutconcentratie toeneemt, neemt het Pro-gehalte van Xinxiang 8- en Hongtianhu 101-zaailingen eerst af en neemt vervolgens toe. Met name is de afname niet significant bij concentraties van 0-3 g/L en is het verschil tussen de twee variëteiten niet significant, in lijn met de experimentele resultaten van Muchate et al25. Het Pro-gehalte van de Hongtianhu 101-pepervariëteit met een goede zouttolerantie neemt ook snel toe bij zoutconcentraties van 3-15 g / L. In vergelijking met 3 g / L neemt het Pro-gehalte van 15 g / L aanzienlijk toe met 440,2%, terwijl het Pro-gehalte van Xinxiang 8 met algemene zouttolerantie langzaam toeneemt en een relatief stabiel niveau handhaaft bij zoutconcentraties van 3-15 g / L. Het opruimeffect van de antioxidante enzymen op ROS geïnduceerd door zoutstress is het belangrijkste onderdeel gebleken van gewasafweermechanismen. Van de activiteiten van CAT, POD en SOD is gemeld dat ze toenemen onder verschillende zoutstressomgevingen, waardoor de zouttolerantie25,26 wordt verbeterd. Chen et al. toonden aan dat naarmate de NaCl-concentratie toeneemt, de activiteiten van SOD, POD en CAT in de kieming van tomatenzaad geleidelijk toenemen, zonder significant verschil in elke index na behandeling met 0-50 nmol / L NaCl27. Deze studie toont ook aan dat naarmate de gemengde zoutconcentratie toeneemt, de activiteiten van CAT, POD en SOD in de zaailingen van Hongtianhu 101 en Xinxiang 8 afnemen en vervolgens toenemen. Bij lage zoutconcentraties (0-3 g / L) verandert de activiteit van antioxidante enzymen niet significant en een verdere toename van de zoutconcentratie verbetert de zouttolerantie.
Het aanpassingsvermogen en de reactiekenmerken van gewassen op zoutstress komen voornamelijk tot uiting in morfologie, structuur, fysiologische ecologie, enz. Een uitgebreide evaluatie van samengestelde zoutstress wordt uitgevoerd met behulp van de lidmaatschapsfunctiewaardemethode voor meerdere eigenschappen. Deze studie toont aan dat naarmate de gemengde zoutconcentratie toeneemt, de totale gewogen waarde van de functiewaarde eerst toeneemt en vervolgens afneemt. De twee variëteiten bereiken een maximum van 5 g/L, wat leidt tot het beste zouttolerantie-effect. Vergeleken met de behandeling met 5 g/l dalen de gewogen waarden na behandeling met de zoutconcentraties van 3 g/l, 10 g/l en 15 g/l met respectievelijk 4,7%, 25,3% en 41,4% voor Hongtianhu 101 en 11,1%, 28,3% en 45,1% voor Xinxiang 8. Dergelijke bevindingen geven aan dat de zouttolerantie van Hongtianhu 101 hoger is dan die van Xinxiang 8.
Deze studie geeft een uitgebreide beschrijving van de effecten van verschillende concentraties van samengestelde zoutstress op de kieming van peperzaad en zijn fysiologische enzymactiviteiten, en een technische referentie voor onderzoek naar zouttolerantie in andere gewassen. Peperzaailingen worden minder beïnvloed door zoutstress onder gesimuleerde gemengde zoutconcentraties (0-5 g / L). Zaadkieming, radikelverlenging en morfogenese van peper van zaailingen worden aanzienlijk geremd onder hoge zoutstress (>5 g / L), waardoor ernstige membraanlipideperoxidatie in peperzaailingen ontstaat. Gewassen verminderen de nadelige effecten van zoutstress door hun Pro-gehalte te verhogen en de activiteit van beschermende enzymen (CAT, POD en SOD) te verbeteren. Onder zoutstress zijn het prolinegehalte en de beschermende enzymactiviteit van Hongtianhu 101-zaailingen hoger, de mate van membraanlipideperoxidatie is lager en zaadkieming en zaailinggroei zijn duidelijker dan die van Xinxiang 8.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs verklaren geen belangenconflicten.
Acknowledgments
Dit werk werd ondersteund door de afdeling Wetenschap en Technologie van de provincie Jiangxi (20203BBFL63065) en het General Project of Science and Technology Research Project van het Jiangxi Education Department (GJJ211430). We willen Editage (www.editage.cn) bedanken voor de Engelstalige redactie.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Calcium chloride | Shanghai Experiment Reagent Co., Ltd.,China | Analytical reagent | |
| Centrifugal machine | Shanghai Luxianyi Centrifuge Instrument Co., Ltd., China | TGL-16M | |
| Centrifuge tube | None | None | |
| Conductivity meter | Shanghai Instrument&Electronics Science Instrument Co., Ltd., China | DDSJ-308F | |
| Constant temperature and humidity box | Ningbo Laifu Technology Co., Ltd.,China | PSX-280H | |
| Digital display vernier caliper | Deli Group Co., Ltd.,China | DL90150 | |
| Electronic balance | Mettler Toledo Instruments (Shanghai) Co., Ltd.,China | ME802E/02 | |
| Filter paper | Hangzhou Fuyang North Wood Pulp and Paper Co., Ltd.,China | GB/T1914-2017 | |
| Grinding rod | None | None | |
| Hongtianhu 101 | Seminis Seed (Beijing) Co., Ltd.,China | 11933955/100147K1-137 | |
| Ice machine | Shanghai Kehuai Instrument Co., Ltd., China | IM150G | |
| Liquid nitrogen | None | None | |
| Magnesium chloride | Tianjin Kermel Chemical Reagent Co., Ltd.,China | Analytical reagent | |
| Magnesium sulfate | Tianjin Kermel Chemical Reagent Co., Ltd.,China | Analytical reagent | |
| Petri dish | Jiangsu Yizhe Teaching Instrument Co., Ltd.,China | I-000163 | |
| Pocket knife | None | None | |
| Potassium permanganate (KMnO4 | Xilong Scientific Co.,Ltd.,China | Analytical reagent | |
| Pure water equipment | Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd.,China | UPT-I-20T | |
| Sodium bicarbonate | Xilong Scientific Co.,Ltd.,China | Analytical reagent | |
| Sodium carbonate | Xilong Scientific Co.,Ltd.,China | Analytical reagent | |
| Sodium chloride | Xilong Scientific Co.,Ltd.,China | Analytical reagent | |
| Sodium sulfate | Xilong Scientific Co.,Ltd.,China | Analytical reagent | |
| Test kit | Suzhou Keming, Biotechnology Co., Ltd, Suzhou.,China | Spectrophotometer method | |
| Ultra-low temperature freezer | SANYO Techno Solution TottoriCo.,Ltd. | MDF-382 | |
| Ultraviolet visible spectrophotometer | Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., China | 760CRT | |
| Xinxiang 8 | Jiangxi Nongwang High Tech Co., Ltd.,China | GPD Pepper 2017(360013) |
References
- Szabolcs, I. Soils sand salinisation. Handbook of Plant and Crop Stress. , Marcel Dekker. New York. 3-11 (1994).
- Global network on integrated soil management for sustainable use of salt effected soils. FAO. , Available from: http://www.fao.org/ag/AGL/agll/spush/intro.htm (2005).
- Lakhdar, A., et al. Effectiveness of compost use in salt-affected soil. Journal of Hazardous Materials. 171 (1-3), 29-37 (2009).
- Cheng, Z., Chen, Y., Zhang, F. Effect of cropping systems after abandoned salinized farmland reclamation on soil bacterial communities in arid northwest China. Soil and Tillage Research. 187, 204-213 (2019).
- Shrivastava, P., Kumar, R. Soil salinity: A serious environmental issue and plant growth promoting bacteria as one of the tools for its alleviation. Saudi Journal of Biological Sciences. 22 (2), 123-131 (2015).
- Fattori, V., Hohmann, M. S., Rossaneis, A. C., Pinho-Ribeiro, F. A., Verri, W. A. Capsaicin: Current understanding of its mechanisms and therapy of pain and other pre-clinical and clinical uses. Molecules. 21 (7), 844-878 (2016).
- Zhao, Z., et al. Investigation, collection and identification of pepper germplasm resources in Guangxi. Journal of Plant Genetic .Resources. 21 (4), 908-913 (2020).
- Zhang, J., et al. Biochar alleviated the salt stress of induced saline paddy soil and improved the biochemical characteristics of rice seedlings differing in salt tolerance. Soil and Tillage Research. 195, 104372-104381 (2019).
- Ashraf, M., Foolad, M. R. Pre-sowing seed treatment-A shotgun approach to improve germination, plant growth, and crop yield under saline and non-saline conditions. Advances in Agronomy. 88, 223-271 (2005).
- Esra, K. O. Ç, Üstün, A. S., İşlek, C., Arici, Y. K. Effect of exogenously applied spermine and putrescine on germination and in vitro growth of pepper (Capsicum annuum l.) seeds under salt stress. Anadolu University Journal of Science and Technology C-Life Sciences and Biotechnology. 3 (2), 63-71 (2014).
- Demir, I., Mavi, K. Effect of salt and osmotic stresses on the germination of pepper seeds of different maturation stages. Brazilian Archives of Biology and Technology. 51 (5), 897-902 (2008).
- Khan, H. A., et al. Effect of seed priming with NaCl on salinity tolerance of hot pepper (Capsicum annuum L.) at seedling stage. Soil and Environment. 28 (1), 81-87 (2009).
- Zhou, L. L. Effects of salinity stress on cotton (Gossypium hirsutum L.) root growth and cotton field soil micro-ecology. Nanjing Agricultural University. , (2010).
- Ding, D. X., et al. Exogenous zeaxanthin alleviates low temperature combined with low light induced photosynthesis inhibition and oxidative stress in pepper (Capsicum annuum L.) plants. Current Issues in Molecular Biology. 44 (6), 2453-2471 (2022).
- Liu, Z. B., Yang, B. Z., Ou, L. J., Zou, X. X. The impact of different Ca2+ spraying period on alleviating pepper injury under the waterlogging stress. Acta Horticulturae Sinica. 42 (8), 1487-1494 (2015).
- Aloui, H., Souguir, M., Latique, S., Hannachi, C. Germination and growth in control and primed seeds of pepper as affected by salt stress. Cercetări agronomice în Moldova. 47 (3), 83-95 (2014).
- Zhani, K., Elouer, M. A., Aloui, H., Hannachi, C. Selection of a salt tolerant Tunisian cultivar of chili pepper (Capsicum frutescens). EurAsian Journal of Biosciences. 6, 47-59 (2012).
- Patanè, C., Saita, A., Sortino, O. Comparative effects of salt and water stress on seed germination and early embryo growth in two cultivars of sweet sorghum. Journal of Agronomy and Crop Science. 199 (1), 30-37 (2013).
- Smith, P. T., Cobb, B. G. Accelerated germination of pepper seed by priming with salt solutions and water. Hortscience. 26 (4), 417-419 (2019).
- Mirosavljević, M., et al. Maize germination parameters and early seedlings growth under different levels of salt stress. Ratarstvo i Povrtarstvo. 50 (1), 49-53 (2013).
- Khan, H. A., et al. Hormonal priming alleviates salt stress in hot pepper (Capsicum annuum L.). Soil and Environment. 28 (2), 130-135 (2009).
- Zhang, B. B., et al. Effects of simulated salinization on seed germination and physiological characteristics of muskmelon seedlings. Chinese Journal of Tropical Crops. 41 (5), 912-920 (2020).
- Guzmán-Murillo, M. A., Ascencio, F., Larrinaga-Mayoral, J. A. Germination and ROS detoxification in bell pepper (Capsicum annuum L.) under NaCl stress and treatment with microalgae extracts. Protoplasma. 250 (1), 33-42 (2013).
- Slama, I., Abdelly, C., Bouchereau, A., Flowers, T., Savoure, A. Diversity, distribution and roles of osmoprotective compounds accumulated in halophytes under abiotic stress. Annals of Botany. 115 (3), 433-447 (2015).
- Muchate, N. S., Nikalje, G. C., Rajurkar, N. S., Suprasanna, P., Nikamd, T. D. Physiological responses of the halophyte Sesuvium portulacastrum to salt stress and their relevance for saline soil bio-reclamation. Flora. 224, 96-105 (2016).
- Javed, S. A., et al. Can different salt formulations revert the depressing effect of salinity on maize by modulating plant biochemical attributes and activating stress regulators through improved N supply. Sustainability. 13 (14), 8022-8037 (2021).
- Chen, J., et al. Effects of salt stress on form of polyamine and antioxidation in germinating tomato seed. Acta Pedologica Sinica. 58 (6), 1598-1609 (2021).
