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Summary
Hier wird eine Headspace-Gaschromatographie-Tandem-Quadrupol-Massenspektrometrie-Methode (HS-GC-MS/MS) beschrieben, die für die Bestimmung von Trimethylamin (TMA) in tierischen Arzneimitteln geeignet ist. Das Protokoll umfasst die Vorbehandlung der Proben, die Headspace-Behandlung, die Analysebedingungen, die methodische Validierung und die Bestimmung der TMA in Arzneimitteln tierischen Ursprungs.
Abstract
Arzneimittel tierischen Ursprungs haben charakteristische Eigenschaften und signifikante heilende Wirkungen, aber die meisten von ihnen haben einen offensichtlichen Fischgeruch, was zu einer schlechten Compliance der klinischen Patienten führt. Trimethylamin (TMA) ist eine der wichtigsten Bestandteile des fischigen Geruchs in der tierischen Medizin. Es ist schwierig, TMA mit der bestehenden Nachweismethode genau zu identifizieren, da der erhöhte Druck im Headspace-Fläschchen durch die schnelle Säure-Base-Reaktion nach der Zugabe von Lauge verursacht wird, was dazu führt, dass TMA aus dem Headspace-Fläschchen entweicht und den Forschungsfortschritt des fischigen Geruchs von tierischen Arzneimitteln zum Stillstand bringt. In dieser Studie schlugen wir eine kontrollierte Nachweismethode vor, bei der eine Paraffinschicht als Isolationsschicht zwischen Säure und Lauge eingeführt wurde. Die Geschwindigkeit der TMA-Produktion konnte durch langsame Verflüssigung der Paraffinschicht durch thermostatische Ofenheizung effektiv gesteuert werden. Diese Methode zeigte zufriedenstellende Linearität, Präzisionsexperimente und Wiederfindungen mit guter Reproduzierbarkeit und hoher Empfindlichkeit. Sie leistete technische Unterstützung bei der Desodorierung von Arzneimitteln tierischen Ursprungs.
Introduction
Die Behandlung menschlicher Krankheiten durch die Verwendung von Produkten, die aus tierischen Teilen und/oder deren Nebenprodukten gewonnen werden (hier als Arzneimittel tierischen Ursprungs bezeichnet), erhält zunehmend Aufmerksamkeit. Sie spielen eine wichtige Rolle bei der Behandlung von Krebs, Herz-Kreislauf-Erkrankungen, Leberzirrhose, Mastitis und anderen Krankheiten, mit den Vorteilen einer starken Wirkung, einer geringen Dosierung und einer signifikanten und spezifischen klinischen Wirksamkeit. Tierische Arzneimittel haben jedoch im Allgemeinen einen ausgeprägten Fischgeruch, der die Compliance der Patienten stark beeinträchtigt und besonders für Kinder ungünstig ist 1,2. Der fischige Geruch kommt hauptsächlich von den Proteinen, Aminosäuren, Fetten und anderen Substanzen, die im Arzneimittel enthalten sind, die durch Fettsäureoxidation, Aminosäureabbau und andere Wege zersetzt werden, um eine Vielzahl von Substanzen mit einem fischigen Geruch zu produzieren 2,3,4. Unter ihnen ist Trimethylamin (TMA) ein flüchtiges Gas mit einem fischigen Geruch, das in verrottenden oder verdorbenen tierischen Lebensmitteln weit verbreitet ist5.
Bisher wurden Gaschromatographie (GC), Flüssigkeitschromatographie (LC), Ionenchromatographie, Spektrophotometrie, Flüssigkeitschromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS) und Sensormethoden verwendet, um TMA in der Umwelt, in Lebensmitteln und im Urin nachzuweisen 6,7,8,9. Angesichts der geringen Kontamination der GC-Säule und des Injektionssystems sowie der hohen Sensitivität, Reproduzierbarkeit und niedrigen Nachweisgrenze (0,1-1 mg/kg) wurde die Headspace-Gaschromatographie-Massenspektrometrie (HS-GC-MS) für die Lebensmittel- und biologische Analytik bevorzugt8. Derzeit hat nur China einen nationalen Standard für TMA in Lebensmitteln festgelegt, und HS-GC-MS ist die erste Methode in der Norm GB5009.179-201610. Daher wurde die oben beschriebene HS-GC-MS-Methode ausgewählt, um TMA in tierischen Arzneimitteln nachzuweisen. In einem frühen Stadium fand unsere Forschungsgruppe heraus, dass der HS-GC-MS-Nachweisstandard für TMA in Lebensmitteln den Fischgeruch in mehreren tierischen Arzneimitteln nachweisen kann. In Kombination mit den Ergebnissen der Studien11,12 konnte nachgewiesen werden, dass TMA die häufigste Schlüsselsubstanz des Fischgeruchs in tierischen Arzneimitteln ist. Es zeigte sich jedoch, dass die Reproduzierbarkeit der experimentellen Ergebnisse schlecht war und es Probleme wie TMA-Entweichen und schlechte Stabilität gab, die durch die Methodik nicht verifiziert werden konnten. Dies könnte darauf zurückzuführen sein, dass die Lauge in das Headspace-Fläschchen injiziert wurde und die schnelle Säure-Base-Reaktion zu einem erhöhten Druck im Fläschchen führte, wodurch TMA aus der Injektionspore entwich, was den stabilen und genauen Nachweis von TMA verhinderte. Daher wurde in dieser Studie eine verbesserte Detektionsmethode der Headspace-Gaschromatographie-Tandem-Quadrupol-Massenspektrometrie (HS-GC-MS/MS) vorgeschlagen, um diese Probleme anzugehen.
Das Protokoll verbessert die Probenvorbehandlung, indem die Säure-Base-Reaktanten in der Vorbehandlung mit Hilfe von festem Paraffin, einem guten Fest-Flüssig-Phasenwechselmaterial, getrennt werden. Als sich das Paraffin mit dem Temperaturanstieg des thermostatischen Ofens langsam verflüssigte, wurde TMA auch langsam in der versiegelten Headspace-Durchstechflasche freigesetzt, wodurch der durch die heftige und schnelle Säure-Base-Reaktion verursachte Druckanstieg vermieden und ein stabiler und genauer TMA-Nachweis gewährleistet wurde. Darüber hinaus unterdrückte die Headspace-Injektion in Kombination mit MRM-Modi (Multiple Reaction Monitoring) in GC-MS/MS effektiv chemische Interferenzen in der Matrix und stellte die Zuverlässigkeit der Ergebnisse sicher. Die Ergebnisse der methodischen Validierung zeigten, dass die Linearität, der Präzisionstest und die Wiederfindungsrate der verbesserten Detektionsmethode die Anforderungen mit guter Reproduzierbarkeit und hoher Empfindlichkeit erfüllen können.
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Protocol
Siehe Tabelle 1 für Informationen über die medizinischen Materialien von Pheretima, Periplaneta americana und Hirudo. Sie wurden von Prof. Xu Runchun von der Chengdu University of Traditional Chinese Medicine als die getrockneten Körper von Pheretima aspergillum (E.Perrier), Periplaneta americana L. und Whitmania pigra Whitman identifiziert.
1. Probenentnahme
- Zerkleinern Sie Pheretima, Periplaneta americana und Hirudo mit einem Kräutermahlwerk (siehe Materialtabelle), sieben Sie das medizinische Pulver durch die Standard-Medikamentensiebe Nr. 2 (Sieböffnung: 0,8 mm) und Nr. 4 (Sieböffnung: 0,25 mm) und sammeln Sie das Pulver zwischen den beiden Sieben, um das erforderliche Probenpulver zu erhalten.
HINWEIS: Die Pheretima ist nach dem Zerkleinern fluffig, so dass ihr Pulver nicht gesiebt werden muss. - Nehmen Sie 1 g Pulver (auf 0,001 g genau) in ein 50-ml-Kunststoffzentrifugenröhrchen, fügen Sie 20 ml 5%ige Trichloressigsäure (TCA)-Lösung hinzu (siehe Materialtabelle) und homogenisieren Sie bei 1.000 rmin-1 für 1 Minute mit einem Hochgeschwindigkeits-Dispersionshomogenisator.
- Nach der Homogenisierung wird bei 1.717 x g 5 min bei Raumtemperatur zentrifugiert, ein wenig saugfähige Watte in den Glastrichter gegeben und der Überstand in einen 50-ml-Messkolben filtriert.
- Wiederholen Sie den obigen Extraktionsvorgang zweimal mit 15 ml und 10 ml 5%iger TCA-Lösung. Kombinieren Sie das Filtrat und verdünnen Sie es auf 50 ml mit 5%iger TCA-Lösung.
2. Vorbereitung der Reagenzien
- 20%ige Natronlauge herstellen: 20 g Natronlauge abwiegen und mit deionisiertem Wasser das Volumen in einem 100-ml-Messkolben fixieren.
- 5%ige TCA-Lösung vorbereiten: 25 g TCA abwiegen und mit deionisiertem Wasser das Volumen in einem 500-ml-Messkolben fixieren.
3. Herstellung der TMA-Standardstammlösung
- Bereiten Sie TMA-Standardstammlösung vor: 0,0162 g TMA-Hydrochlorid-Standardprobe werden abgewogen, in 5%iger TCA-Lösung aufgelöst und das Volumen auf 100 ml festgelegt, was der Konzentration von 100 μg/ml TMA-Standardstammlösung entspricht. Bei 4 °C lagern.
- Bereiten Sie TMA-Standardlösung vor: Nehmen Sie ein bestimmtes Volumen TMA-Standardstammlösung und verdünnen Sie es Schritt für Schritt mit 5%iger TCA-Lösung auf Konzentrationen von 0,1 μg/ml, 0,5 μg/ml, 1 μg/ml, 2 μg/ml, 5 μg/ml und 10 μg/ml TMA-Standardlösung.
4. Headspace-Verarbeitung der Probe
- 2 ml Natronlauge und 0,5 g festes Paraffin (Schmelzpunkt: 58-60 °C) werden in einem 20-ml-Headspace-Fläschchen genau abgewogen (siehe Materialtabelle).
- Die Durchstechflasche mit Kopfraum für ca. 30 min bei 70 °C in den Ofen geben. Das feste Paraffin schmilzt vollständig.
- Nehmen Sie es heraus und lassen Sie es auf Raumtemperatur abkühlen, damit das Paraffin erstarrt. Das erstarrte Paraffin versiegelt Natriumhydroxid.
- Nehmen Sie 2 ml jeder Probenextraktionslösung und geben Sie sie auf die Paraffinschicht, drücken Sie die Kappe und versiegeln Sie.
- Legen Sie das versiegelte Headspace-Fläschchen zur Messung auf das Gerät (siehe Materialtabelle).
5. Einstellung der HS-GC-MS/MS-Analysebedingungen
- Siehe Tabelle 2 für Headspace-Bedingungen und GC-MS-Bedingungen.
- Siehe Tabelle 3 für Ioneninformationen.
6. Standard-Kurvenzeichnung
- Beziehen Sie sich auf die Headspace-Probenverarbeitung in den Schritten 4.1 bis 4.3, um das Headspace-Fläschchen mit Lauge und Paraffinversiegelung vorzubereiten.
- 2 ml 0,1 μg/ml, 0,5 μg/ml, 1 μg/ml, 2 μg/ml, 5 μg/ml und 10 μg/ml TMA-Standardlösung in eine 20-ml-Headspace-Durchstechflasche einatmen, die Kappe verschließen und auf dem Gerät messen.
7. Präzisionsprüfung
- Beziehen Sie sich auf die Proben-Headspace-Verarbeitung in den Schritten 4.1 bis 4.3, um das Headspace-Fläschchen mit Lauge und die Paraffinversiegelungsschicht vorzubereiten.
- 2 ml 0,1 μg/ml TMA-Standardlösung in ein 20-ml-Headspace-Fläschchen geben und die Kappe verschließen. Führen Sie sechs parallele Tests in der Maschine gemäß den Anweisungen des Herstellers durch (siehe Werkstofftabelle).
8. Experiment zur Wiederfindungsrate
- Man nehme eine Ladung Pheretima, Periplaneta Americana und Hirudo (S02, S05, S07; Tabelle 1) als repräsentative Arzneimittel für das Experiment zur Wiederfindungsrate.
- Nehmen Sie mehrere Chargen Probenpulver (S02, S05, S07) und backen Sie sie in einem Ofen bei 50 °C für 72 Stunden, bis kein TMA mehr nachgewiesen wird.
- Beziehen Sie sich auf die Probenvorbereitungsmethode in den Abschnitten 4-6, um den Gehalt an TMA in gebackenem Medizinpulver nachzuweisen.
- Nehmen Sie 1 g gebackenes Pulver (auf 0,001 g genau), geben Sie es in ein 50-ml-Zentrifugenröhrchen aus Kunststoff und fügen Sie 50 μl TMA-Standardlösung hinzu.
HINWEIS: Die Konzentration der TMA-Standardlösung beträgt 100 μg/ml, 1000 μg/ml und 10000 μg/ml. - 20 ml 5%ige TCA-Lösung zugeben und bei 1000 rmin-1 für 1 min homogenisieren.
- Nach der Homogenisierung wird bei 1717 x g 5 min zentrifugiert, etwas saugfähige Watte in den Glastrichter gegeben und der Überstand in einen 50-ml-Messkolben filtriert.
- Wiederholen Sie den obigen Extraktionsvorgang zweimal mit 15 ml und 10 ml 5%iger TCA-Lösung; Kombinieren Sie das Filtrat und verdünnen Sie es auf 50 ml mit 5%iger TCA-Lösung.
9. Bestimmung der Nachweisgrenzen (LOD) und Quantifizierung (LOQ)
- Bestimmen Sie die Detailgenauigkeit anhand der entsprechenden Konzentration, wenn das Signal-Rausch-Verhältnis (S/N) = 3 ist.
- Bestimmen Sie die LAQ durch die entsprechende Konzentration, wenn die S/N = 10 ist.
10. Bestimmung des TMA-Gehalts der Probe
- Nehmen Sie etwa 1 g feines Pulver von Pheretima, Periplaneta americana bzw. Hirudo, extrahieren Sie die Probe gemäß der obigen Methode und bestimmen Sie sie auf der Maschine.
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Representative Results
Schematische Diagramme des Vorverarbeitungsprinzips und der Funktionsweise dieses Protokolls sind in Abbildung 1 bzw. Abbildung 2 dargestellt. Die Peakzeit der TMA betrug 2,3 Minuten, mit einer scharfen Peakform und ohne Interferenzen durch andere Verunreinigungen (Abbildung 3). Bei der Messung des linearen Bereichs von 0,1-10 μg/ml TMA-Standardlösung mit der TMA-Konzentration als Abszisse und der Peakfläche als Ordinate wurde eine Standardkurve gezeichnet. Die lineare Regressionsgleichung wurde als y = 2522482x + 24255 erhalten, wobei der Korrelationskoeffizient (R2) = 0,9998 eine gute lineare Beziehung zeigt. Die LOD und LOQ wurden mit S/N = 3 bzw. S/N = 10 berechnet. Die LOD betrug 0,03 mg/kg und die LOQ 0,11 mg/kg. Um die Genauigkeit dieser Methode zu untersuchen, wurde der TMA-Gehalt (0,1 μg/ml) sechsmal parallel mit einer relativen Standardabweichung (RSD) von 5,84 % bestimmt, was die gute Präzision dieser Methode belegt. Eine Gruppe von Proben von Pheretima, Periplaneta americana und Hirudo wurde als repräsentative Proben für das Wiederfindungsexperiment ausgewählt (S02, S05, S07); Diese wurden durch Trocknen gespickten Wiederfindungstests unterzogen, um die TMA in den Kräutern zu reduzieren, und die durchschnittlichen Wiederfindungsraten betrugen 84,49 %, 94,66 % bzw. 85,67 %, wobei die Genauigkeit den Analyseanforderungen entsprach (Tabelle 4). TMA wurde in neun Chargen von Kräutern von Pheretima, Periplaneta Americana und Hirudo mit Konzentrationen im Bereich von 13,23-271,63 mg/kg nachgewiesen (Tabelle 5). Diese Protokollmethode hat gute methodische Validierungsergebnisse und hat auch den TMA-Gehalt in tierischen Arzneimitteln mit einem offensichtlichen Fischgeruch nachgewiesen.
Abbildung 1: Schematische Darstellung des Reaktionsprinzips der Laugen-Paraffin-Extraktionslösung. (1) 2 ml Natronlauge in einem 20-ml-Headspace-Fläschchen genau abwiegen. (2) 0,5 g festes Paraffin in die Durchstechflasche geben. (3) Erhitzen Sie das feste Paraffin, das mit Natronlauge geschichtet ist und über der Natronlauge schwimmt. (4) Nach dem Abkühlen verfestigt sich das Paraffin und dichtet sich fest über der Natronlauge ab. (5) Nehmen Sie 2 ml Probenextraktionslösung, geben Sie sie auf die Paraffinschicht, drücken Sie auf die Kappe und versiegeln Sie sie. (6) Stellen Sie die versiegelte Headspace-Durchstechflasche zur Messung auf das Gerät. Durch die Erwärmung des Thermostatofens schmilzt die Paraffinschicht, und die Säure-Base-Reaktanten oberhalb und unterhalb der Paraffinschicht reagieren in einer abgedichteten Umgebung zu TMA. Die Headspace-Bearbeitung der Probe erfolgt grob in den Abschnitten 1 bis 6. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Abbildung 2: Schematische Darstellung der Probenvorbehandlung. (A) Siegellauge: Schritt 4.1-4.3 im Protokoll. (B) Probenentnahme: Abschnitt 1 und Schritt 4.4 des Prüfplans. (C) TMA-Nachweis: Schritt 4.5 und Abschnitt 5 des Protokolls. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Abbildung 3: Gesamtionenchromatogramm der TMA. Spektrogramm von 1 μg/ml TMA-Standardlösung. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
| Stapel | Ursprung | |
| Pheretima | Nr. S01 | Leshan (Stadt), Provinz Sichuan |
| Pheretima | Nr. S02 | Dianbai (Stadt), Provinz Guangdong |
| Pheretima | Nr. S03 | Stadt Maoming, Provinz Guangdong |
| Periplaneta americana | Nr. S04 | Stadt Xichang, Autonome Präfektur Liangshan Yi, Provinz Sichuan |
| Periplaneta americana | Nr. S05 | Kreis Midu, Präfektur Dali, Provinz Yunnan |
| Periplaneta americana | Nr. S06 | Stadt Bozhou, Provinz Anhui |
| Hirudo | Nr. S07 | Weishan (Jining), Stadt in der Stadt Jining, Provinz Shandong |
| Hirudo | Nr. S08 | Stadt Kunshan, Provinz Jiangsu |
| Hirudo | Nr. S09 | Bezirk Laiwu, Stadt Jinan, Provinz Shandong |
Tabelle 1: Informationen zu tierischen Arzneimitteln.
| Headspace-Zustand | |
| Temperatur des Thermostatofens | 80 °C |
| Zeit für die Temperierung von Probe b | 30 min |
| Temperatur der Headspace-Nadel | 100 °C |
| Stichprobengröße | 1 ml |
| GC-MS-Bedingungen | |
| Chromatographische Säule | SH-flüchtiges Amin, 30 m×0,32 mm×5 μm |
| Programm für die Temperatur der Säule | 40 °C (0,5 min) _20 °C /min _200 °C (5 min) |
| Temperatur des Injektors | 200 °C |
| Trägergas-Kontrollmodus | konstante lineare Geschwindigkeit |
| Injektions-Modus | Split-Einspritzung |
| Split-Verhältnis | 10:01 |
| Spaltenfluss | 2 ml/min |
| Stichprobengröße | 1 ml |
| Ionisations-Modus | EI |
| Temperatur der Ionenquelle | 200 °C |
| Temperatur der GC-MS-Schnittstelle | 230 °C |
| Spannung des Detektors | Abstimmspannung +0,6 kV |
| Informationen zum Erfassungsmodus | MRM |
Tabelle 2: Headspace-Bedingungen und GC-MS/MS-Bedingungen.
| Zusammengesetzter Name | CAS | Verweilzeit (min) | Quantitatives Ion (m/z) | Unserer Zeitrechnung | Referenzion (m/z) | Unserer Zeitrechnung |
| Trimethylamin | 75-50-3 | 2.308 | 58>42 | 20 | 58>30 | 7 |
Tabelle 3: Informationen zur TMA-Verbindung.
| Probe | Probenkonzentration (mg/kg) | Stachelkonzentration (mg/kg) | Gemessene Konzentration (mg/kg) | Durchschnittliche Rückgewinnungsrate (%) | RSD (%) |
| Nr. S02 | 128.99 | 500.00 | 548.50 | 84.49 | 2.12% |
| Nr. S05 | 49.08 | 500.00 | 520.93 | 94.66 | 0.96% |
| Nr. S07 | 101.36 | 500.00 | 527.07 | 85.67 | 1.87% |
Tabelle 4: Ergebnisse des Experiments zur Wiederfindungsrate von TMA in Arzneimitteln tierischen Ursprungs.
| Probe | Probenkonzentration (mg/kg) |
| Nr. S01 | 88.11 |
| Nr. S02 | 137.34 |
| Nr. S03 | 18.63 |
| Nr. S04 | 19.10 |
| Nr. S05 | 40.50 |
| Nr. S06 | 13.23 |
| Nr. S07 | 271.63 |
| Nr. S08 | 69.73 |
| Nr. S09 | 67.70 |
Tabelle 5: Ergebnisse der Bestimmung der TMA-Konzentration in Arzneimitteln tierischen Ursprungs.
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Discussion
Arzneimittel tierischen Ursprungs stammen aus dem ganzen Körper, aus Organen oder Geweben, aus physiologischen oder pathologischen Produkten, aus Ausscheidungen oder Sekreten und aus verarbeiteten Produkten von Tieren. TMA ist eine wichtige Quelle für fischigen Geruch in Arzneimitteln tierischen Ursprungs. Es handelt sich um eine typische übelriechende Substanz mit einer sehr niedrigen Riechschwelle (0,000032 × 10-6 V/V) und einem starken Fischgeruch13. Derzeit kann die gängige HS-GC-MS-Methode TMA in tierischen Arzneimitteln nicht stabil und genau nachweisen.
Dieses Protokoll ist in mehreren Aspekten verbessert: (1) TMA ist polarer und alkalischer. In diesem Protokoll wird eine spezielle Säule für die Chromatographie flüchtiger Amingase ausgewählt, um TMA nachzuweisen, was die Genauigkeit und Empfindlichkeit des TMA-Nachweises gewährleistet. (2) Bei der Probenvorbereitung der HC-GC-MS-Methode in GB5009.179-2016 wird eine hochkonzentrierte Natronlauge in das versiegelte Headspace-Fläschchen10 injiziert. Zu diesem Zeitpunkt führt das Auftreten der Säure-Base-Reaktion zu einem Druckanstieg im Headspace-Fläschchen, was zum Austritt von TMA führen kann, was zu einem ungenauen Nachweis von TMA führt. Dieses Protokoll bezog sich auf die Nachweismethode von Schwefeldioxidrückständen in der traditionellen chinesischen Medizin14. Bei der Probenvorbehandlung wird festes Paraffin als Medium zur Isolierung von Säure-Base-Reaktanten verwendet. Nachdem das Headspace-Fläschchen versiegelt wurde, schmilzt das Paraffin langsam unter der Erwärmung des Thermostatofens, vermeidet die schwere Säure-Base-Reaktion und bietet eine gute luftdichte Umgebung für die TMA-Reaktion, wodurch die Stabilität und Genauigkeit des TMA-Nachweises gewährleistet wird. (3) Dieses Protokoll verwendet den MRM-Modus in GC-MS/MS für die Erfassung und optimiert die Detektionsparameter (Säulentemperaturprogramm usw.), um die analytische Effizienz und Genauigkeit zu gewährleisten.
Bei der Anwendung dieses Protokolls sind folgende Punkte zu beachten: (1) Es muss eine angemessene Menge an festem Paraffinwachs gewählt werden. Eine geringere Paraffindosierung führt zu einer unversiegelten Paraffinschicht und der sofortigen Reaktion von Säure-Basen-Reaktanten, was zur Bildung und zum Entweichen von TMA vor der Versiegelung führt. Eine höhere Paraffindosierung kann die Freisetzung, Anreicherung und den Nachweis von TMA behindern. (2) Die Stopfbuchse muss dicht und die Dichtung intakt sein. Darüber hinaus gibt es einige Einschränkungen des Protokolls. TMA in Arzneimitteln tierischen Ursprungs ist endogen und kann durch Trocknen nicht sauber entfernt werden. Im Wiederfindungsversuch wurde eine niedrige Konzentration von TMA-Hydrochlorid-Standardlösung verwendet, aber die Wirkung war unbefriedigend. Daher wurde für das Rückgewinnungsexperiment in diesem Protokoll nur die gleiche Konzentration der TMA-Hydrochlorid-Standardlösung ausgewählt.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass dieses Protokoll eine Methode zur Vorbehandlung von Proben und einen genauen Nachweis von TMA in Arzneimitteln tierischen Ursprungs bietet. Mit der Etablierung dieser Methode wurde die Lücke in der Nachweismethode von TMA in Arzneimitteln tierischen Ursprungs geschlossen und die Erforschung von fischigen Geruchsstoffen in Arzneimitteln tierischen Ursprungs technisch unterstützt, was für die Förderung der Forschung, Entwicklung und Anwendung von Arzneimitteln tierischen Ursprungs von großer Bedeutung ist.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts zu verraten.
Acknowledgments
Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse der National Natural Science Foundation of China (82173991) und des Sichuan Science and Technology Program (2022YFS0442) unterstützt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Centrifuge | Beckman Coulter Trading (China) Co. | SSC-2-0213 | |
| Chinese herbal medicine grinder | Zhejiang Yongkang Xi'an Hardware and Pharmaceutical Factory | HX-200K | |
| Convection oven | Sanyo Electric Co., Ltd | MOV-112F | |
| Decapper for 20 mm Aluminum caps | ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc | V1750004 | |
| Electronic balance | Shimadzu Corporation Japan | AUW220D | |
| Gas chromatography mass spectrometry | Shimadzu Corporation Japan | TQ-8050 NX | |
| Headspace Vial | ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc | 25760200 | |
| Homogenizer | Shanghai biaomo Factory | FJ200-SH | |
| Preassembled Cap | ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc | L4150050 | |
| Sample sieve | Zhenxing Sieve Factory | / | |
| SH-Volatile Amine | Chengdu Meimelte Technology Co., Ltd | 227-3626-01 | |
| Sodium hydroxide | Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd | 2022101401 | |
| Solid paraffin wax | Shanghai Hualing Kangfu apparatus factory | 20221112 | |
| Trichloroacetic acid | Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd | 2022102001 | |
| Trimethylamine hydrochloride | Chengdu Aifa Biotechnology Co., Ltd | AF22022108 | |
| Ultra-pure water system | Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd | UPR-11-5T |
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Chemie Ausgabe 193 Tierarzneimittel Trimethylamin Fischgeruch Headspace-Gaschromatographie-Tandem-Quadrupol-MassenspektrometrieErratum
Formal Correction: Erratum: An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry
Posted by JoVE Editors on 11/28/2023.
Citeable Link.
An erratum was issued for: An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry. The Authors section was updated from:
Hui Ye1
Xuemei Liu1
Haozhou Huang2
Lin Huang1
Yang Bao1
Hongyan Ma1
Junzhi Lin3
Xiaoming Bao4
Dingkun Zhang1
Runchun Xu1
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
2Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
3TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
4Shimadzu (China) Co., Ltd
to:
Hui Ye1
Xuemei Liu1
JiaBao Liao2
Haozhou Huang3
Lin Huang1
Yang Bao1
Hongyan Ma1
Junzhi Lin4
Xiaoming Bao5
Dingkun Zhang1
Runchun Xu1
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
2China Resources Sanjiu Modern Chinese Medicine Pharmaceutical Co., Ltd
3Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
4TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
5Shimadzu (China) Co., Ltd
