Summary
Aquí, describimos un método de cría manual para criar crías de tití en una incubadora de animales. Este método aumenta en gran medida la tasa de supervivencia de las crías de tití, lo que brinda la oportunidad de estudiar el desarrollo de las crías de tití con antecedentes genéticos similares criados en diferentes entornos postnatales.
Abstract
El tití común (Callithrix jacchus) es un mono pequeño y altamente social del Nuevo Mundo con altas tasas de reproducción, que ha demostrado ser un modelo de primate no humano convincente para la investigación biomédica y neurocientífica. Algunas hembras dan a luz trillizos; sin embargo, los padres no pueden criarlos a todos. Para salvar a estas crías, hemos desarrollado un método de crianza manual para criar titíes recién nacidos. En este protocolo, describimos la fórmula del alimento, el tiempo de alimentación, la configuración de la temperatura y la humedad, así como la adaptación de las crías criadas a mano al ambiente de la colonia. Este método de cría manual aumenta significativamente la tasa de supervivencia de las crías de tití (sin cría manual: 45%; con cría manual: 86%) y brinda la oportunidad de estudiar el desarrollo de las crías de tití con antecedentes genéticos similares criados en diferentes entornos postnatales. Como el método es práctico y fácil de usar, anticipamos que también podría aplicarse a otros laboratorios que trabajen con titíes comunes.
Introduction
El tití común (Callithrix jacchus) es un mono pequeño y arbóreo del Nuevo Mundo originario de América del Sur y Central. El uso de titíes en la investigación biomédica ha crecido rápidamente en las últimas décadas debido a varias ventajas clave de los titíes en comparación con otros primates no humanos (PNH), incluyendo su menor tamaño corporal, su fácil manejo y reproducción en cautiverio, un tiempo de gestación más corto, una maduración sexual más temprana y menores riesgos zoonóticos 1,2,3,4,5,6 . El tití común tiene una estructura cerebral y una función cerebral similares a las de los humanos y muestra un rico repertorio de vocalizaciones y un comportamiento altamente social con emociones ricas. Es un modelo NHP convincente para diferentes tipos de estudios de neurociencia, como estudios sobre procesamiento sensorial 7,8,9,10,11,12,13,14, comunicación vocal 15,16,17,18,19, modelos de lesión medular 20,21,22,23, enfermedad de Parkinson 24,25,26,27,28 y enfermedades relacionadas con la edad 29. En comparación con otros PNH, el tití común tiene una tasa de reproducción relativamente alta, lo que es potencialmente útil para la modificación transgénica30,31,32. Este primate también es ampliamente utilizado en farmacología, angiografía y estudios de patógenos e inmunológicos 33,34,35,36,37,38,39. Sin embargo, el suministro de titíes sigue siendo muy limitado, especialmente en China, y no puede satisfacer las necesidades cada vez mayores de la investigación científica.
En las colonias de titíes, los animales adultos son alimentados una o dos veces al día, y algunas instituciones alteran la dieta de los titíes juveniles40. Por lo general, los titíes bebés suelen agarrarse firmemente al cuerpo del padre o de los hermanos mayores para su cuidado diario y se entregan a la madre varias veces al día para obtener leche. Algunos titíes hembra dan a luz trillizos, y en este caso, una o dos crías no pueden sobrevivir debido a la falta de leche; Además, algunos padres no cuidan de sus bebés porque carecen de experiencia en enfermería o por otras razones desconocidas. Esta es una gran pérdida para muchos laboratorios. Algunos estudios han reportado métodos de manejo nutricional para titíes adultos en cautiverio 40,41,42 utilizando alimentos y fórmulas con diferentes composiciones de macronutrientes, vitaminas y minerales, así como diferentes protocolos de alimentación para el enriquecimiento (puré, gelificado, purificado o enlatado)2,41. Un estudio anterior informó de un método de cría colaborativa para trillizos tití43, en el que los cuidadores toman una cría al día, la alimentan a mano durante todo el día y la intercambian por otra de las trillizas al día siguiente. Aunque este método permite que los bebés tengan el cuidado de los padres, requiere que un cuidador experimentado tome al bebé del cuerpo de los padres todos los días y requiere mucha mano de obra. Hasta el momento, ningún estudio ha informado de un método detallado de cría manual paso a paso para los titíes recién nacidos.
El objetivo del presente estudio es proporcionar un método de cría manual para aquellos interesados en el desarrollo de titíes, pero con recursos limitados. A diferencia del método anterior de crianza colaborativa43, el método actual es una alternativa que causa menos perturbaciones a la familia del bebé y es fácil de aprender. Basado en las reglas básicas de la lactancia materna y 5 años de práctica, este artículo describe un método de cría manual para la cría de titíes que incluye la preparación del alimento, un horario de alimentación, la configuración de la temperatura y la humedad de la incubadora de animales, así como la adaptación de los animales bebés al entorno de la colonia.
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Protocol
Todos los procedimientos experimentales fueron aprobados por el Comité de Uso y Cuidado de Animales de la Universidad de Zhejiang y siguieron las pautas de los Institutos Nacionales de Salud (NIH).
1. Vivienda y ganadería44
- Ajuste la sala de la colonia con un ciclo día/noche de 12 h: 12 h, la temperatura a 26-28 °C y la humedad relativa al 45%-55%.
- Emparejar titíes machos y hembras de 2 a 6 años de edad, y mantenerlos en jaulas (850 mm x 800 mm x 800 mm) con suficiente espacio y aire fresco con un sistema de ventilación de 24 horas.
- Proporcione tablas de descanso, columpios, perchas y hamacas en las jaulas.
- Alimente a la pareja de titíes con agua fresca y 30-40 g de comida dos veces al día, incluidos cereales, huevos, batatas, miel, frutas, verduras y gusanos de la harina.
NOTA: Los veterinarios y experimentadores deben inspeccionar las instalaciones de animales al menos una vez al día para asegurarse de que cualquier persona enferma sea diagnosticada y tratada de inmediato.
2. Preparación antes del nacimiento de las crías de tití
- Cuidados de los titíes preñados
NOTA: El momento de la concepción se diagnosticó por palpación (típicamente 10-20 días después del inicio del período embrionario), y también nos referimos a la historia reproductiva de los sujetos animales.- Proporcionar un espacio más grande y una mínima molestia humana para las parejas reproductoras.
- Alimente a las parejas reproductoras con alimentos adicionales como gusanos de la harina, huevos, yogur y frutos secos para garantizar la nutrición de las hembras.
- Cuide y revise con frecuencia a los titíes preñados para prepararlos para su parto.
NOTA: Se estima que el período de gestación del tití es de 148 días ± 4,3 días45.
- Prepare los siguientes artículos: una incubadora de animales (855 mm [ancho] x 470 mm [largo] x 440 mm [alto]), almohadillas desechables para pañales (tamaños M/L), toallitas húmedas para bebés, juguetes de peluche (Figura 1A), rodillos de juguete (Figura 1B), estructuras para trepar (Figura 1B), mantas (10 cm х 10 cm, Figura 1C) y una báscula electrónica (precisión de 0,2 g, Figura 1F).
NOTA: Para evitar que los animales se cuelguen, los juguetes de peluche no deben tener estructuras de bucle. - Preparación de alimentos y aparatos de alimentación
- Prepare los siguientes artículos: fórmula para bebés (adecuada para 0-12 meses de edad), pasta de arroz para bebés (adecuada para 0-6 meses de edad), hervidor de agua eléctrico, vaso de precipitados (100 ml), almohadilla térmica, plato de pesaje de plástico (80 mm x 80 mm x 22 mm, Figura 1D), tubos de centrífuga estériles (50 ml), jeringas estériles desechables (1-5 ml), inyectores intravenosos (para tetinas de alimentación hechas a medida) (Figura 1E), e hisopos (80-100 cm).
NOTA: Para hacer una tetina para la alimentación, se hace un corte a 1 cm del extremo de un inyector intravenoso conectado a una jeringa (Figura 1E).
- Prepare los siguientes artículos: fórmula para bebés (adecuada para 0-12 meses de edad), pasta de arroz para bebés (adecuada para 0-6 meses de edad), hervidor de agua eléctrico, vaso de precipitados (100 ml), almohadilla térmica, plato de pesaje de plástico (80 mm x 80 mm x 22 mm, Figura 1D), tubos de centrífuga estériles (50 ml), jeringas estériles desechables (1-5 ml), inyectores intravenosos (para tetinas de alimentación hechas a medida) (Figura 1E), e hisopos (80-100 cm).
- Preparación del formulario de grabación
- Prepare un formulario, generalmente de varias páginas, para cada tití bebé para registrar información básica como el nombre, la fecha de nacimiento, el peso al nacer, los padres, otra información básica de interés como la circunferencia de la cabeza y la longitud de la cola, información sobre la reproducción como la fecha y hora de reproducción, la cantidad (mL) de la ingesta de alimentos, el estado de defecación (sí/no, duro/suelto), y la temperatura y humedad de la incubadora.
NOTA: Por lo general, el peso corporal se mide y registra dos veces al día, una antes de la primera comida y otra antes de la última comida.
- Prepare un formulario, generalmente de varias páginas, para cada tití bebé para registrar información básica como el nombre, la fecha de nacimiento, el peso al nacer, los padres, otra información básica de interés como la circunferencia de la cabeza y la longitud de la cola, información sobre la reproducción como la fecha y hora de reproducción, la cantidad (mL) de la ingesta de alimentos, el estado de defecación (sí/no, duro/suelto), y la temperatura y humedad de la incubadora.
Figura 1: Fotos de los artículos en la incubadora y las herramientas y accesorios de alimentación. (A) Juguetes de peluche; (B) rodillo de juguete y estructuras de escalada; (C) manta; (D) plato de pesaje de plástico; (E) inyector intravenoso y jeringa con una tetina de alimentación hecha a medida; (F) balanza electrónica; (G) cuidador con equipo de protección personal. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
3. Procedimiento de cría manual
- Limpie y esterilice la habitación antes de la fecha de parto.
- Rocíe ácido hipocloroso o alcohol etílico al 75% sobre el piso y la mesa, déjelo actuar durante 30 segundos y luego limpie la mesa y trapee el piso.
- Ajuste la temperatura de la incubadora a 35 °C y la humedad al 40%. Por lo general, para simular el requerimiento básico de temperatura de los titíes bebés, como se muestra en la Tabla 1 , antes del día postnatal 14 (P14), mantenga la temperatura de la incubadora a 35 °C y, a partir de P15, baje la temperatura en 0,5 °C cada 3 días. Mantenga la humedad entre el 40% y el 45% dentro de la incubadora, que está cerca de la humedad de la colonia y mantiene seco el pelaje de los bebés.
- Coloque una almohadilla de pañal desechable para cubrir el chasis de la incubadora.
- Para minimizar el estrés de los bebés, coloque un par de mantas y juguetes de peluche en la incubadora antes de introducir a los titíes bebés, que tienden a imitar a los titíes adultos.
NOTA: Las mantas y los juguetes de peluche se colocan en la jaula casera de las parejas reproductoras durante 1 día antes de su uso. - Coloque a los titíes bebés en la incubadora y colóquelos en los juguetes de peluche una vez que estén separados de sus padres en la jaula de la casa.
NOTA: Para evitar el aislamiento social y de acuerdo con el bienestar animal, generalmente, se eligen dos bebés juntos para la crianza manual.- Use equipo de protección personal esterilizado (EPP, Figura 1G) antes de alimentarlo.
- Calentar un par de mantas a 35 °C.
- Sostenga suavemente al tití bebé con mantas calientes y obtenga el peso del animal como peso al nacer.
- Transfiera el tití bebé a la incubadora con mantas calientes.
- Tome registros, como se menciona en el paso 2.4.
- Licúa los ingredientes de los alimentos y alimenta al tití bebé.
- Disolver 5 g de leche de fórmula para bebés en 30 ml de agua hervida a 50 °C en un tubo de centrífuga estéril de 50 ml.
NOTA: Los titíes bebés en diferentes edades postnatales necesitan diferentes recetas de alimentos. La Tabla 2 incluye las diferentes dosis de fórmula para bebés, pasta de arroz y agua en edades postnatales de P1 a P60. La dosis suele ser suficiente para 1 día. Licúa los ingredientes antes de la primera comida y guarda el resto de los alimentos en una nevera a 4 °C. Calentar los alimentos a 30-35 °C en cada comida. - Tome 1 ml de alimento con una jeringa de 1 ml y tape la jeringa con una tetina de alimentación hecha a medida.
NOTA: Seleccione una jeringa del tamaño adecuado, consultando la Tabla 2. - Mantenga la temperatura de los alimentos a 30-35 °C con la almohadilla térmica.
- Caliente las manos antes de alimentarlo y sostenga suavemente al tití bebé con una manta tibia en una mano en la incubadora.
- Coloque la tetina de alimentación en la boca del tití bebé mientras la cabeza del tití bebé se sostiene suavemente con el pulgar y el índice de la mano de agarre del cuidador, y empuje lentamente la comida fuera de la jeringa a una velocidad constante.
NOTA: Nunca empuje la comida más rápido de lo que traga el tití bebé. Empujar rápido puede causar asfixia, con comida saliendo por la nariz a través de la garganta. Esto puede causar enfermedades como la neumonía, que incluso puede llevar a la muerte. Si la comida se desborda, el tití bebé tendrá dificultades. Siempre que esto ocurra, deje de alimentarlo y limpie la comida de la cara del animal con cuidado. Continúe alimentándose después de que el tití comience a comportarse normalmente.
- Disolver 5 g de leche de fórmula para bebés en 30 ml de agua hervida a 50 °C en un tubo de centrífuga estéril de 50 ml.
- Después de que el tití bebé consuma una cantidad adecuada de comida, limpie su ano con un hisopo con agua tibia, que limpia el ano y promueve la defecación.
- Observe al animal durante unos minutos y verifique la locomoción y la defecación del animal.
- Registre el tiempo de alimentación, la cantidad (mL) de la ingesta de alimentos, el estado de defecación (sí/no, duro/suelto) y la temperatura y humedad de la incubadora.
NOTA: Envuelva al tití bebé con mantas calientes durante el pesaje para evitar que el bebé se enfríe o se lastime. - Mantenga limpio el chasis de la incubadora recogiendo heces sólidas o cambiándolo por una nueva almohadilla desechable.
- Antes de P50, alimente al tití bebé siguiendo los pasos 3.3-3.7 y utilice la dosis de ingredientes alimentarios y el tiempo y la frecuencia de alimentación que se muestran en la Tabla 2.
- A partir de los 50 años, el tití infantil suele estar listo para la alimentación voluntaria.
- Use platos de plástico para pesar en lugar de jeringas. Prepare la comida mezclando los ingredientes de los alimentos directamente en el plato; consulte la Tabla 2 para conocer los montos.
- Coloque el plato de comida en la incubadora y fije el fondo en caso de que se le dé la vuelta. Observe durante unos minutos para asegurarse de que los titíes bebés coman la comida. Durante las primeras veces, guíe al animal para que coma voluntariamente atrayéndolo al plato de comida y guiando su boca para que toque la comida varias veces.
NOTA: Nunca deje que la nariz del animal toque la comida. Por lo general, el animal aprende a comer voluntariamente en 1 día.
4. Aclimatación antes del regreso de los titíes bebés a la colonia
NOTA: Por lo general, la crianza manual termina cuando los titíes bebés aprenden a comer por sí mismos. Hay algunos procedimientos de adaptación que deben llevarse a cabo antes de devolverlos a la jaula doméstica en la colonia de titíes.
- Mueva los titíes bebés de la incubadora de animales a jaulas pequeñas (45 cm x 45 cm x 40 cm), que son similares a una jaula de pájaros. Cuelga una botella de agua (50 ml) en cada jaula pequeña.
- Transfiera las jaulas pequeñas con los titíes bebés a la colonia y colóquelas cerca de la jaula familiar.
- Alimentar a los titíes bebés por separado con un plato de pesaje de plástico durante 1 semana, mezclando la comida de acuerdo con las recetas diarias preparadas para toda la colonia.
- Haga un registro del peso corporal y el estado de defecación una vez al día.
5. Cachorros de tití que regresan a la jaula familiar
NOTA: Después de vivir en la jaula pequeña durante 7-10 días, los titíes bebés generalmente se adaptan bien al entorno de la colonia y no muestran más ansiedad.
- Vuelva a colocar a los titíes bebés en la jaula familiar por la mañana.
- Observe a los animales durante al menos 15 minutos para asegurarse de que no haya mordiscos, peleas o persecuciones entre los miembros de la familia y los recién llegados.
NOTA: Si se muerde, pelea o persigue, separe al bebé de los demás lo antes posible; y trate de devolver al bebé a su familia una vez más otro día. Si el fracaso vuelve a ocurrir, seleccione otra familia para que lo fomente. Los grupos familiares que tienen una rica experiencia en la crianza de los hijos son la primera opción para la acogida. Coloque un juguete de peluche en una jaula nueva para acompañar al mono bebé si ninguna familia lo acepta. - Deje de alimentar a los titíes bebés por separado y comience a alimentarlos usando la dieta de la colonia.
- Preste mucha atención a la actividad de los titíes bebés durante 1 semana después de que regresen a la jaula familiar.
- Mida el peso corporal de los titíes bebés cada 2 días y haga un registro. Si pierden peso, aliméntelos con alimentos nutritivos adicionales con una jeringa en la jaula familiar.
- Proporcionar cuidados diarios a los titíes bebés, al igual que a los titíes de la colonia.
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Representative Results
El peso corporal es un índice clave del desarrollo corporal de los animales y se utiliza como indicador del estado de salud de los titíes en este protocolo. En este trabajo, los pesos corporales de los animales criados a mano aumentaron gradualmente con la edad (Figura 2A, n = 16), similar a los pesos de los recién nacidos en un estudio previo46. Para minimizar la perturbación a las familias reproductoras de la colonia, no pesamos a los titíes bebés de la colonia todos los días. Obtuvimos los pesos de los animales criados por los padres 1 mes después del nacimiento y más tarde, y se compararon con los pesos de los bebés criados a mano a las mismas edades. No hubo diferencias significativas en el peso corporal entre los bebés criados por los padres y los criados a mano (P30, grupo criado a mano, 52,25 g ± 2,10 g, n = 18; grupo colonia, 57,34 g ± 2,77 g, n = 7; t = −1,3417, P = 0,1928; P60, grupo de cría manual, 91,76 g ± 3,44 g, grupo colonia, 93,06 g ± 4,68 g; t= −0,2019, p = 0,8424; Prueba t de Student) (Figura 2B).
Figura 2: Peso corporal de los titíes criados a mano y de los criados por sus padres en la colonia . (A) El peso corporal de cada bebé criado a mano. Las líneas grises indican el peso corporal individual y la curva naranja indica el promedio de la población. (B) Comparación de los pesos corporales entre los bebés criados a mano (naranja) y los bebés criados por los padres (verde) en P30 y P60. Los círculos grises representan individuos. Los datos se muestran como media ± SEM. ns indica que no hay diferencias significativas. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Tabla 1. Configuración de la temperatura en la incubadora de animales. Haga clic aquí para descargar esta tabla.
Tabla 2: Recetas de alimentación. Las columnas debajo de "ingredientes alimentarios" indican la receta de leche para 1 día. Por ejemplo, en los días postnatales 1-14, mezclamos 5 g de leche en polvo para bebés y 30 ml de agua antes de la primera comida y tomamos 0,5-1,5 ml de esta leche cada vez para la alimentación. Las dosis de "leche en polvo para bebés" y "pasta de arroz" son para las formas en polvo. Haga clic aquí para descargar esta tabla.
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Discussion
El tití común es un modelo de PNH muy útil para la investigación biomédica y neurocientífica. Sin embargo, los recursos de tití son demasiado limitados para satisfacer las necesidades en rápido crecimiento. En este trabajo, hemos desarrollado un método de crianza manual que no solo aumenta la tasa de supervivencia de las crías de tití, sino que también brinda la oportunidad de estudiar su desarrollo postnatal. Este método de cría manual es práctico y fácil de aprender y, por lo tanto, es fácilmente aplicable a otros laboratorios que trabajan con titíes comunes.
Algunos defectos congénitos suelen desarrollarse en las primeras 2 semanas de vida. Hasta ahora, hemos identificado varios casos de titíes recién nacidos con defectos innatos en el párpado, el pulmón, el intestino y el cerebro, y rara vez sobreviven hasta P14. Por lo tanto, P1-14 es un período crítico para la detección de titíes recién nacidos sanos que pueden criarse mediante el método de cría manual. Además, si los titíes bebés se desprenden del cuerpo de sus padres debido a negligencia o falta de leche, no pueden sobrevivir. Por lo tanto, el método de crianza manual ayuda a salvar sus vidas. En este trabajo, sin la cría manual, la tasa de supervivencia fue del 45% (n = 13/29), y aumentó al 86% (n = 25/29) después de aplicar el método de la cría manual.
Hay varios puntos críticos a tener en cuenta. Los cuidadores deben ser pacientes durante la alimentación; Empujar la jeringa demasiado rápido no es bueno, ya que no permite que los titíes bebés traguen, lo que puede provocar asfixia o íleo y, por lo tanto, perjudicar el sistema respiratorio o el sistema digestivo de los animales. Los cuidadores deben ser amables y silenciosos durante la alimentación para minimizar el estrés de los animales bebés, ya que el estrés podría afectar significativamente el microbioma intestinal y se asocia con diarrea crónica en titíes47,48. Durante la cría manual, todas las personas que se acerquen a los titíes bebés tienen que comportarse con delicadeza en todo momento. A veces, al abrir la puerta de la incubadora a toda prisa, se producen sonidos fuertes y repentinos, que pueden asustar a los bebés y provocar una reacción de estrés.
El peso corporal de los animales debe controlarse todos los días, ya que el peso corporal es un indicador clave del estado de salud de un animal. La subalimentación, la sobrealimentación, la desnutrición o la dispepsia pueden detectarse rápidamente por un cambio en el peso corporal. Se ha informado previamente que los titíes con bajo peso corporal son más propensos a enfermedades óseas y gastrointestinales concurrentes49. En general, el peso corporal de los titíes se mantuvo constante en la etapa P1-5 y aumentó gradualmente en 1-4 g por día cuando se utilizó el método de crianza manual. A partir de P5, si no se observa un aumento o una pérdida gradual de peso corporal a lo largo de 2 días, los cuidadores deben estar alerta y comprobar los ingredientes de los alimentos, así como la temperatura corporal y el estado de excreción de los animales. Es útil agregar probióticos en este caso.
No es necesario alimentar a los animales durante la noche. Intentamos alimentar a los titíes bebés cada 2 a 4 horas durante todo el día y descubrimos que no promovía el crecimiento de los titíes bebés (datos no mostrados). La falta de ejercicio físico adecuado o la sobrealimentación podrían inducir síndromes metabólicos, como la obesidad, que se ha relacionado con dislipidemia, alteración del metabolismo de la glucosa y resistencia a la insulina en titíes50,51,52. Los bebés deben mantenerse calientes durante la alimentación y el pesaje, especialmente en los primeros días después del nacimiento. Descubrimos que un bebé tenía diarrea después de resfriarse; La diarrea debilita rápidamente la vitalidad del animal y reduce el peso corporal.
La fuerza de agarre y la temperatura corporal son los principales indicadores del estado de salud de los titíes bebés, y deben controlarse cuidadosamente. Cada vez que se alimenta a un tití bebé, se agarra a la manta o al dedo del comedero. La fuerza de agarre suele debilitarse cuando el animal tiene diarrea. Una vez que esto sucede, se deben agregar probióticos del tamaño de un guisante a la comida y alimentar al bebé afectado durante 3 días hasta que la diarrea desaparezca. Si la diarrea dura más de 3 días, se debe agregar montmorillonita en polvo en lugar de probióticos. Por el contrario, si el bebé está estreñido, se debe limpiar suavemente el ano con un hisopo humedecido en agua tibia para promover la defecación, y se debe usar lactulosa si es necesario. Además, la temperatura corporal del tití infantil suele ser más alta que la de los humanos. Si la temperatura del animal es más baja de lo normal, lo que a menudo se asocia con una fuerza de agarre debilitada, el comportamiento del animal debe ser monitoreado de cerca y la alimentación debe ajustarse en consecuencia.
Cuando los titíes bebés comiencen a trepar, se les debe proporcionar estructuras de escalada y rodillos de juguete en la incubadora bajo la supervisión del criador. A partir de P25, los animales pueden practicar la escalada antes y después de cada comida. A los 50 años, los titíes bebés pueden trepar y saltar bien, y esto es un requisito previo para comer voluntariamente. A los titíes bebés les gusta rechinar los dientes mordiendo mantas, juguetes de peluche o almohadillas desechables para pañales, pero estos pueden formar pequeños bucles que amenazan sus vidas debido a la autoestrangulación. Por lo tanto, las piezas rotas y el hilo deben limpiarse rápidamente para evitar lesiones o muertes.
A veces, el procedimiento de alimentación puede modificarse ligeramente debido a diferencias en el apetito, la vitalidad y las condiciones ambientales. Si un tití bebé es lo suficientemente fuerte, probablemente comenzará a practicar la escalada antes de P25, aprenderá a comer voluntariamente antes de P50 e incluso regresará a la familia antes de P60. Mientras tanto, bajamos la temperatura en 0,5 °C en la incubadora todos los días o cada 2 días para que el tití bebé pueda adaptarse a la misma temperatura que en la colonia antes de volver a la jaula. Si un tití bebé tiene poco apetito durante un cierto período, se debe proporcionar menos comida por comida, pero con una frecuencia más alta por día, y la incubadora debe mantenerse más caliente que la colonia durante más tiempo. En el presente estudio, el 88,9% (n = 16/18) de los bebés fueron aceptados con éxito por los padres biológicos, el 11,1% (n = 2/18) fueron acogidos por otras familias y ninguno fue rechazado.
El estudio de titíes juveniles con diferentes estructuras familiares revela diferencias en su desarrollo social y mental; De hecho, las interacciones sociales entre padres e hijos y entre pares durante el desarrollo pueden esculpir la función cerebral social53,54,55. Por lo tanto, el hecho de que se seleccionen uno o dos animales para la cría manual depende de los objetivos del experimento. Nuestro laboratorio generalmente cría a mano a dos bebés, si es posible, para satisfacer las demandas de bienestar animal y ayudar a que más bebés sobrevivan. El método de cría colaborativa para trillizostití 43 también es una buena opción. Los titíes criados a mano con interacciones parentales limitadas pueden no ser adecuados para experimentos para el estudio del comportamiento social.
En conclusión, el método de cría manual en el presente estudio proporciona instrucciones sobre cómo alimentar a los titíes bebés de P1 a P60. Con este protocolo, un criador experimentado tarda ~15 minutos en alimentar manualmente a un tití bebé. El éxito de la operación depende de múltiples factores, como la temperatura adecuada de los alimentos y del entorno, el tiempo y la técnica de alimentación, y la excreción de los animales después de las comidas. Este método es factible y fácil de aprender. Se ha optimizado continuamente con 5 años de práctica. Este método puede aplicarse a otros laboratorios que trabajen con titíes comunes.
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Disclosures
Los autores no tienen conflictos de intereses que revelar.
Acknowledgments
Los autores desean agradecer a Mingxuan Li por su edición de la gramática y el pulido de la primera versión de este manuscrito. Este trabajo contó con el apoyo de la Fundación de Ciencias Naturales de la Provincia de Zhejiang de China (LD22H090003); la Fundación de Ciencias Naturales de China (32170991 y 32071097), los proyectos STI2030 grandes 2021ZD0204100 (2021ZD0204101) y 2022ZD0205000 (2022ZD0205003); y el Centro de Ciencias de Frontera para la Ciencia del Cerebro y la Integración Cerebro-Máquina del Ministerio de Educación de la Universidad de Zhejiang.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| animal incubator | RCOM, Korea | MX - BL600N, 855 mm (W) x 470 mm (L) x 440 mm (H) | |
| baby milk powder | Meadjohnson, America | suitable for 0-12 months of age, executive standard - GB25596 | |
| baby rice paste | HEINZ, China | suitable for 0-6 months of age, executive standard - GB10769 | |
| baby wipes | babycare, China | soft | |
| beaker | ShuNiu, China | 100 mL | |
| blankets | Grace, China | 10 cm × 10 cm, soft | |
| climbing frame | WowWee, China | firm and no small circular structures | |
| disposable diaper pads | Hi Health Pet, China | either M or L size | |
| disposable sterile syringe | Cofoe, China | 1 mL, 2.5 mL, 3 mL, 5 mL, 10 mL | |
| electronic scale | YouSheng, China | measuring range from 0 to 6,000 g with precision of 0.2 g | |
| intravenous injector | HD, China | 0.55 mm x 20 mm needle | |
| kettle | FGA, China | warm-keeping kettle 1,500 mL | |
| lactulose | BELCOL, China | to solve constipation | |
| plastic weighing dish | SKSLAB, China | 80 mm x 80 mm x 22 mm, used as a bowl | |
| plush toy | Lebiyou, China | soft | |
| probiotic powder | G-Pet, China | to regulate gastrointestinal environment | |
| sterile centrifuge tube | NEST, China | 50 mL | |
| swab | OYEAH, China | 80 - 100 mm | |
| toy roller | WowWee, China | firm and no small circular structures |
References
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