Drosophila Disección de glándulas accesorios masculinas: un método para aislar las células secundarias

- Bajo un microscopio de disección y en medios sueros complementados, retire el tracto reproductivo de cada mosca con fórceps. Primero, retire partes del tracto digestivo que puedan haber acompañado el aparato reproductivo. Para aislar las glándulas accesorias y el conducto eyaculativo, retire los testículos, el bulbo eyaculatorio y la terminalia.

Para exponer las células dentro de las glándulas a la solución de disociación, sostenga el centro de cada glándula con fórceps y corte a través de la glándula con un par de fórceps afilados. Retire la porción proximal de la glándula y el conducto eyaculatorio para dejar atrás el extremo distal de las glándulas que contienen la rara población celular secundaria responsable de secretar las proteínas involucradas en el apareamiento. Finalmente, transferir las puntas de la glándula accesorio a un tubo de micro centrífuga en preparación para la digestión.

- Antes de comenzar el procedimiento, cortar y llamar alrededor, puntas anchas de 200 microlitros para el manejo de las glándulas, y pasar la abertura de la punta de múltiples puntas de 1000 microlitro cerca de una llama durante menos de un segundo para estrechar las aberturas. Entonces, ordenar las puntas modificadas de más estrecha a más amplia en función de su velocidad de aspiración. Para la disección de la glándula accesorio, colocar 20 a 25 drosophila macho en un plato de vidrio sobre hielo y utilizar fórceps y un microscopio de disección para eliminar el tracto reproductivo de una mosca masculina.

Despeje el par de glándulas accesorios de todos los demás tejidos, incluidos los testículos y la bombilla eyaculatoria, y transferir las glándulas accesorios a una placa de vidrio que contiene medio suero suplementado a temperatura ambiente. Cuando se hayan recogido 20 pares de glándulas accesorias, lave las glándulas en un plato de PBS durante uno o dos minutos a temperatura ambiente. Al final del lavado, transfiera las glándulas a una solución de disociación recién preparada y utilice fórceps afilados bajo un microscopio diseccionador para pellizcar firmemente el medio de un lóbulo glandular.

Usando un segundo par de fórceps, corta el tejido con la punta afilada para separar la región proximal de la glándula accesorio y el conducto eyaculatorio de la porción de la glándula que contiene células secundarias.