Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- For å orientere en larve for filet disseksjon, plasser den i en silikonbelagt tallerken som inneholder kald saltvann og identifiser dorsale og ventrale sider. Trakeal rør som går langs lengden markerer dorsalsiden, mens abdominal denticle belter identifiserer ventral side.
Deretter, med ventralsiden opp, strekk forsiktig larven og fest hver ende til bunnen av parabolen. Denne posisjonen vil holde dorsale klynger av sensoriske multi-dendritiske nevroner og de tilhørende epidermale cellene intakte når disseksjonen fortsetter.
Bruk dissekeringssaks for å kutte langs larvens ventrale midtlinje. Fest kutiklen til platen for å flate ut preparatet og fjern interne strukturer for å avsløre det underliggende muskelvevet. Deretter fjerner du forsiktig den aktuelle muskelen for å eksponere epidermis og få tilgang til tidligere skjulte nevroner samtidig som de bevarer sin dendrittiske morfologi.
I eksempelprotokollen vil vi se en detaljert demonstrasjon av larvalfiletpreparat og muskelfjerning for å se sensoriske da nevroner og epidermale celler.
- Til å begynne med, legg til nok kald saltvann til en silikonelastomerfat for å dekke bunnoverflaten. Tilsett motivet larve til parabolen og legg den under stereomikroskopet, og sørg for riktig plassering av lys. Plasser larven med ventralsiden opp, som kan identifiseres av magesekkbeltene.
Strekk larven i den fremre bakre retningen, og bruk insektpinner, fest hodet og halen til bunnen av parabolen. Med et par fine dissekeringssaks, kutt langs larvens ventrale midtlinje fra den ene enden til den andre. Spred larven åpen og fest kutikulært vev i de fire hjørnene slik at den ligger flatt.
Bruk tang, fjern de indre organene, inkludert CNS, tarm og luftrør. Juster insektpinnene slik at fileten er stram, men ikke maksimalt strukket.
Finn larvens dorsale midtlinje, hvor muskelvevet er fraværende og plasser deretter en tang på innsiden av denne grensen. Skyv pinnen mellom muskelen og epidermis, pass på å minimere kontakten med epidermis.
- For å minimere skade på epidermis, disseker med flatest mulig pinner. Og prøv å dissekere i kalsiumholdig saltvann. Det kan bidra til å skape plass mellom muskelen og epidermis.
- Trekk deretter tangene oppover for å bryte muskelfestet til kroppsveggen på ett ankerpunkt. Gjenta denne prosessen for de resterende muskelsegmentene av interesse.
Juster insektpennene for å strekke larvefilet maksimalt i alle retninger.
