Preparación de filetes larvarios: Un método para visualizar neuronas sensoriales intactas y células epidérmicas asociadas

- Orientar una larva para la disección del filete, colocarla en un plato recubierto de silicona que contenga solución salina fría e identificar sus lados dorsales y ventrales.

Luego, con el lado ventral hacia arriba, estirar suavemente la larva y fijar cada extremo a la parte inferior del plato. Esta posición mantendrá intactos los racimos dorsales de las neuronas sensoriales multi-dendríticas y las células epidérmicas asociadas intactas a medida que avanza la disección.

Utilice tijeras diseccionar para cortar a lo largo de la línea media ventral de la larva. Ancle la cutícula a la placa para aplanar la preparación y eliminar las estructuras internas para revelar el tejido muscular subyacente.

En el protocolo de ejemplo, veremos una demostración detallada de preparación de filetes larvarios y eliminación muscular para ver las neuronas sensoriales y las células epidérmicas.

- Para empezar, añadir suficiente solución salina fría a un plato de elastómero de silicona para cubrir la superficie inferior. Agregue la larva del sujeto al plato y colóquela debajo del microscopio estéreo, asegurando la colocación adecuada de la luz.

Estirar la larva en la dirección anterior-posterior, y usando alfileres de insectos, fijar la cabeza y la cola hasta el fondo del plato. Con un par de tijeras diseccionantes finas, cortar a lo largo de la línea media ventral de la larva de un extremo a otro. Extender la larva abierta y fijar el tejido cutícula en las cuatro esquinas para que se quede plana.

Usando fórceps, retire los órganos internos, incluyendo el SNC, el intestino y la tráquea. Ajuste los pasadores de insectos para que el filete esté tenso, pero no estirado al máximo.

Localice la línea media dorsal de la larva, donde el tejido muscular está ausente y luego coloque una fórceps en el interior de este límite.

- Minimizar el daño a la epidermis, diseccionar con las puntas más planas posibles. y tratar de diseccionar en solución salina que contiene calcio.

- A continuación, tire de los fórceps hacia arriba para romper el apego del músculo a la pared del cuerpo en un punto de anclaje. Repita este proceso para los segmentos musculares restantes de interés.

Reajuste las plumas de insectos para estirar al máximo el filete larvario en todas las direcciones.