Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- För att mäta den genomsnittliga livslängden för en nematodpopulation, börja med utvecklingssynkronerade L1-larver i M9-buffert. Bestäm larvernas densitet och tillsätt sedan 50 till varje platta. Förbered minst tre replikatplattor per villkor, samt reservplattor.
Låt dessa maskar utvecklas normalt tills de når L4-stadiet. Nu kan du lägga till FUdR till plattorna, vilket förhindrar att maskarna producerar avkomma. Alternativt måste du flytta maskarna till nya plattor varje dag efter räkningen, för att säkerställa att du bara mäter livslängden för en enda generation.
Ta sedan bort alla hanar. Detta kommer att ta bort variablerna för sex och parning från experimentet.
- Ladda de beredda bakteriesådda plattorna med 50 L1 djur vardera. Ställ in plattorna i en 20 grader Celsius inkubator tills embryona utvecklas till L4-stadiet. Normal utveckling från L1 till L4 tar cirka 40 timmar.
För att förhindra avkommaproduktion, tillsätt sedan 160 mikroliter 50x FUdR till varje tallrik. Sedan ta bort hanarna, eftersom livslängden vanligtvis mäts endast med hermafroditer. När den är klar, packa om plattorna i 20 grader Celsius inkubator.
Tills alla maskar är döda, poäng deras livskraft dagligen.
