Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Pour mesurer la durée de vie moyenne d’une population de nématodes, commencez par les larves L1 synchronisées sur le plan développemental dans le tampon M9. Déterminez la densité des larves, puis ajoutez-en 50 à chaque plaque. Préparez au moins trois plaques de répétition par condition, ainsi que des plaques de secours.
Permettez à ces vers de se développer normalement jusqu’à ce qu’ils atteignent le stade L4. Maintenant, vous pouvez ajouter FUdR aux plaques, ce qui empêchera les vers de produire des descendances. Alternativement, vous devrez déplacer les vers de nouvelles plaques chaque jour après le comptage, pour vous assurer que vous ne mesurez que la durée de vie d’une seule génération.
Ensuite, retirez tous les mâles. Cela éliminera les variables du sexe et de l’accouplement de l’expérience. Le lendemain, comptez le nombre de vers vivants dans l’assiette en recherchant un mouvement spontané ou une réponse au toucher doux. Enlevez tous les vers morts et enregistrez les nombres. Comptez les vers survivants quotidiennement jusqu’à ce qu’il n’y en ait pas. Dans le protocole de l’exemple, nous verrons une démonstration d’un essai de durée de vie.
- Chargez les plaques préparées ensemencées par des bactéries avec 50 animaux L1 chacun. Installez les plaques dans un incubateur de 20 degrés Celsius jusqu’à ce que les embryons se développent au stade L4. Le développement normal de L1 à L4 prend environ 40 heures.
Ensuite, pour empêcher la production de descendance, ajouter 160 microlitres de 50 x FUdR à chaque plaque. Puis retirer les mâles, car la durée de vie n’est généralement mesurée qu’avec des hermaphrodites. Une fois terminée, reconditionner les plaques dans l’incubateur de 20 degrés Celsius.
Jusqu’à ce que tous les vers soient morts, notez leur viabilité au quotidien. Pour ce faire, touchez doucement chaque nématode non mobile sur la tête avec un fil de platine ou un cil. Les animaux non réactifs sont morts et doivent être retirés de la plaque. Prenez note de toute anomalie au cours de cette routine.
