Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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-要测量线虫种群的平均寿命,请从 M9缓冲区中发育同步的 L1幼虫开始。确定幼虫的密度,然后向每个板添加50 个。 每个条件至少准备三个复制板,以及备用板。
允许这些蠕虫正常发育,直到它们达到L4阶段。 现在,您可以将 FUdR 添加到板中,这将防止蠕虫产生后代。 或者,您还需要在计数后每天将蠕虫移动到新板,以确保您仅测量一代人的寿命。
接下来,去除任何雄性。 这将从实验中去除性与交配的变量。 第二天,通过寻找自发运动或对温柔触摸的反应来计算盘子中活蠕虫的数量。取出任何死蠕虫并记录数字。 每天计算幸存的蠕虫,直到没有蠕虫存活。 在示例协议中,我们将看到寿命分析的演示。
- 将准备好的细菌种子板装载到每个50只 L1动物中。将板子设置在20摄氏度的孵化器中,直到胚胎发育到 L4 阶段。从 L1到L4 的正常发育大约需要 40 小时。
然后,为了防止后代生产,在每个盘子中加入160微升的50倍FUdR,然后去除雄性,因为寿命通常只用草药来测量。完成后,将盘子重新包装到20摄氏度的孵化器中。
直到所有的蠕虫都死了,每天评分它们的生存能力。 为此,请用铂线或睫毛轻轻触摸头部上每一个未移动的线虫。非反应性动物死亡,必须从盘子中取出。 注意此例程中的任何异常情况。