Encyclopedia of Experiments: Biology
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- C. elegans si muove su un fianco generando onde sinusoidali lungo il suo corpo. L'animale si muove in avanti quando le onde si propagano dalla testa alla coda. In senso inverso, quando le onde sinusoidali si propagano dalla coda alla testa, il verme si muove all'indietro.
La locomozione all'indietro, nota come inversioni, è breve e si verifica spontaneamente o è innescata da uno stimolo sensoriale, ad esempio un tocco delicato alla parte anteriore del verme. Per eseguire il saggio di assuazione del tatto anteriore, isolare i vermi precedentemente sincronizzati dello stadio di sviluppo desiderato su piastre NGM non semiseed.
Utilizzando un capello fine sterilizzato, eseguire un tocco delicato alla parte anteriore del corpo. Ciò genererà una risposta di fuga in cui il verme esegue un'inversione. Consentire a un intervallo di interstimolo di 10 secondi per il verme di recuperare e ripetere il tocco. Per valutare l'assunzione, che è una forma di apprendimento non associativo, registrare il numero di tocchi fino a quando non viene più osservata un'inversione.
Nel protocollo di esempio, vedremo una dimostrazione del saggio di assuazione del tocco anteriore.
- In primo luogo, l'uso di un piccone di filo di platino sterile a 30 gauge per trasferire circa 10 vermi adulti sincronizzati in nuove piastre NGM non sezionate. Lasciare i vermi indisturbati per cinque minuti per consentire loro il tempo di acclimatarsi alla nuova piastra. Quindi sterilizzare un capello attaccato alla fine di uno spiedino di legno o uno stuzzicadenti immergersi nel 70% di etanolo.
Pulire con un tessuto pulito e privo di pelucchi e attendere un minuto prima che l'etanolo evapori. Toccare delicatamente il verme sulla testa usando i peli del sopracciglio. Ripetere i tocchi consentendo 10 secondi tra un tocco e l'altro per consentire al verme di riprendersi.
Continuare a toccare consentendo intervalli di interstimolo di 10 secondi fino a quando il worm non si sposta più all'indietro. Registrare il numero di tocchi necessari per l'assueazione.
- Consentire un intervallo di 10 secondi tra i tocchi è importante, in quanto ciò consente il tempo di recupero degli animali e aiuta a ottenere test coerenti sul comportamento di assuazione.
