Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- C. elegans move-se de lado gerando ondas sinusoidais ao longo de seu corpo. O animal se move em direção oposta quando as ondas são propagadas da cabeça para a cauda.
A locomoção retrógrada, conhecida como reversões, é breve e ocorre espontaneamente ou é desencadeada por um estímulo sensorial, por exemplo, um toque suave ao anterior do verme. Para realizar o ensaio de habitação de toque anterior, isole vermes previamente sincronizados do estágio de desenvolvimento desejado em placas de NGM não semeadas.
Usando um cabelo fino esterilizado, realize um toque suave na parte anterior do corpo. Isso provocará uma resposta de fuga onde o verme realiza uma reversão. Permita um intervalo interestimuloso de 10 segundos para que o verme se recupere e repita o toque. Para avaliar a habitação, que é uma forma de aprendizado não associativo, regise o número de toques até que uma reversão não seja mais observada.
No protocolo de exemplo, veremos uma demonstração do ensaio de habitação de toque anterior.
- Primeiro, o uso de um fio de platina de calibre 30 de fogo para transferir aproximadamente 10 vermes adultos sincronizados para novas placas de NGM não semeadas. Deixe os vermes imperturbáveis por cinco minutos para lhes dar tempo de aclimatação à nova placa. Em seguida, esterilize um pelos de sobrancelha presos à extremidade de um espeto de madeira ou palito de dente mergulhando em 70% de etanol.
Limpe com um tecido limpo e sem fiapos e espere por um minuto para que o etanol evapore. Toque suavemente o verme na cabeça usando o cabelo da sobrancelha. Repita os toques permitindo 10 segundos entre os toques para permitir que o verme se recupere.
Continue tocando permitindo intervalos interestimulosos de 10 segundos até que o worm não se mova mais para trás. Registo o número de toques necessários para que essa habitação ocorra.
- Permitir um intervalo de 10 segundos entre os toques é importante, pois isso permite o tempo de recuperação animal e ajuda a obter ensaios consistentes de comportamento de habitação.
