The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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Children's Hospital, Harvard Stem Cell Institute, Harvard Medical School
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LeBlanc, J., Venezia Bowman, T., Zon, L. Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (2), e159, doi:10.3791/159 (2007).
Las células madre hematopoyéticas (HSC) es una rara población de células pluripotentes que mantienen todos los linajes de sangre diferenciados a lo largo de la vida de un organismo. La definición funcional de un HSC es una célula trasplantada que tiene la capacidad de reconstituir todos los linajes de sangre de un receptor a largo plazo irradiados. Esta designación fue establecido por décadas de trabajo pionero en sistemas de mamíferos. Al usar el trasplante de células hematopoyéticas (HCT) y revertir la manipulación genética en ratones, los factores reguladores de la biología HSC están empezando a ser desvelado, pero siguen siendo en gran parte bajo explorado. Recientemente, el pez cebra se ha convertido en un poderoso modelo genético para estudiar la hematopoyesis vertebrados. El establecimiento de HCT en el pez cebra permitirá a los científicos utilizar las metodologías de detección a gran escala genéticos y químicos disponibles en el pez cebra para revelar nuevos mecanismos subyacentes regulación de HSC. En este artículo se demuestra un método para llevar a cabo HCT en el pez cebra adulto. Se muestra la disección y preparación de la médula del pez cebra riñón entero, el sitio de la hematopoyesis de adultos en el pez cebra, y la introducción de estas células del donante en la circulación de los peces receptores irradiados a través de la inyección intracardíaca. Además, se describen los cuidados post-trasplante de peces en una "unidad de cuidados intensivos" para aumentar su salud a largo plazo. En general la atención y suave de los peces antes, durante y después del trasplante es fundamental para aumentar el número de peces que sobreviven más de un mes después del procedimiento, que es esencial para la evaluación de largo plazo (<3 meses) el injerto. Los datos experimentales utilizados para establecer este protocolo será publicado en otra parte. El establecimiento de este protocolo permitirá la fusión de gran escala genética del pez cebra y la biología del trasplante.
Irradiación
La disección del riñón
Extracción de sangre periférica
Inyección
UCI pescado - después de la inyección
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