نحن هنا وصف أساليب الكهربية لقياس انتقال متشابك عند تقاطع العصبية والعضلية لليرقة ذبابة الفاكهة. أثار إطلاق سراح يبدأ بشكل مصطنع من خلال تحفيز الخلايا العصبية الحركية المحاور ، ويمكن قياسها من خلال انتقال NMJ التي أثارت استجابة بعد المشبكي في العضلات.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الكهربية طرق تسجيل الإمكانيات متشابك من يرقات ذبابة الفاكهة من NMJ
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
في هذا الفيديو ، ونحن تصف الأساليب الكهربية لتسجيل انتقال متشابك عند تقاطع العصبية والعضلية (NMJ) من يرقات ذبابة الفاكهة. الجهاز العصبي العضلي اليرقات هو المشبك نموذج لدراسة علم وظائف الأعضاء متشابك والعصبي ، ويشكل أداة للبحث القيم الذي عرف علم الوراثة ، ويمكن الوصول إلى التلاعب التجريبية. يمكن تشريح اليرقات لفضح الجدار العضلي الجسم والجهاز العصبي المركزي والأعصاب الطرفية. تتميز عضلات ذبابة الفاكهة ونمطها تعصيب العضلات بشكل جيد ويسهل الوصول لتسجيل داخل الخلايا. يمكن التعرف على العضلات الفردية عن طريق موقعهم والتوجيه داخل البطن 8 قطاعات ، ولكل منها 30 مرتبة في عضلات نمطا يتكرر في قطاعات A2 -- A7. يمكن تشريح ذبابة الفاكهة اليرقات عضلات رقيقة والفردية وحزم من المحاور العصبية المحركة التي يمكن تصور تضوء
البروتوكول
قبل البدء في التحضير :
- تجول yhird يرقات ذبابة الفاكهة طور مرحلي
- HL3.1 (التعديل الدملمف الشبيهة) حل
- لوحات Sylgard تشريح (شفاف المطاط سيليكون) الذي أعد في الصغيرة (35 × 10 ملم) أطباق بتري البلاستيكية باستخدام الأساليب التي وصفها برنت ومكابي (2008) 3.
- دبابيس قطع تشريح قصيرة
- ماصات تحفيز كهربائي
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وصفت وسائل هنا توفر طريقة سريعة نسبيا واسعة للكشف عن تغيرات في وظيفة متشابك في NMJ. القدرة على أداء التسجيلات الكهربية باستخدام حيوانات سليمة في الجسم الحي ، وتأدية معالجات وراثية أو دوائية ، وجعل ذبابة الفاكهة نموذجا مثاليا للحيوان التحقيق في الجوانب الفسيولوجية والجينية لالعصبي.
منذ خلايا عضلة كبيرة جدا ، قد يفضل البعض إضافة إلى خطوة إضافية لهذا البروتوكول لمدة تسجيل الجهد الكهربائي (TEVC) المشبك. ويمكن تنفيذ ه.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أطباق بتري صغيرة (35 × 10 مم) | BD Biosciences | 1008 | |
| طقم بوليمر السيليكون المرن SYLGARD 182 | Dow Corning | 3097366-1004 | |
| مجهر تشريحي | Carl Zeiss, Inc. | 475002-9902 | |
| إضاءة المجهر | Schott AG | KLI500 | |
| دبابيس التشريح | فاين ساينس تولز (Fine Science Tools) | 26002-10 | |
| برنامج pClamp 9 | Molecular Devices | PCLAMP 9 STANDARD | |
| مقصات التشريح: مقصات فاناس الزنبركية 3 مم | Fine Science Tools | 15000-0 | |
| ملقط Dumont SS | Fine Science Tools | 11200-33 | |
| ملقط دومونت رقم 5 (Dumont #5 Forceps) | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| أنابيب شعرية من زجاج البوروسيليكات رقيقة الجدران، مع فتيلة (1.0 ملم، 4 بوصات) | World Precision Instruments, Inc. | TW100F-4 | |
| أنابيب شعرية من زجاج البوروسيليكات، مع فتيلة (1.2 مم، 4 بوصات) | World Precision Instruments, Inc. | 1B120F-4 | |
| جهاز سحب الماصات الدقيقة المعتمد على الليزر Sutter P-2000 | شركة Sutter Instrument Co. | طراز P-2000 | |
| جهاز صقل الماصات | ناريشيغي إنترناشيونال (Narishige International) | MF-83 | |
| وحدة الرأس Axon HS-2A | Molecular Devices | طراز HS-2A | |
| أجهزة التلاعب الدقيق | شركة Sutter Instrument Co. | MP-85 | |
| مضخم Axoclamp 2B | موليكولار ديفايسز (Molecular Devices) | AXOCLAMP 2B | |
| برمجيات Clampex | Molecular Devices | v 8.2.0.235 | |
| برنامج التحليل المصغر. الإصدار 6.0.3 | سينابتوسوفت (Synaptosoft) | ||
| مضخم براونلي الدقيق (Brownlee Precision Amplifier) | براونلي | طراز 410 | |
| NaCl | Baker/VWR | 4058-01 | |
| KCl | Sigma-Aldrich | p-9333 | |
| NaHCO₃3 | Sigma-Aldrich | s6297-1كجم | |
| تري هالوز | Sigma-Aldrich | TO167 | |
| السكروز | Fisher Scientific | bp220-212 | |
| هيبس (HEPES) | Sigma-Aldrich | h-3375 | |
| MgCl₂·6H₂O2أو | Sigma-Aldrich | m2670-1kg | |
| CaCl₂2 | Fisher Scientific | c79-500 | |
| مولد نبضات Master-8 | A.M.P.I | ||
| طاولة اهتزاز لإعدادات الفسيولوجيا الكهربائية | شركة التصنيع الفني (Technical Manufacturing Corp.) | ||
| قفص فاراداي |
المراجع
- Atwood, H. L., Govind, C. K., Wu, C. F. Differential ultrastructure of synaptic terminals on ventral longitudinal abdominal muscles in Drosophila larvae. J. Neurobiol. 24 (8), 1008-1024 (1993).
- Feng, Y., Ueda, A., Wu, C. F.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
