في هذه المقالة عن طريق الفيديو نقدم مظاهرة خطوة بخطوة حول كيفية جمع البويضات وcryopreserve الهامستر مع ارتفاع معدلات البقاء على قيد الحياة بعد ذوبان الجليد. يمكن أيضا أن يطبق نفس الإجراء لتجميد والذوبان بنجاح أجنة فئران في مراحل مختلفة من التطور سابق للانغراس.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
جمع والحفظ بالتبريد من البويضات والأجنة الهامستر ماوس
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وكانت أول أجنة البويضات cryopreserved بنجاح أكثر من 30 عاما مضت ، عندما يتنغهام
البروتوكول
أجريت رعاية الحيوان والإجراءات وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وافقت عليها لجنة الأخلاقيات في بحوث الحيوان والإنسان في جامعة برشلونة المستقلة ، إسبانيا.
أولا جمع سيت
- وحدد الاختيار الهامستر الإناث (Mesocricetus auratus ؛ 12/08 الاسبوع القديمة) من سلالة السوري الذهبي عن وجود إفرازات مهبلية سميكة (التفريغ بعد الإباضي).
- حمل الإناث المحدد إلى superovulate عن طريق الحقن داخل الصفاق من 40 وحدة دولية من PMSG (ماري الحامل مصل....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يمكن أن يكون هذا مع البويضات والأجنة الهامستر بروتوكول الماوس cryopreserved بنجاح. المجمدة مرة واحدة ، يمكن تخزين البويضات / الأجنة في النيتروجين السائل الدبابات إلى أجل غير مسمى وتسترد في أي زمان أو مكان المطلوب. هذا يوفر ميزة وجود عينات جاهزة تقريبا لاستخدام كلما دعت الحاجة. من ناحية أخرى ، يمكن أيضا أن تستخدم هذا البروتوكول لتوليد cryobanks الجنين من سلالات قيمة الماوس (مثل خطوط المعدلة وراثيا) ، كبديل أكثر أمنا واقتصادا في الحفاظ على مستعمرات الحيوانات الحية. ومن المهم أن نلاحظ أن هذا البروتوكول ه.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من قبل MINISTERIO Ciencia الاسبانية دي ذ Educación (BIO 2006-11792) وكتالونيا دي كاتالونيا (2005 SGR00437). وأود أن أشكر كتاب مارك لوكاس Jonatan Puigcerver ولما قدموه من مساعدة فنية في إعداد وسائل الإعلام. ومن المسلم به جميع الموظفين من Estabulari ديفوار Servei للإسكان الحيوانات ، وخصوصا خوان خوسيه مارتن وخافيير بنيتو لمساهمتهم إضافية حول تسجيل جزء من هذا الفيديو. البنك الأهلي التجاري هو زميل في الفقرة قرينتها البرتغالية ه Ciência بحوث والتكنولوجيا وسان جرمان هو زميل إسباني MINISTERIO دي Educación Ciencia ذ.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات | |
|---|---|---|---|---|
| اسم المادة | النوع | الشركة | رقم الكتالوج | ملاحظة |
| قشة صغيرة من النوع الفرنسي 0.25 ml | Mini-tub | 13407/0010 | ||
| hCG | Farma-Lepori, Spain | 749036.4 | ||
| Hyaluronidase | Sigma | H-3884 | ||
| وسط KSOM-H medium | مرجع [11] | |||
| نيتروجين سائل | Air Liquide | |||
| سدادات بلاستيكية | Mini-tub | 19046 | ||
| PMSG | Intervet, Spain | 1.614/8447 | ||
| Propilenglycol | Fluka | 82280 | ||
| Sucrose | Merck | 107687 | ||
| مقصات جراحية | Aesculap | BC-060R; BG-061R | ||
| جهاز ختم حراري | SIZ | 220 | ||
| أطباق زراعة 35 و 90 mm | Nunc | 153066; 150350 | ||
| أنابيب 10 ml | Greiner Bio-one | 163160 | ||
| خزان نيتروجين | MVE, Cryogenics | XC 43/28 | ||
| مجمد قابل للبرمجة | Planner Products Ltd. | Kryo-10 Series III | ||
| ملاقط | Aesculap | BD-331R; BD-053R; OC-020R |
المراجع
- Whittingham, D. G., Leibo, S. P., Mazur, P. Survival of mouse embryos frozen to -196 and -269 °C. Science. 178, 411-414 (1972).
- Wilmut, I. The effect of cooling rate, warming rate, cryoprotective agent and stage of develo....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
