مقالة منهجية

فأري إجراء زراعة الكلى

DOI:

10.3791/1150

⸱

يوليو 10, 2009

 ,  ,  , 
1Department of Surgery, The Ohio State University, 2Integrated Biomedical Sciences Graduate Program, The Ohio State University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

زرع الكلى في الفئران هو إجراء تحديا فنيا يتطلب الحذر بعد العمليات الجراحية الرعاية والعلاج للنجاح.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

زرع الكلى في الفئران مثلي هو إجراء تحديا تقنيا. على الرغم من إجراء عمليات زرع الكلى الأولى في الفئران عن طريق رسل آخرون أكثر من 30 سنة مضت (1) وصقلها عن طريق تشانغ وآخرون سنة في وقت لاحق (2) ، ويتقن عدد قليل من الناس في العالم هذا الإجراء. في المختبر لدينا أجرينا بنجاح عملية زرع الكلى مثلي 1200 مع معدل> البقاء على قيد الحياة 90 ٪. النقاط الرئيسية لتحقيق النجاح تشمل رقابة صارمة من ضخه النزيف والإصابة والتجلط ، سواء أثناء وبعد إجراء عمليات الزرع ، واستخدامها بدلا من 10-0 11-0 خياطة لanastomoses.

بعد العمليات الجراحية الرعاية والعلاج للمتلقي من المهم للغاية لنجاح زرع والتقييم. جميع المستفيدين طعم كلوي تلقي المضادات الحيوية في شكل حقنة من البنسلين مباشرة بعد الزرع وsulfatrim في مياه الشرب باستمرار. يتم تقييم شامل للصحة الحيوانية يوميا ويتم تنفيذ كل التحليلات الكرياتينين بالدم بشكل روتيني مع جهاز I - STAT المحمولة لتقييم وظيفة الكسب غير المشروع.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

حصاد الجهاز المانحة (2) :

  1. تخدير المانحة باستخدام 65mg/kg IP بنتوباربيتال ؛ الحفاظ التخدير بواسطة Isoflurane (2-3 ٪).
  2. جعل شق خط الوسط من القص إلى العانة لدخول البطن المانحة وفضح الكلية اليسرى عن طريق تحريك الأمعاء أفقيا إلى الجانب الأيمن.
  3. عزل الكلى التي خلفتها ligating وتقسيم السفن الكظرية والخصية مع خياطة الحرير 8-0.
  4. تعبئة الأبهر أعلاه التقائه الشريان الكلوي والوريد.
  5. تعبئة الوريد الأجوف السفلي (IVC) أعلاه ، وأدناه التقائه الشريان الكلوي والوريد.
  6. Ligate أدناه الأورطى الشريان والوريد الكلوي مع خياطة الحرير 8-0 للحد من النزيف.
  7. تشريح الحالب الأيسر من نقير الكلى إلى المثانة.
  8. كشف تقاطع حالبي مثاني باستخدام التراجع ذنبيا على القبة المثانة.
  9. صغير المكوس ، والتصحيح اهليلجيه المثانة تحتوي على مفترق اليسار الحالبي المثاني ، وتستخدم لإعادة الإعمار عن طريق البول مفاغرة المثانة إلى المثانة. لم يتم تضمين مع الحق الحالب والمثانة.
  10. Ligate في IVC تحت الشريان والوريد الكلوي مع خياطة الحرير 8-0.
  11. heparinized حل رينغر اكتات عبر الشريان الأورطي infrarenal Ligate الشريان الأورطي فوق الشريان والوريد الكلوي ، ويروي ببطء والكسب غير المشروع في الموقع مع 0.2 - 0.4ml الباردة.
  12. Ligate في IVC فوق الشريان والوريد الكلوي مع خياطة الحرير 8-0.
  13. المسح الشامل للالوريد الكلوي عند التقائه في IVC.
  14. تقسيم الأبهر مواربة ، 2mm وتقريبا دون الشريان الكلوي.
  15. إزالة الكلى والأوعية الدموية مع امداداتها الحالب تعلق على التصحيح المثانة ان التكتل. متجر في حل رينغر اكتات على الجليد.
  16. الموت ببطء الماوس الجهات المانحة عن طريق الخلع عنق الرحم تحت التخدير.

المستلم زرع (2) :

  1. تخدير المتلقي مع IP ملغم / كغم من 65 بنتوباربيتال والحفاظ على التخدير بواسطة Isoflurane (2-3 ٪).
  2. جعل شق خط الوسط ، وتغطي الأمعاء مع الشاش الرطب وسحب بعناية إلى الجانب الأيسر.
  3. Ligate الحالب الأيمن ، الشريان الكلوي والوريد ، وإزالة الكلية اليمنى.
  4. عزل بعناية وعبر المشبك ، والشريان الأورطي infrarenal IVC مع المشابك 4 ملم two microvasular بعد ligating فروع القطنية.
  5. مكان الدرز النايلون 10-0 من خلال سمك الكامل الأبهر وسحب لإجراء aortaotomy بيضاوي الشكل من قطع واحد (حوالي خمس القطر للسفينة).
  6. جعل فصد طولية بواسطة ثقب إبرة IVC مع قياس 30 و توسيع نطاق استخدام microscissors مناسب.
  7. ري كل من الشريان الأورطي وIVC مع المالحة heparinized لمسح الدم داخل اللمعة أو جلطات.
  8. إزالة الكلى المانحة من الجليد ووضعه داخل بطنيا في الجهة اليمنى من الفأرة. يتم الاحتفاظ الكلى المانحة الرطبة الباردة مع وسادة شاش غارقة في المياه المالحة.
  9. مكان الغرز اثنين في البقاء على قمة الدانية والقاصية من aortaotomy المتلقين مع الكفة الأبهر المانحين.
  10. جعل مفاغرة النهاية إلى جانب المانحين الكفة بين الشريان الأورطي والجدار الأمامي للaortaotomy المتلقين ، وذلك باستخدام 2 ~ 3 المستمر 10-0 خيوط النايلون في الخارج من الشريان الأورطي.
  11. بدوره الكسب غير المشروع الكلى المانحة الى الجهة اليسرى للمتلقي. كرر الإجراء السابق بين المانحين الكفة الأبهر والجدار الخلفي للمتلقي aortaotomy
  12. إجراء مفاغرة نهاية إلى الجانب بين الوريد الكلوي المانحة والجدار الخلفي للIVC المتلقين ، وذلك باستخدام 4-5 10-0 خيوط النايلون المستمر في داخل IVC. ومن ثم يتم إغلاق الجدار الأمامي من الوريد الكلوي IVC والجهات المانحة مع 4 5 ~ خيوط المستمر خارج IVC.
  13. يجب أن يتم الانتهاء من كل من مفاغرة الوريد والشريان في غضون 20 دقيقة.
  14. شطف الكسب غير المشروع مع عدة مرات المالحة الباردة خلال مفاغرة.
  15. تقسيم قبة المثانة المتلقي ، ووقف نزيف مع الكي.
  16. إجراء قطع صغيرة على القبة.
  17. مكان الغرز البقاء اثنين من النايلون ل10-0 anastomize المانحين التصحيح المثانة صغيرة مع القبة المثانة المتلقين. وتخاط كل جانب من مفاغرة مع 8 غرز 10 ~ مستمر.
  18. إغلاق البطن في طبقتين مع 4-0 العقيمة مستمرة ، خياطة امتصاص vicryl الاصطناعية.
  19. إعطاء الفئران المتلقي المالحة الدافئة 0.4ml أثناء الجراحة بواسطة الحقن الرابع على فترات متقطعة.

بعد العمليات الجراحية العناية مستلم

  1. بعد إغلاق البطن ، وتدار في حقنة واحدة من البنسلين في العضل (500U/10g) (2).
  2. بالإضافة إلى ذلك ، تتلقى المستلمين 0.05 ملغم / كغم البوبرينورفين عضليا على 0 اليوم آخر يوم والجراحة 1 للألم. بعد الجراحة ، والمتلقين زرع تلقي المياه التي تحتوي على sulfatrim (100mg/kg) حتى التجربة هي الشركة المصرية للاتصالاتrminated.
  3. ل24H الأولى هي حافظت الفئران بعد العمل الجراحي في درجة حرارة الحاضنة للرقابة.
  4. الفئران وعادة ما يشفى من التخدير في حدود 1 ساعة من العملية ، ويتم إعطاء الغذاء والمياه العادية بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية.
  5. يتم إزالة الخيوط الجراحية الجلد 2 أسابيع بعد الجراحة.

استئصال الكلية المستفيدة

  1. تخدير المتلقي 4 الكلى آخر ~ 7 أيام الزرع مع 65 ملغم / كغم IP بنتوباربيتال ؛ الحفاظ التخدير بواسطة Isoflurane (2-3 ٪).
  2. فتح البطن من خلال شق خط الوسط.
  3. تغطية الأمعاء مع غارقة في المياه المالحة والشاش ، ويتراجع بعناية إلى الجانب الأيمن.
  4. إزالة الكلية اليسرى بعد ligating اليسار الوريد حالب الكلى ، والشرايين.
  5. إغلاق البطن في طبقتين مع خياطة متواصلة امتصاص 4-0 vicryl الاصطناعية.

كلها قياسات الدم الكرياتينين

  1. تتم أسبوعيا لجمع الدم مرة كل أسبوعين من أقل من 0.2 سم submandibularly إما بدون تخدير أو الرجعية orbitally تحت التخدير Isoflurane.
  2. ويتم تحديد كمية الكرياتينين بالدم الكامل مستويات باستخدام محلل المحمولة I - ستات السريرية (Heska كورب ، وفورت كولينز ، أول أكسيد الكربون).
  3. يتم تحويل وحدات تقليدية (ملغم / دل) إلى وحدات SI للميكرومول / لتر بضرب الوحدات التقليدية بنسبة 88.4.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لقد نفذنا ما يقرب من 1200 حالة لزرع الكلى في الفئران مع نسبة نجاح 90 ٪ من التقنية>. مقارنة زرع القلب ، ونسبة نجاح عمليات زرع الكلى منخفضة في العادة. ومع ذلك ، حافظت مختبرنا نسبة نجاح عالية (> 90 ٪) من زرع الكلى. النقاط الأساسية للنجاح هي للحد من إصابات الكلى ضخه إلى الجهات المانحة والمتلقية على حد سواء ، وتقليل النزف والتجلط في جميع أنحاء الداخلي والجراحة آخر. قد يكون للعوامل التالية أهمها : (أ) تقليل النزف في المتلقي أثناء الجراحة قدر الإمكان من خلال عملية دقيقة ورقيقة ، (ب...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
وقد أجريت تجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعتها وIACUC جامعة ولاية أوهايو.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ودعمت هذه الدراسات في جزء من التمويل من المعاهد الوطنية للصحة R01 AI36532 لجاه. نود أن نعترف بالدعم المتميز في علم الأمراض زرع المقدمة من الدكتور تيبور Nadasdy ، والتوجيه لا تقدر بثمن والبصيرة التي قدمها الراحل الدكتور شارل Orosz زاي في استهلال هذا الجهد البحثي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
i-STATأخرىHESKACat 5101
خرطوشة i-STATأخرىHESKACAT 5110-CREA
SulfatrimأخرىActavisR02109
IsofluraneأخرىNOVAPLUSCA-0474
خيط جراحي 10-0جراحةSharpointAK0100

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Russell, P. S., Chase, C. M., Colvin, R. B., Plate, J. M. D. Kidney transplants in mice. An analysis of the immune status of mice bearing long-term, H-2 incompatible transplants. JExpMed. 147, 1449-1468 (1978).
  2. Zhang, Z., Schlachta, C., Duff, J., Stiller, C., Grant, D., Zhong, R. Improved techniques for kidney transplantation in mice. Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

I STAT

مقالات ذات صلة