ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

عامل النمو المغلفه الموضع الخرزة على explants الدماغ المقدم الظهرية

هذا الفيديو يوضح طريقتين لإعداد ووضع الخرز ، والتي تم المغلفة مع عامل النمو ، على explants من القشرة الدماغية النامية. ويمكن استخدام هذه الخرز للحث على تقييد مكانيا التعبير الجيني على تطوير الأنسجة العصبية مثل explants الدماغ المقدم. تعطى وسائل لاستخدام كل من افى جل الخرز والخرز acryllic الهيبارين.

عامل النمو المغلفه الموضع الخرزة على Explants الدماغ المقدم الظهرية

إذن هذه هي النوع الأول من الخرزات التي سأستخدمها. هم حبات الجل الأزرق الجل. إنها ناعمة.لذلك أحتاج إلى استخدام ماصة زجاجية مجمعة في نهاية ماصة الفم لوضع هذه الخرزات على Xs ، والنوع الثاني من الخرزة الذي سأعرضه هو حبات الأكريليك الهيبارين. إنها نوع صلب من الخرزات ، وسأضع هذه الخرزات على مصانع X باستخدام إبرة التنغستن. إذن هذه هي الأنابيب الشعرية الزجاجية التي سأقوم بإذابتها أولا باستخدام موقد البنسن.ثم سأسحبهم لإنشاء طرف أدق. لذلك أمسك الأنبوب الشعري في منتصف اللهب وأقوم بلفه عندما يذوب الأنبوب. أستطيع أن أشعر أنه يصبح ناعما.سأرفعه من اللهب ثم أسحبه. سأقوم بحفر خط عبر الأنبوب الشعري باستخدام هذا القلم ذو الرأس الماسي حتى أتمكن من الحصول على قطع مستقيم لطيف. ثم سأقوم بتلميع الأطراف لتنظيفها.سأقوم بتمرير الشعيرات الدموية عبر اللهب لتلميع النهاية وجعل الفتحة أصغر بحيث يمكنها التقاط حبة بدلا من الخرزة التي تمر عبر الشعيرات الدموية. الشيء المهم الذي يجب ملاحظته هو أنك لا تريد الاحتفاظ بالأنبوب الشعري في اللهب لفترة طويلة. إنها في الواقع تمريرة سريعة جدا ، وإلا فسوف تغلق.عادة ما أقوم بعمل العديد من هذه لأن العديد منها يتحول إلى مكان إغلاق الطرف باللهب. من الصعب التحكم في ذلك ، لذلك يمكنك فقط صنع العديد منها. هذا مثال على واحد حيث تم إغلاق الحافة.هذا مثال على ماصة جيدة. لقد قمت بسحب 250 ميكرولترا من حبات الأجل في أنبوب einor هذا ، وسأغسلها خمس مرات بمليلتر واحد من PBS لإزالة محلول azi الذي كانوا ينقعون فيه. سأنتظر حوالي ثلاث دقائق للسماح للخرز بالاستقرار وبعد ذلك سأستطق PBS الزائد وأكرر هذا أربع مرات أخرى.لم تستقر الخرزات تماما بعد ، لذلك استقرت الخرزات وسأستمح PBS الزائدة وأكرر ذلك أربع مرات. وفي النهاية سأضيف 300 ميكرولتر من PBS وأبدأ في العمل مع الخرز. هذه ماصة فم قياسية وسآخذ الشعيرات الدموية التي سحبتها وأدفعها هناك حوالي ثلث الطريق لأعلى.أولا ، املأ الماصات ب PBS. عادة ما تمتلئ فقط عن طريق عمل الشعيرات الدموية. إذن هذا غطاء من طبق استزراع 30 ملم وقد وضعت قطرة من الخرز باللون الأزرق.وبجانبه قطرة صغيرة من PBS. وفي هذا الطبق يوجد قطرات من محلول البروتين سعة خمسة ميكرولتر. في هذه الحالة ، يكون B و P أربعة ، ولكن يمكنك استخدام البروتين المفضل باستخدام ماصة الفم.سأقوم بنقل حبة من هذه الدائرة الزرقاء هنا ، وشطفها مرة واحدة في قطرة PBS. ثم سآخذ الخرزة بماصة الفم وأضعها في قطرة محلول البروتين وأحتضنها إما بدرجة حرارة الغرفة لمدة ساعة أو أربع درجات تقريبا لعدة ساعات. لذلك ترى مجموعة من الخرزات في PBS وأحتاج إلى تحديد الخرز بالحجم المناسب.إذا كانت صغيرة جدا ، فسوف تمر ببساطة عبر ماصة الفم. إنهم بحاجة فقط إلى الجلوس في النهاية. الآن ترى أنني اخترت بعض الخرزات هناك ، ثلاث حبات أكبر وثلاث حبات أصغر.سأستخدم الخرزات الأكبر حجما في التجربة. سأقوم الآن بنقل حبة كبيرة من قطرة PBS إلى قطرة محلول البروتين. وللقيام بذلك ، سأسحب لساني برفق بعيدا عن ماصة الفم.إنها ليست حركة مص مص ، ولكن فقط لتطبيق بعض الضغط السلبي. وبعد ذلك سأقوم بنقله ثم أضع لساني مرة أخرى على الفم. رأس الأنبوب ، لا ينفخ ، ولكن فقط يضيف بعض الضغط الإيجابي لدفع الإيقاع من النهاية.لدي الآن خمس حبات في قطرة محلول البروتين ، وسأحتضنها عند أربع درجات لعدة ساعات ، أو بدلا من ذلك في درجة حرارة الغرفة لمدة نصف ساعة إلى ساعة. إذن هذا هو طبق الثقافة الذي يحتوي على الغشاء الذي يطفو في الوسائط جنبا إلى جنب مع الباذنجان الذي قمت بتشريحه بالفعل. سآخذ طرف الماصة وأمتص بعض الوسائط.سأقوم بشطف الخرزات في قطرة من الوسائط مرة واحدة فقط قبل أن أضع الخرزة على X explan. هذه هي إبر التنغستن التي سأستخدمها لالتقاط ووضع حبات الأكريليك. هذه هي إبرة التنغستن وهي في حاملها الآن.وهذه بعض الملقط الدقيق. بزاوية 45 درجة. سأستخدم إبرة التنغستن في ملقط لرفع حبة من هذه المجموعة من PBS ونقل الخرزة إلى قطرة من محلول البروتين.كما فعلت مع حبات الأجل. كما هو الحال مع حبات الأجل ، قمت بشطف حبات الأكريليك هذه خمس مرات في PBS وقمت بنقل قطرة إلى هذه اللوحة. سأستخدم بعد ذلك إبرة التنغستن في ملقط لنقل حبة إلى قطرة من البروتين واحتضانها تماما كما فعلت مع حبات الجل.لذلك فهو رفع الخرزة. أضع يدي اليمنى بقوة على الطاولة ، وأستخدم إصبعي الأيسر لتثبيت الإبرة وأنا أنزل إلى السائل ، وألمس حبة برفق بإبرة وأرفعها ببطء من السائل. في بعض الأحيان تسقط من الإبرة ، لذا عد للحصول على إبرة أخرى.الآن بيدي اليسرى ، لدي ملقط زاوية 45 درجة. مع النقاط لأسفل ، ألمس الخرزة والإبرة إلى السائل وأستخدمها. استخدم طرف الملقط للضغط عليه برفق.الآن لدي خمس حبات في البروتين. حسنا ، بيدي اليمنى لدي إبرة التنغستن في الخرزة ، ويدي اليسرى ، ملقطي مرة أخرى مع النقطة لأسفل بنفس الطريقة التي أدفعها بها بعيدا عن الأربعة ، سأفعل ذلك مرة أخرى هنا في x explan. احتضان عند 37 درجة ويعتمد الوقت على فحص معين.

growth-factor-coated-bead-placement-on-dorsal-forebrain-explants

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

Growth Factor-Coated Bead Placement on Dorsal Forebrain Explants

University of California, Irvine (UCI).  هذا الفيديو يوضح طريقتين لإعداد ووضع الخرز ، والتي تم المغلفة مع عامل النمو ، على explants من القشرة الدماغية النامية. ويمكن استخدام هذه الخرز للحث على تقييد مكانيا التعبير الجيني على تطوير الأنسجة العصبية مثل explants الدماغ المقدم. تعطى وسائل لاستخدام كل من افى جل الخ...

عامل النمو المغلفه الموضع الخرزة على Explants الدماغ المقدم الظهرية

في هذه المقالة

ملخص

الإفصاحات

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

مقالات ذات صلة