الحق الزاوية microprisms إدراجها في القشرة المخية الحديثة الماوس يسمح للتصوير عميق للطبقات قشرية متعددة مع وجهة النظر التي توجد عادة في شريحة. واحد ملليمتر microprisms العرض حقل من رأي واسعة (900 ميكرون ~) والقرارات المكانية كافية لحل شجيري العمود الفقري. نظهر طبقة V التصوير العصبية والأوعية الدموية التصوير باستخدام microprisms القشرة المخية الحديثة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
في التصوير المجراة من الطبقات العميقة القشرية باستخدام Microprism
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
نقدم لبروتوكول في مجال التصوير من الأنسجة الحية القشرية باستخدام مسبار التصوير في أعماق المخ في شكل microprism. Microprisms هي 1 ملم في الحجم ولها طلاء عاكسة على وتر للسماح التأمل الداخلي من الإثارة والخفيفة الانبعاثات. التحقيق microprism الصور في وقت واحد طبقات قشرية متعددة مع منظور ينظر عادة إلا في شريحة الاستعدادات. يتم جمع الصور مع حقل كبير من رأي (~ 900 ميكرون). بالإضافة إلى ذلك ، ونحن نقدم تفاصيل بشأن الإجراء غير الجراحي والإعداد بقاء المجهر. النتائج ممثل تضمين الصور طبقة من الخلايا العصبية الهرمية الخامس من خاصتك - 1 - H YFP الفئران تبين التشعبات التي تمتد من خلال قمية طبقة قشرية سطحية وتمتد إلى خصلات. وكان القرار كافية لصورة العمود الفقري شجيري قرب سوما طبقة من الخلايا العصبية الخامس. إن الحقن الذيل الوريد صبغة الفلورسنت يكشف عن شبكة معقدة من الأوعية الدموية في القشرة. خط المسح الضوئي لخلايا الدم الحمراء (كرات الدم الحمراء) التي تتدفق من خلال الشعيرات الدموية RBC يكشف سرعة ويمكن الحصول على معدلات التدفق. هذا التحقيق microprism الرواية أنيقة ، طريقة جديدة لكنها قوية من تصور الهياكل الخلوية العميق وظيفة القشرية في الجسم الحي.
البروتوكول
الجزء 1 : بصريات والإعداد Microprism مجهر
- وmicroprisms التي نستخدمها هي 1 ملم ، والحق الزاوية الموشورات مصنوعة من الزجاج BK7 شراؤها من شركة Optosigma (الشكل 1). يتم التعامل مع Microprisms باستخدام الملقط كلما أمكن ذلك.
- غير المغلفة ووتر من microprism بالفضة المعززة لتوفير انعكاسية أكبر من 97 ٪ 4-200 نانومتر. يوفر هذا التأمل الداخلي من كل من ضوء الليزر الإثارة ومضان المنبعثة.
- يتم معالجتها باستخدام الملقط Microprisms دائما عندما يكون ذلك ممكنا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
باستخدام microprism في تجربة التصوير واضح ومباشر نسبيا وتوفر العديد من المزايا لفي الدراسات المجراة على القشرة المخية الحديثة. أمثلة ممثل باستخدام هذه التقنية تشمل الصور المأخوذة من الفئران المعدلة وراثيا التعبير عن بروتين فلوري الصفراء في الخلايا العصبية الخامس طبقة قشرية. باستخدام microprisms يمكن للمرء أن يرى مجموعة كبيرة من الهيئات الخلايا الهرمية في الطبقة الخامسة ، ما يقرب من 1 ملم تحت سطح القشرية. ينظر أيضا هي قمية التشعبات التي تمتد عبر كل الطبقات السطحية قبل متباينة في خص.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وقد أجريت تجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعتها IACUC جامعة ييل.
شكر وتقدير
نشكر أنتوني Koleske J. ، دكتوراه عن توفير YFP الفئران.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| بطلاء فضي عاكس مُحسَّن-(R77) | OptoSigma Corp. (Santa Ana, CA) | 055-0010 | بطلاء فضي عاكس مُحسَّن-(R77) |
| فلوريسين-ديكستران | Sigma-Aldrich | FD70 | 70 kDa |
| عدسة شيئية هوائية 4x، بفتحة عددية 0.28 NA | Olympus Corporation | XLFLUOR 4x/340 | |
| عدسة شيئية هوائية 40x، بفتحة عددية 0.60 NA | Olympus Corporation | LUCPLFLN | مع تصحيح لغطاء زجاجي بسماكة 0-2 mm |
المراجع
- Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes. Biomed Eng Online. 2, 13-13 (2003).
- Feng, G. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
