هذه التقنية تتيح استخدام السحر زاوية عالية الدقة الغزل بروتون MR الطيفي (HRMAS 1H - MRS) لتوصيف الجزيئي للعيش ذبابة الفاكهة السوداء البطن مع مطياف التقليدية تسلا 14.1 مجهزة HRMAS التحقيق.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الرنين المغناطيسي الطيفي للعيش ذبابة الفاكهة السوداء البطن غزل باستخدام زاوية ماجيك
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
عالية الدقة ماجيك زاوية الغزل (HRMAS) بروتون التحليل الطيفي بالرنين المغناطيسي (
البروتوكول
الجزء 1 : ذبابة الفاكهة التحضير لقياسات HRMAS
- باستخدام معيار flylab الإجراءات 1 ، وجمع الذباب eclosing حديثا لمدة 3 أيام ، ونقل لهم يطير قارورة تحتوي على المواد الغذائية الطازجة الطيران. احتضان الذباب جمعت لمدة 5 أيام حتى يتسنى للذباب ستصبح 5-8 أيام من العمر قبل لمجرد التجربة. ويستخدم واحد فقط الجنس (الذكور عادة) لإجراء التجارب.
- استخدام صحية وسليمة نوع الذباب البرية للمقارنة مع العلاج بالصدمة مثل الذباب أو المعدلة وراثيا 1.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
مع استثناء من التقرير الأخير للجدوى في التصوير بالرنين المغناطيسي المجراة في ذبابة الفاكهة 6 ، في الدراسات المجراة في ذبابة الفاكهة MRS لم يتم الإبلاغ عنها. في هذا البروتوكول ، ونحن تصف تنفيذ رواية في HRMAS فيفو نهج H - 1 MRS للكشف عن جزيئات هامة بيولوجيا. على وجه التحديد ، اكتشفنا الدهون والأيضات صغيرة في ذبابة الفاكهة تعيش في الذباب في ما يقرب من 14.1 T 45 دقيقة ، مما يتيح الوقت الكافي للشراء ، .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وقد أجريت تجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعتها مستشفى ماساتشوستس العام أبحاث الحيوان المؤسسية اللجنة مراجعة المجلس.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل في جزء من المعاهد الوطنية للصحة (NIH) منحة لورانس G. AI063433 رحمة ، معهد المعاهد الوطنية للصحة (NIH) مركز غرانت (P50GM021700) لرونالد تومبكينس G. (A. الأغنية Tzika ، مدير جوهر الرنين المغناطيسي) ، ومستشفى للأطفال في Shriner منحة بحثية (# 8893) إلى ألف الأغنية Tzika. نشكر Dionyssios Mintzopoulos دكتوراه للحصول على المساعدة في المراحل الأولى من تطوير هذا البروتوكول وأوفيديو جيم دكتوراه Andronesi للحصول على المساعدة مع تسلسل نبض TOBSY.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات | |
|---|---|---|---|---|
| أكسيد الديو تيريوم | الكاشف | Sigma-Aldrich | 7789-20-0 | |
| 3-(تريميثيل سيليل) بروبيونيك-2,2,3,3-d4 حمض | كاشف | Sigma-Aldrich | 24493-21-8 | |
| أجار، سكروز، خميرة، دقيق ذرة | الغذاء | Genesee Scientific | http://www.flystuff.com/ | |
| ذباب من سلالتي Oregon RS أو Canton-S | سلالات الذباب البالغة | مركز بلومينغتون للمخزونات الوراثية (Bloomington Stock Center) | <أداة الربط التشعبي (a href=)"http://flystocks.bio.indiana.edu/">http://flystocks.bio.indiana.edu/ | |
| فرشاة تلوين | الأجهزة | (الحجم 0) | ||
| أنابيب سعة 2 مل | المعدات | Fisher Scientific | K749521-1590 | |
| حضانات الذباب | المعدات | سعة رطوبة عالية (60-75%)، ودرجة حرارة قابلة للتعديل، ودورة ضوء:ظلام تبلغ 12 ساعة:12 ساعة. | ||
| مقياس طيف الرنين المغناطيسي النووي Bruker Bio-Spin Avance (بتردد 600.13 ميجاهرتز) ذو رنين ثلاثي بقطر 4 ملم (1هـ، 13ك، 2مسبار HRMAS | الأجهزة والمعدات | شركة Bruker | ||
| وحدة BTO-2000 مقترنة بوحدة MAS الهوائية | المعدات | شركة بروكير (Bruker Corporation) | ||
| دوار من أكسيد الزركونيوم بحجم 4 مم (سعة 50 ميكرولتر) | المعدات | شركة Bruker | B3829 (متجر Bruker) | |
| MestReC (Mestrelab Research) | البرمجيات | تحليل أطياف الرنين المغناطيسي النووي أحادية البعد (1D NMR) <رابط href="http://mestrelab.com/">http://mestrelab.com/ | ||
| SPARKY 3، USCF | البرمجيات | تحليل أطياف الرنين المغناطيسي النووي ثنائية الأبعاد <أداة الربط التشعبي (href)"http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/">http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/ |
المراجع
- Apidianakis, Y., Rahme, L. G. Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection. Nat Protoc. 4, 1285-1294 (2009).
- Meiboom, S., Gill, D. Modified spin-echo method for measuring nuclear relaxation time. Rev Sci Instrum. <....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
