في هذا الفيديو ، ونحن لشرح اجراءات التنشيط CD40 ، والتوسع في خلايا الفئران B من splenocytes من C57BL / 6 الفئران ، والتي يمكن استخدامها بوصفها خلية مستضد تقديم نموذج (APC) لدراسة تحريض الحصانة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وقد أظهرت البحوث على الخلايا البائية أن التنشيط CD40 يحسن قدرتها على تقديم المستضد. عندما حفز مع وانترلوكين 4 - CD40 يجند (CD40L) ، يمكن توسيع خلايا B الإنسان دون صعوبات من كميات صغيرة من الدم المحيطي في غضون 14 يوما لكميات كبيرة جدا من خلايا CD40 - B نقية عالية (> 10
البروتوكول
ينقسم بروتوكول لجيل من الفئران خلايا B - CD40 تنشيط (mCD40B) من splenocytes إلى جزأين : الجزء ألف يوضح إعداد يجند CD40 الفئران (CD40L) معربا عن خلايا هيلا (tmuCD40L هيلا) ، والتي سوف تستخدم لوحة ، كما منضم الخلايا المغذية. الجزء باء يصف الفعلية الفئران CD40 - B الثقافة.
A. إعداد الخلايا المغذية (tmuCD40L هيلا)
وهيلا tmuCD40L هو ملتصق الإنسان خط الخلايا الظهارية ، والتي لا ينبغي أبدا أن تصبح متكدسة تماما. وبالتالي فإن الخلايا splitted مرتين في الأسبوع. لا ينصح زراعة على مدى أكثر من 6 أسابيع.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
إدخال تعديلات على هذا البروتوكول أمر ممكن ، وخصوصا فيما يتعلق أصل التحفيز CD40 ونوع السلالة الماوس المستخدمة ، مما أسفر أيضا في توليد خلايا الفئران كفاءة B - CD40 تفعيلها. الأحمدي وآخرون. وقد أظهرت نتائج مماثلة بالنسبة لالليفية الماوس transfected مع الفئران CD40 - يجند. ويمكن في هذا العرض سياق xeno مستضد استبعادها على وجه اليقين ، إلا أن الدراسات المكثفة حول الأمن والسمية في الجسم الحي لم يعط إشارات رد فعل تلقائي أو التهاب الحصانة في هذا الإعداد باستخدام الخلايا البشرية t.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وأجريت التجارب وفقا لمبادئ توجيهية وطنية وأوروبية لحفظ الحيوانات المختبرية. وكانت تسيطر عليها إحالة قانون الرفق بالحيوان الالمانية الحيوانات بشكل منتظم من قبل السلطات المختصة.
شكر وتقدير
نشكر الدكتور كليمنس تتكرم Wendtner لتوفير tmuCD40 - يجند الحله خط الخلية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
A. إعداد وسائل الإعلام :
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| التغذية المتوسطة الخلية نوع البرية | اختيار الخلية المتوسطة المغذية | ||
| الكاشف | تركيز | الكاشف | تركيز |
| RPMI 1640 | RPMI 1640 | ||
| L - الجلوتامين | 300 ميكروغرام / مل | L - الجلوتامين | 300 ميكروغرام / مل |
| FBS | 10 ٪ | FBS | 10 ٪ |
| HEPES | 10 ملي | HEPES | 10 ملي |
| الجنتاميسين | 15 ميكروغرام / مل | الجنتاميسين | 15 ميكروغرام / مل |
| هيغروميسين B | 0.2 ملغ / مل |
| mCD40 B غسل المتوسطة | mCD40 B - مستنبت | ||
|---|---|---|---|
| الكاشف | تركيز | الكاشف | تركيز |
| D - MEM | D - MEM | ||
| L - الجلوتامين | 580 ميكروغرام / مل | L - الجلوتامين | 580 ميكروغرام / مل |
| جلوكوز | 4.5 ملغ / مل | جلوكوز | 4.5 ملغ / مل |
| HEPES | 10 ملي | HEPES | 10 ملي |
| الجنتاميسين | 15 ميكروغرام / مل | الجنتاميسين | 15 ميكروغرام / مل |
| MEM | 0.1mM (1X) | ||
| FBS | 10 ٪ |
B. متنوعة الكواشف :
| الكاشف | شركة | لكي لا |
| RPMI 1640 | Invitrogen Gibco | REF 21875 |
| D - MEM | Invitrogen Gibco | REF 41965 |
| Dulbeccos PBS (10X) | PAA | القط لا H15 - 011 |
| Gencin | حدد الدلتا | الفن لا يوجد 7395800 |
| FBS | LONZA | القط لا DE14 - 802C |
| HEPES العازلة | PAA | القط لا S11 - 001 |
| MEM NEAA | Invitrogen Gibco | REF 11140 |
| هيغروميسين B | PAA | القط لا P02 - 015 |
| المؤتلف الفئران إينترليوكين - 4 | Immunotools | القط لا 12340045 |
| السيكلوسبورين A | شركة نوفارتيس | القط لا 0078-0109-01 NDC |
| التربسين / EDTA (10X) | Invitrogen Gibco | REF 15400-054 |
جيم لوازم متنوعة :
| الكاشف | شركة | لكي لا |
|---|---|---|
| ماصة معقمة نصائح | Sarstedt | |
| 6 كذلك لوحة | نونك | القط لا 140675 |
| 50mL أنبوب مخروطي | دينار بحريني فالكون ™ | القط لا 352070 |
| نسيج الثقافة القارورة | Sarstedt | القط لا 83.1813.002 |
المراجع
- Schultze, J. L. CD40-activated human B cells: an alternative source of highly efficient antigen presenting cells to generate autologous antigen-specific T cells for adoptive immunotherapy. J Clin Invest. 100 (11), 2757-2765 (1997).
- Wiesner, M.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
