نحن هنا وصف طريقة مفصلة لزراعة القصبات الإنسان الأولية من الخلايا الظهارية explants الأنسجة البشرية القصبات الهوائية بما في ذلك النمو المتباينة على واجهة الهواء السائل. هذا الأسلوب يوفر مصدر وفيرة من الخلايا الأولية للتحقيق في دور ظهارة مجرى الهواء في الرئة صحة الإنسان والمرض.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الإنسان الشعبي الأساسي الخلايا الظهارية نمت من Explants
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وهناك حاجة الإنسان الخلايا الظهارية القصبية لنماذج خلية من المرض ودراسة تأثير السواغات وكلاء الصيدلانية على وظيفة وهيكل الخلايا الظهارية البشرية. نحن هنا تصف بالتفصيل طريقة تنامي الخلايا الظهارية القصبات الهوائية من نسيج الشعب الهوائية التي يتم حصادها من قبل الجراح في أوقات جراحة الرئة (مثل سرطان الرئة أو جراحة خفض حجم الرئة). مع الموافقة على الأخلاق والموافقة المستنيرة ، الجراح يأخذ ما هو بحاجة لعلم الأمراض ، ويوفر لنا مع جزء الشعب الهوائية التي هي بعيدة من المناطق المصابة. ثم يتم استخدام النسيج كمصدر للexplants التي يمكن استخدامها لزراعة الخلايا الظهارية القصبية الأساسي في الثقافة. يتم شطف شرائح الشعب الهوائية نحو 0.5 - 1cm طويلة و≤ 1cm في قطر مع EBSS الباردة وتتم إزالة الأنسجة الزائدة متني. تقطع شرائح فتح والمفروم إلى 3mm - 2
البروتوكول
شرائح الشعبي الإنسان توفير مصدر وفيرة من الخلايا الأولية الظهارية القصبية. في هذه المقالة وصفنا بروتوكولا للنمو والتوسع في الشعب الهوائية الخلايا البشرية (HBE) الظهارية من شرائح الشعب الهوائية المعزولة حديثا الإنسان. هذا البروتوكول يتكون من خمسة أقسام :
- طلاء لوحات الخدش والثقافة 100mm
- إعداد Explants الأنسجة القصبي
- زرع أنسجة الشعب الهوائية
- مرور خلايا HBE
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في هذه الدراسة التي قدمت لنا وسائل مفصلة للثقافة وتوسيع الشعب الهوائية الخلايا الظهارية الإنسان الأساسية. أظهرنا كيف explants وزرع أنسجة الشعب الهوائية ، ومثقف في وسائل الإعلام التي تروج للنمو الخلايا الظهارية ، ويمكن توفير مصدر مستمر من الخلايا الظهارية البشرية الهوائية للدراسات غير متمايزة نماذج الخلية (المغمور) والمتفاوتة (نمت على الهواء السائل واجهة) . ويمكن استخدام هذه الخلايا في نظم اختبار المخدرات أن أكثر شبها الخلايا في بيئاتهم فيزيولوجية حقيقية. من المهم جدا أن تشاهد الخل.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
المؤلفون ممتنون جدا للدكتور ريتشارد Inculet لتوفير أنسجة الشعب الهوائية. تم الحصول على موافقات مجلس البحوث الأخلاقيات الطبية من هاميلتون القديس يوسف وجامعة اونتاريو / لندن الغربية مركز علوم الصحة (الدكتور ديفيد ماكورماك) ، مناديل والمحفوظات اللجنة ، قسم علم الأمراض. ونحن نشكر أيضا إرني سبيتزر (الميكروسكوب الالكتروني ، جامعة ماكماستر) لتوفير إحساس الغانيين علي الثقافات لدينا ، وفاركاس دانييلا لتوفير بعض المواد اللازمة لimmunostaining. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل كتلة منحة المدى من جمعية أونتاريو الصدر ؛ وأيد الدكتور ياغي أسماء من قبل منحة FSORC ، والرعاية الصحية سانت جوزيف ، هاميلتون ، اونتاريو ، كندا.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
متطلبات أخرى : حاضنة والبيولوجية مجلس الوزراء السلامة (BSC) ، الطرد المركزي ، لوحات ثقافة 100mm ، وأنابيب معقمة (15 مل ، 50 مل ، ومل 2) ، ونصائح ماصة معقمة ، والتعامل مع مشرط وريش ، مقص صغير حاد ، والمعاطف والقفازات المختبر. ويمكن الحصول على هذه من الموردين المفضل لديك.
المراجع
- Phillips, J. Growing Cells on Transwell Inserts - Tips and Techniques [Internet]. Corning Life Sciences, Technical Resources, Online Training. , (2008).
- Turi, J. L. Oxidative stress activates anion exchange protein 2 and AP-1 in airway epithelial cells. Am J Physiol Lung Cell Mol. Physiol. 283, L791-L798 (2002).
- Lechner, J. F., Haugen, A., McClendon, I. A., Pettis, E. W.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
