مقالة منهجية

ثنائي الفوتون المستندة إلى تنشيط ضوئي في الأجنة الحية اسماك الزرد

DOI:

10.3791/1902

⸱

ديسمبر 24, 2010

 ,  , 
1Molecular Cell Biology, Weizmann Institute of Science

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Multiphoton المجهري يسمح السيطرة على الفوتونات منخفضة الطاقة الضوئية مع الاختراق العميق والضيائية مخفضة. نحن تصف استخدام هذه التكنولوجيا لوضع العلامات الخلية تعيش في الأجنة الزرد. يمكن أن يكون هذا البروتوكول تكييفها بسهولة للتحريض ، صورة من الجزيئات التي تستجيب للضوء مختلف.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد ثبت تنشيط ضوئي من المركبات المستهدفة في الكائنات الحية نهجا قيما للتحقيق في العمليات البيولوجية المختلفة مثل التطور الجنيني ، مما يشير الخلوية وعلم وظائف الأعضاء الكبار. في هذا الصدد ، واستخدام متعدد الفوتون المجهري تمكن من تنشيط ضوئي الكمي وكيل معين تستجيب الضوء في الأنسجة العميقة في قرار خلية واحدة. كما الأجنة الزرد شفافة بصريا ، ويمكن رصد تنميتها في الجسم الحي. هذه الصفات تجعل من الزرد كائن نموذج مثالي للسيطرة على نشاط مجموعة متنوعة من العوامل الكيميائية والبروتينات التي تركز الضوء. نحن هنا وصف استخدام المجهر ثنائي الفوتون للحث على تنشيط فلوريسئين قفص كيميائيا ، والذي بدوره يسمح لنا لمتابعة مصير الخلايا في الأجنة الزرد حية. نحن نستخدم تعبير عن أجنة حية المعالم الوراثية (GFP) لتحديد الهدف بدقة وأية خلايا من الفائدة. ويمكن استخدام هذا الإجراء على نحو مماثل لتفعيل دقيقة بفعل ضوء البروتينات والهرمونات والجزيئات الصغيرة وغيرها من المركبات في قفص.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وصفنا بروتوكولا للوسم الخلية باستخدام فلوريسئين قفص ، ومع ذلك ، يمكن غيرها من الصور activatable الأصباغ وتستخدم بروتينات مماثلة.

1. حقن فلوريسئين محبوس

  1. تحضير 5 ٪ محلول المخزون (5mg قفص - فلوريسئين / 100 بوكل 0.2M ميكرولتر) من ديكستران - مترافق 4،5 - dimethoxy - nitrobenzyl - 2 (DMNB) في قفص فلوريسئين (10000 ميجاوات دكستران ، أنيوني ، Invitrogen ، تحقيقات الجزيئية ، كارلسباد ، كاليفورنيا ، القط. لا. D - 3310). قسامة وتخزينها في -20 درجة مئوية. علما بأن DMNB - قفص فلوريسئي....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الصور activatable المركبات هي عبارة عن جزيئات وظيفتها حتى تضاء ملثمين كانوا مع طول موجة معينة (وعادة ما فوق البنفسجية) ، الأمر الذي أدى إلى تفاعل كيميائي ضوئي يحول جزيئات في حالة نشطة بيولوجيا أو كيميائيا. هذه المجسات توفر أدوات قوية جدا في مجال البحث بيولوجيا الخلايا ، حيث يمكن تفعيل تسيطر على وجه التحديد زمانيا ومكانيا عن طريق الحد من تعرضها للضوء.

ميزة كبيرة متعددة الفوتون المجهري هو اختراقها البصرية العميقة ن.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بفضل من المقرر أن برودسكي جينيا للرسومات الشكل ؛ فياتشيسلاف Kalchenko ، لوتز دوغلاس ، وليونيد رويتمان للحصول على المشورة والمساعدة التقنية مع uncaging اثنين الفوتون ؛ مايان Tahor وسليمان Elsadin للحصول على المساعدة التقنية ؛ أوفه Strahle لتوفير خط يرجى مراسلة وneurogenin1 عاموس Gutnick للتعليقات على هذه المخطوطة. ويدعم البحوث في المختبر Levkowitz من المؤسسة الألمانية الإسرائيلية (منحة رقم 183 / 2007) ؛ إسرائيل مؤسسة العلوم (منحة رقم 928/08) وهارييت ومارسيل ديكر مؤسسة. GL هو شاغل والتنمية تاورو الرئاسة شهادة في مجال البحوث الطبية الحيوية.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الفلوريسين المقيد بـ 4,5-dimethoxy-2-nitrobenzyl (DMNB) والمقترن بالديكستران (ديكستران بوزن جزيئي 10,000 MW، أنيوني)InvitrogenD-3310مسابر جزيئية
أجاروز لمجرى الحقن والأطباق المطليةSigma-AldrichA9539
شعيرات زجاجية رقيقة الجدران مع فتيلWorld Precision Instruments, Inc.TW100F-6
جهاز سحب الماصات الدقيقةSutter Instrument Co.P-97
طرف تحميل دقيقEppendorf5242 956.003
مضخة بيكو هوائيةWorld Precision Instruments, Inc.PV820
فينيل ثيوريا (PTU)Sigma-Aldrich22290-9
أجاروز منخفض درجة الانصهار لتثبيت الأجنةUltra Pure LMP agarose16520100
شظايا Fab للفوسفاتاز القلوي (AP) المضاد للفلوريسينRoche Group11426338910
صبغة Fast RedRoche Group11496549001

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Westerfield, M. The Zebrafish Book: Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Brachydanio rerio. , University of Oregon Press. (1995).
  2. Russek-Blum, N., Nabel-Rosen, H., Levkowitz, G. High resolution fate map of the zebrafish diencephalon. Dev Dyn. 238, 1827-1835 (2009).
  3. Russek-Blum, N.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

GFP

مقالات ذات صلة