تركيب أدمغة ذبابة الفاكهة البالغة: طريقة لإعداد الشرائح للتصوير متحد البؤر

الملخص

المصدر: Kelly، S.M.، et al. تشريح وتلوين مناعي فلورسنت لجسم الفطر والخلايا العصبية المستقبلة للضوء في أدمغة ذبابة الفاكهة السوداء البالغة. J. Vis. Exp. (2017).

يصف هذا الفيديو طريقة لتركيب أدمغة سليمة من الذباب البالغ تحت شريحة جسر ويظهر البروتوكول الذي تم إجراؤه على الأدمغة الملطخة بالمناعة للفحص المجهري الفلوري.

البروتوكول

هذا البروتوكول هو مقتطف من Kelly et al. ، تشريح وتلوين الفلورسنت المناعي لجسم الفطر والخلايا العصبية المستقبلة للضوء في أدمغة ذبابة الفاكهة السوداء البالغة ، J. Vis. Exp. (2017).

فئة

1. تركيب أدمغة البالغين D. melanogaster على شرائح المجهر والتصوير

1. قم ببناء شريحة "جسر". ضع غطاءين "أساسيين" على بعد 1 سم تقريبا على شريحة موجبة الشحنة. تأكد من أن الجانب المشحون إيجابيا من الشريحة متجها لأعلى. قم بلصق الغطاء على الشريحة باستخدام طلاء الأظافر كما هو موضح في <الفئة القوية = "xfig">الشكل 1أ. عادة ما يكون من المفيد إغلاق الحواف الخارجية الثلاثة لكل زلة غطاء قاعدة بطلاء الأظافر....

النتائج

p class = "jove_content" >
الشكل 1: تركيب الأدمغة استعدادا للتصوير المناعي. (أ) يتم تثبيت الأدمغة على شرائح SuperFrost Plus بغطاء جسر لمنع تسطيح الدماغ. يتم لصق منزلتين من الغطاء "الأساسي" على شريحة Superfrost Plus مشحونة إيجابيا مع طلاء أظافر شفاف ثم يتم وضع أدمغة مشرحة على الشريحة بينهما. يتم وضع زلة غطاء "الجسر" الواضحة فوق الأدمغة ويتم إلتصاقها بزلات غطاء القاعدة. (ب) بمجرد أن يجف طلاء الأظافر ، يتم سح.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ملقط / ملاقط التشريح المجهري تيد بيلا 505-نيو متر فيكتا شيلد مختبرات ناقلات إتش -1000 شرائح SuperFrost Plus ثيرموفيشر 99-910-01 أغطية ثيرموفيشر 12-553-454 طلاء الأظافر خدمات المجهر الإلكتروني (EMS) 72180 مجهر مجسمة Leica S6D مع مصدر ضوء KL300 LED كيمويب صياد 06-666