تحضير شريحة الديدان الخيطية: طريقة لتركيب على وسادة أجار

الملخص

المصدر: Teoh ، J. S. ، وآخرون. الأساليب الكمية لدراسة الهياكل الخلوية ومورفولوجيا العضيات في Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019).

أثناء التصوير المباشر ل C. ايليجانس ، يمكن استخدام وسادة الاغاروز لتثبيت الديدان الخيطية دون إتلافها أو تجفيفها. يصف هذا الفيديو كيفية تحضير وسادة تثبيت بسيطة للفحص المجهري.

البروتوكول

هذا البروتوكول مقتبس من Teoh et al ، الأساليب الكمية لدراسة الهياكل الخلوية ومورفولوجيا العضيات في Caenorhabditis elegans، J. Vis. Exp. (2019).

إعداد الشرائح للتصوير

1. تحضير 3-4٪ وزن / حجم من مرق الاغاروز في زجاجة آمنة للاستخدام في الميكروويف (3-4 جم في 100 مل من الماء عالي النقاء).
   <فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة: يمكن استخدام أجار بدلا من الاغاروز بنفس التركيز.
2. قم بإذابة الاغاروز بعناية في فرن الميكروويف ، مع الحرص على عدم الإفراط في الغليان ، حتى يذوب كل الاغاروز (محلول شفاف). احتفظ بالمحلول عند 70 درجة مئوية لمنع التصلب.
   <فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة: يمكن استخدام مخزون Agarose عدة مرات. أعد التسخين قبل الاستخدام إذا تصلب الاغاروز.
3. باستخدام ماصة باستور ، ضع قطرة من الاغاروز المذاب على شريحة مجهرية.
   <فئة قوية = "ملاحظة" >ملاحظة: تجنب وجود فقاعات هواء في قطرة أجار لأنها تعطل سلامة الوسادة.
4. اضغط على الفور على قطرة الاغاروز بشريحة مجهرية أخرى ، وقم بتسطيح الاغاروز برفق في وسادة بين الشريحتين.
   <فئة قوية = "ملاحظة" >ملاحظة: يجب إزالة أي فقاعات متبقية في هذه المرحلة. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فيجب عمل شرائح جديدة حيث يمكن للحيوانات أن تتعثر بسهولة في الفقاعات. تجنب فيضان الأجار إلى الجانب عند الضغط على الشريحة.
5. اترك الاغاروز حتى يجف لمدة 1 دقيقة.
6. افصل الشريحتين بعناية لتجنب تلف الاغاروز ، مع ترك الوسادة الصلبة على إحدى الشرائح.
   <فئة قوية = "ملاحظة" >ملاحظة: يجب دائما تحضير الشرائح التي تحتوي على وسادات الاغاروز طازجة قبل التجربة مباشرة لأنها يمكن أن تجف. تأكد من أن وسادة الاغاروز لها سمك ثابت. يجب ألا تكون هناك فقاعات هواء أو تشققات في الوسادة لأن ذلك قد يتداخل مع التصوير.
7. أضف قطرة صغيرة (5-10 ميكرولتر) من 0.05٪ رباعي ميزون هيدروكلوريد (مخدر) إلى وسط وسادة الاغاروز.
8. باستخدام معول معقم بالحرارة ، انقل بسرعة حوالي 10-15 من صفيحة المخزون إلى قطرة التخدير قبل أن يجف المحلول. تجنب نقل الكثير من بكتيريا OP50 لأن هذا يجعل المحلول غائما ، مما قد يتداخل مع التصوير.
   <فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة: إذا جف محلول التخدير أثناء الانتقاء ، فما عليك سوى ماصة قطرة ثانية من 0.05٪ من هيدروكلوريد رباعي التترايزول على. تميل إلى الاستلقاء على جانبها الجانبي في محلول التخدير.
9. ضع غطاء عن طريق وضعه فوق وسادة الاغاروز مباشرة وإسقاطه برفق. هذا سيمنع تكوين الفقاعات. لا تضغط على الغطاء لأن هذا قد يسحق.
10. قم بتسمية الشرائح باسم السلالة.

المواد

<حدود الجدول = "0" cellpadding = "0" cellpacing = "0" نمط = "العرض: 729 بكسل ؛" العرض = "730"> قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات أجار أجار أجار < td style="العرض:124px;">ميرك <نمط TD = "العرض: 131 بكسل ؛" >1.01614.1000 < نمط td = "العرض: 316 بكسل ؛ "> الاغاروز إنفيتروجين 16500-500 < td height = "19" النمط = "الارتفاع: 20 بكسل ؛" > أغطية زجاجية # 1 العلم الحراري MENCS22221GP < ارتفاع TD = "19" النمط = "الارتفاع: 20 بكسل ؛" >أغطية زجاجية # 1.5 زييس هاتف: 474030-9000-000 صنع من قبل SCHOTT <ارتفاع TD = "19" النمط = "الارتفاع: 20 بكسل ؛" >شرائح زجاجية العلم الحراري MENS41104A/40 ماصة باستور كورنينج CLS7095D5X-200 إيه سلك بلاتيني سيغما هاتف: 267201-2 جرام تيتراميسول هيدروكلوريد سيغما L9756-5G