$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
هذا البروتوكول هو مقتطف من Possik and Pause ، قياس مقاومة الإجهاد التأكسدي ل Caenorhabditis elegans في 96 بئر Microtiter Plates ، J. Vis. Exp.(2015).
1. إجراء فحص مقاومة الإجهاد التأكسدي
- الماصة 40 ميكرولتر من محلول PQ 100 ملي (محضر طازجا) لكل بئر من صفيحة 96 بئر. استخدم ما لا يقل عن 12 بئرا كتكرار لكل حالة (علاج ، متحولة ، إلخ). باستخدام معول دودة الأسلاك البلاتينية ، انقل 5-8 يرقات L4 إلى كل بئر تشير إلى وقت البدء ووقت الانتهاء.
- عند بدء حالة أخرى، لاحظ وقت البدء ووقت الانتهاء. ضع اللوحة عند 20 درجة مئوية في وقت الحضانة بين نقل الديدان وتسجيل النافقة بعد ساعة من وقت البدء.
- باستخدام مجهر التشريح ، عد البقاء على قيد الحياة كل ساعة. رج الطبق برفق قبل البدء في العد. أشر إلى الديدان التي لا تتحرك ، حتى بعد اكتشاف ضوء عالي الكثافة ، كحيوانات ميتة. حدد أيضا عدد على قيد الحياة.
<فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة: يساعد النظر إلى شكل الدودة وذيولها وحركة الرأس بتكبير عال في تحديد الديدان الميتة من الأحياء.
- كرر هذه الخطوة كل ساعة حتى تموت معظم الديدان.
2. تحديد نسبة البقاء على قيد الحياة في كل نقطة زمنية
- احسب العدد الإجمالي للحيوانات لكل حالة عن طريق إضافة العدد الإجمالي للحيوانات المنقولة إلى كل بئر. تجاهل التي تضررت أو تقتل عند النقل.
- لكل نقطة زمنية ، احسب العدد الإجمالي للحيوانات النافقة لكل حالة (مجموع النافقة في 12 بئرا). لكل نقطة زمنية ، احسب النسبة المئوية للوفاة (عدد النافقة مقسوما على العدد الإجمالي للحيوانات ومضروبا في 100) والنسبة المئوية للبقاء على قيد الحياة (100 ناقص النسبة المئوية للوفاة).
- كرر هذا الاختبار 3 مرات مستقلة على الأقل.