تحضير عينة لعمليات التمثيل الغذائي: طريقة لتحضير عينات الخلايا للتنميط المستقلب

Abstract

المصدر: Zhao، Y. C. et al.، أنظمة بيولوجيا التنظيم الأيضي عن طريق إشارات مستقبلات هرمون الاستروجين في سرطان الثدي. J. Vis. إكسب. (2016).

يصف هذا الفيديو تقنية لإعداد عينات خلايا سرطان الثدي لتنميط المستقلب. يتم علاج خلايا سرطان الثدي بالاستراديول ، الذي يرتبط بمستقبلات هرمون الاستروجين ألفا ويسبب تغييرا في تكوين المستقلب.

Protocol

1. إعداد عينة فحص التمثيل الغذائي

1. زراعة الخلايا وعلاجها
   1. بذور 400,000 MCF7 خلية لكل صفيحة 10 سم في وسط النمو. لكل علاج ، قم بإعداد ثلاث عينات. استخدم لوحين في كل عينة لتلقي خلايا كافية للاكتشاف. في اليوم 3 ، قم بإزالة الوسط وأضف 5 مل من الوسط الطازج مع أو بدون ^10-8 M Estradiol أو E2 إلى الخلايا. عالج الخلايا لمدة 24 ساعة (37 درجة مئوية في جو مرطب بنسبة₅٪ ثاني أكسيد الكربون
   ).
2. جمع العينات
   1. أضف 5 مل من الثلج البارد 1x PBS إلى الطبق ، واستنشق PBS بعد إمالة اللوحة لفترة وجيزة عدة مرات. كرر مرتين ، وقم بإزالة أكبر قدر ممكن من PBS بعد الغسيل الأخير.
   2. أضف 750 ميكرولتر من الأسيتون قبل ....