Method Article

جبلة المحوار من عزل العصب الوركي الجرذ

DOI:

10.3791/2087

⸱

September 24th, 2010

 ,  , 
1Department of Biological Chemistry, Weizmann Institute of Science

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نظهر بروتوكول للعزلة جبلة المحوار من العصب الوركي الجرذان الكبار على أساس تشريح الأعصاب وكراسات الحضانة في المتوسط ​​للإفراج ناقص التوتر وليز الميلين غير محواري الهياكل ، تليها استخراج المواد محوار التخصيب المتبقية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بمعزل عن السيتوبلازم محواري النقي (جبلة المحوار) من الأعصاب الطرفية أمر حاسم للدراسات الحيوية في العديد من العمليات البيولوجية. في هذه المقالة ، علينا أن نظهر ووصف بروتوكول للعزلة جبلة المحوار من العصب الوركي الجرذان الكبار على أساس الخطوات التالية : (1) تشريح الأعصاب والكراسات فصل النسيج الضام ، (2) حضانة شرائح قصيرة من الكراسات في العصب المتوسط ​​ناقص التوتر الافراج الميلين وليز غير محواري الهياكل ، و (3) استخراج المواد محوار التخصيب المتبقية. أكدت توصيف البروتين والبيوكيميائية هذا المستحضر على درجة عالية من التخصيب لمكونات المحاور.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا البروتوكول يسمح العزلة جبلة المحوار مع التقليل من تلوث الأنسجة والأوعية الدموية الدبقية. الأسلوب غلة حوالي 70-100 ميكروغرام جبلة المحوار البروتين الكلي الواحد الفئران الأسبوع 80-10 يستار القديمة.

1. تشريح الأعصاب الوركي

  1. الموت ببطء two الفئران عن طريق استنشاق أول أكسيد الكربون 2 تليها خلع عنق الرحم. تأكيد الموت لعدم وجود تحسس نبض القلب قبل بداية تشريح.
  2. المسحة مجال التشريح مع الايثانول 70 ٪.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد أكدت التحاليل البيوكيميائية والبروتين أن هذا الإجراء يقلل من تلوث الدم والخلايا الدبقية 3 بالمقارنة مع الأساليب المذكورة سابقا لعزل جبلة المحوار بواسطة الضغط الميكانيكي 1. وقد استخدمنا هذا البروتوكول العزلة جبلة المحوار لاستكشاف داينين ​​المستندة إلى إشارات إلى الوراء بعد إصابة العصب الوركي 2 ، وتتوقع أن تكون ذات منفعة في استكشاف عمليات أخرى كثيرة في الأعصاب الطرفية الكبار ، بما في ذلك محور عصبي - الدبقية التفاعلات 4.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

  • الفئران الذكور ويستار (8-10 أسابيع من العمر)
  • PBS PBS 0.2X والحلول التي تحتوي على الأنزيم البروتيني 1X مثبطات (Roshe) 2 حبة لكل 50 مل
  • Eppendorfs مقابل 1.5 مل
  • تعقيم الصحون البلاستيكية 35 مم
  • تشريح الأدوات بما في ذلك : مقص وملقط غرامة
  • مجهر والجدول ضوء

الأضداد

وكان الماوس المضادة للاستنساخ GFAP GA - 5 من سيغما (G6171). كان الأرنب مكافحة الزلال من Cedarlane (CLAG5140). والماوس المضادة للتويولين β3 والأرانب مكافحة gERK من سيغما (T2200 وM5670 على التوالي).

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hanz, S., Perlson, E., Willis, D., Zheng, J. Q., Massarwa, R., Huerta, J. J., Koltzenburg, M., Kohler, M., van-Minnen, J., Twiss, J. L. Axoplasmic importins enable retrograde injury signaling in lesioned nerve. Neuron. 40, 1095-1104 (2003).
  2. Michaelevski, I., Medzihradszky, K. F., Lynn, A., Burlingame, A. L., Fainzilber, M.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Axoplasm IsolationSciatic Nerve DissectionHypotonic Medium IncubationIsotonic Solution CentrifugationWestern Blot AnalysisNerve Fascicle SeparationConnective Tissue RemovalAxonal Component EnrichmentProteomic CharacterizationProtein Concentration Measurement

Related Articles