وأعدت خلايا جذعية عصبية من الحصين غير أخلاقي السبات رضيع أبن سنة السناجب البرية في القطب الشمالي (AGS). ويمكن توسيع هذه الخلايا الجذعية العصبية من خلال ممرات عديدة ، متباينة ، والحفاظ على الخلايا العصبيه 50:50 تقريبا لثقافة الدبقية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نمو وتمايز الخلايا القطب الشمالي الأرضي الكبار السنجاب الجذعية العصبية الحصين
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
السناجب البرية في القطب الشمالي (Urocitellus parryii ، AGS) هي فريدة من نوعها في قدرتها على السبات مع درجة حرارة الجسم الأساسية القريب أو ما دون درجة التجمد 1. هذه الحيوانات كما تقاوم الإصابة الدماغية الى الدماغ في الجسم الحي و2،3 الأوكسجين الجلوكوز الحرمان 4،5 في المختبر. وفرت هذه الصفات الفريدة دافعا لعزل الخلايا العصبية لدراسة خصائص AGS العصبية الكامنة التي يمكن أن تشكل قدرة على مقاومة الخلايا العصبية AGS الإصابات والوفيات الناجمة عن نقص التروية الخلية ودرجات حرارة شديدة البرودة. ويمكن التعرف على البروتينات أو أهداف الجينات التي تسمح للخصائص المميزة لهذه الخلايا تساعد في اكتشاف علاجات فعالة لعدد من المؤشرات ونقص تروية لدراسة التسامح الباردة. الكبار AGS الحصين يحتوي على خلايا الجذعية العصبية التي لا تزال تتكاثر ، مما يسمح للتوسع سهل من هذه الخلايا الجذعية في الثقافة. نحن هنا وصف الأساليب التي يمكن للباحثين الاستفادة من هذه الخلايا الجذعية العصبية ومتمايزة عن أي عدد من الأغراض. ويمكن باتباع هذه الخطوات بشكل وثيق يمكن توسيع الخلايا الجذعية العصبية AGS من خلال اثنين من الممرات أو أكثر ومن ثم كانت متباينة إلى ثقافة عالية في TUJ1 إيجابية الخلايا العصبية (~ 50 ٪) دون اللجوء إلى استخدام المواد الكيميائية السامة إلى تقليل عدد الخلايا المنقسمة. الإسكيمية يدفع الخلايا العصبية (6) وتكوين الخلايا العصبية التي العائدات عبر مجاهدي خلق / إرك ومسارات بقاء PI3K/Akt يشير يساهم في مقاومة نقص التروية في الجسم الحي في المختبر 7 و 8 (كيليهر اندرسون ، ودرو وآخرون ، قيد الإعداد). ويمكن توصيف هذه الخلايا مزيد من العصبية فريدة من نوعها تقدم على جبهات عديدة ، وذلك باستخدام بعض أو كل من هذه الأساليب.
البروتوكول
1. AGS الخلية الجذعية العصبية ، وإعداد وسائل الإعلام
- ويمكن الآن للبالغين الارض في القطب الشمالي الحصين السنجاب (AGS) عزل الخلايا الجذعية العصبية بطريقة الموصوفة سابقا يمكن الحصول على 9 تجاريا باسم قارورة cryopreserved. يتم شحنها بين عشية وضحاها في الخلايا التي تحتوي على مجموعات معزولة الثلج الجاف للتأكد من أن الخلايا تبقى في حالة cryopreserved. للحفاظ على سلامتها ، فك الخلايا فور استلامها وتخزينها في أقل من -150 درجة مئوية ، أو في مرحلة البخار من ديوار النيتروجين السائل.
- إعداد ب....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
AGS خلايا البالغين الجذعية العصبية هي قوية ويمكن توسيعها لفقرات عديدة مما يجعلها مصدرا ممتازا للخلايا الجذعية العصبية لدراسة الخصائص الأساسية في الخلايا الجذعية العصبية. معدل التوسع هو واحد تقريبا يتضاعف كل 24 ساعة ، ولكن يجب أن تكون هذه الخلايا passaged قبل الوصول إلى نقطة التقاء لأن الاتصال بين الخلايا والتمايز لصالح النجمية. سوف اتصل بوساطة تمايز سبب ذلك نسبة لعدد من الخلايا العصبية خلية الإجمالي إلى الانخفاض بشكل كبير ، وإذا كان التمايز يبدأ قبل trypsinization والمرور. ويوضح ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
JA - كيليهر اندرسون هو مؤسس وNeuronascent هو مخترع على أرض الواقع في القطب الشمالي تطبيقات براءات الاختراع السنجاب. Neuronascent يتلقى الإتاوات على بيع وسائل الاعلام AGS والخلايا الجذعية. ويعمل الصليب الأحمر ماكجي بواسطة شريان الحياة ، وشركة والتي تقوم بتوزيع وسائل الإعلام وAGS الخلايا الجذعية العصبية.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل عن طريق البحث الطبي التابع للجيش الأميركي والعتاد منح قيادة # 05178001 و06 - NS041069 من المعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية. نشكر جويل Vonnahme لتعليقات مفيدة على البروتوكول.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| agsNSC | Lifeline Cell Technology | FC-0004 | |
| مجموعة توسيع agsNSC | Lifeline Cell Technology | LL-0008 | مصدر بديل لـ DMEM/F12 و B27 و rhFGFb (www.invitrogen.com) |
| مجموعة تمايز agsNSC | Lifeline Cell Technology | LL-0009 | مصدر بديل لـ DMEM/F12 و ITS-x (www.invitrogen.com) |
| مجموعة أوساط صيانة NeuraLife | Lifeline Cell Technology | LL-0012 | المصادر البديلة هي NeuraBasal (LifeLine) أو Neurobasal (in vitrogen)، والجلوتامين و B27 (www.invitrogen.com) يتم الحفاظ على الخلايا المتمايزة لمدة تصل إلى 3 أسابيع في NeuroLife، ولكن ليس أكثر من أسبوعين في Neurobasal (www.invitrogen.com) |
| ميكروميتر (مثل غرفة عد Bright Line) | Hausser Scientific | 1490 | http://www.hausserscientific.com/hausserbrightlinedirect.htm |
| أطباق 96 بئر مطلية بـ Biocoat Poly-L-Lysine | BD Biosciences | 356516 | www.bdbiosciences.com |
| رؤوس ماصات ذات فتحات واسعة | Fisher Scientific | 02-707-141 | لتجنب تلف الخلايا العصبية عند السحب بالماصة. http://www.fishersci.com |
المراجع
- Barnes, B. M. Freeze avoidance in a mammal: body temperatures below 0 degree C in an Arctic hibernator. Science. 244, 1593-1595 (1989).
- Dave, K. R., Prado, R., Raval, A. P., Drew, K. L., Perez-Pinzon, M. A. The Arctic ground squirrel brain is res....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
