ونحن نقدم لإعداد بروتوكول مفصلة الخلايا الأولية فصلها عن Drosophil A الأجنة. فإن القدرة على تنفيذ اضطراب رني فعالة ، جنبا إلى جنب مع غيرها من أساليب التصوير الجزيئي والكيمياء الحيوية ، والخلايا يسمح بالتصدي لمجموعة متنوعة من الأسئلة في ذبابة الفاكهة الخلايا الأولية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الخلية الأولية من الثقافات ذبابة الفاكهة الأجنة المعيدة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
نحن هنا تصف طريقة لإعداد وزراعة الخلايا الأولية من أجنة فصل المعيدة ذبابة الفاكهة. وتجمع في سطور ، وكمية كبيرة من الأجنة من الذباب ونظم الشباب وصحية ، وتعقيمها ، ثم فصلها ماديا في تعليق خلية واحدة باستخدام الخالط الزجاج. بعد أن مطلية على لوحات أو الثقافة أو الشرائح غرفة في كثافة متوسطة المناسبة في الثقافة ، ويمكن تمييز هذه الخلايا الى مزيد من عدة أنواع الخلايا شكليا ، متميزة ، والتي يمكن تحديدها بواسطة علامات على خلايا محددة. وعلاوة على ذلك ، فإننا نقدم لمعالجة ظروف هذه الخلايا مع مضاعفة الرناوات (DS) الذين تقطعت بهم السبل للحصول ضربة قاضية الجينات. ويتم إنجاز رني كفاءة في خلايا ذبابة الفاكهة الابتدائي بحلول الاستحمام ببساطة الخلايا في مستنبت المحتوية على الرنا المزدوج الجديلة. القدرة على القيام بأنشطة فعالة رني اضطراب ، جنبا إلى جنب مع غيرها ، والكيمياء الحيوية الجزيئية وتحليل التصوير الخلية ، وسوف يسمح للإجابة عن أسئلة متنوعة من ذبابة الفاكهة في الخلايا الأولية ، وخصوصا تلك التي تتصل العضلات متباينة ، والخلايا العصبية.
البروتوكول
1. إعداد أقفاص الطيران
- تنمو ذبابة الفاكهة (من النوع البري سلالات مثل ولاية أوريغون - R أو التركيب الوراثي وجدت) في حاويات ملائمة للحشرات مثل الكؤوس 32 اوز.
- نقل الذباب eclosed حديثا إلى أقفاص كبيرة لجمع الأجنة أو يطير أقفاص السكان.
- نقل الأقفاص في غرفة مع درجة حرارة 25 درجة مئوية ~ والرطوبة 65 ٪ ~ في ضوء ال 12 ساعة ومظلم 12 ساعة دورة لتسهيل جمع الأجنة متزامن.
- الحفاظ على الذباب في الأق....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يمكن للنمط التنموية الثقافات الرئيسي للخلايا ذبابة الفاكهة تختلف اختلافا كبيرا ، ربما يعود ذلك الى العديد من المتغيرات أثناء عملية التحضير الخلية الأولية. ينبغي أولا وقبل كل شيء يطير المستخدمة لوضع البيض يكون الشباب (في غضون أسبوع من العمر) والصحية (خالية من عدوى فيروسية أو بكتيرية). ويجب تجنب أجنة غير مخصبة أو المصابين ، كما أنها غير مجدية والخلايا المشتقة من هذه الأجنة لا يمكن التفريق ، وسوف البقاء على قيد الحياة فقط لمدة 1-2 أيام. الثانية ، خلال عملية التجانس ، فمن الم.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
كان مدعوما من قبل JB ديمون رونيون زمالة مؤسسة أبحاث السرطان DRG - 1716-1702. وأيد JZ المعاهد الوطنية للصحة / NIGMS زمالة GM082174 F32 - 02. NP هو محقق من معهد هوارد هيوز الطبي.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| وسط Shields and Sang M3 | Sigma-Aldrich | S3652 | |
| مصل جنين البقر | JRH Biosciences | 12103-500M | |
| إنسولين من بنكرياس البقر | Sigma-Aldrich | I-6634 | |
| أقفاص كبيرة لجمع الأجنة | Genesee Scientific | 59-101 | |
| منخل اختبار قياسي أمريكي #25 | VWR international | 57334-454 | |
| منخل اختبار قياسي أمريكي #45 | VWR international | 57334-462 | |
| منخل اختبار قياسي أمريكي #120 | VWR international | 57334-474 | |
| مطحنة أنسجة Dounce، Wheaton بسعة 7 mL | VWR international | 62400-620 | |
| مطحنة أنسجة Dounce، Kontes بسعة 40 mL | VWR international | KT885300-0040 | |
| مطحنة أنسجة Dounce، Kontes بسعة 40 mL | VWR international | KT885300-0100 | |
| طبق Costar بـ 384 بئراً | VWR international | 29444-078 | |
| غطاء زجاجي حجري Lab-Tek II | Fisher Scientific | 171080 |
المراجع
- Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. Laboratory culture of Drosophila. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, New York. 588-599 (1999).
- Bai, J., Hartwig, J. H., Perrimon, N. S. A. L. S. a WH2-domain-containing protein, promotes sarcomeric actin filament elong....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
