مقالة منهجية

اختبار الحضانة لدراسة التفاعلات التنافسية بين السلالات البكتيرية

سبتمبر 26, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Speare, L., et al. مقايسة حضانة العملة لقياس التفاعلات التنافسية بين عزلات Vibrio fischeri . J. Vis. خبرة. (2019)

يوضح هذا الفيديو مقايسة الحضانة المشتركة المستخدمة لدراسة كيفية تنافس السلالات البكتيرية في بيئة مشتركة. يتم تطبيقه على نطاق واسع في علم الأحياء الدقيقة لتحديد الآليات ، مثل القتل المعتمد على الاتصال أو القتل المستقل عن الاتصال ، التي تدفع هذه التفاعلات.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. سلالات الحضانة (الشكل 1 ب ، ج)
    1. امزج السلالة المرجعية والسلالة المنافسة بنسبة 1: 1 (v / v) عن طريق إضافة 100 ميكرولتر من كل سلالة (تم تطبيعها إلى OD 1.0) إلى أنبوب طرد مركزي مسمى 1.5 مل. كعنصر تحكم ، امزج السلالة المرجعية مع نسخة ذات علامات تفاضلية من نفسها (السلالة المرجعية pVSV102 + السلالة المرجعية pVSV208). هذا التحكم مطلوب للتحليل الإحصائي اللاحق لتحديد ما إذا كان وجود سلالة منافسة يؤثر على نمو السلالة المرجعية. دوامة ثقافة الإجهاد المختلط لمدة 1-2 ثانية.
      ملاحظه: قد تتطلب هذه الخطوة تحسينا لأن نسبة البداية يمكن أن تؤثر بشكل كبير على النتائج وقد تحتاج إلى تعديل.
    2. كرر الخطوة 1 لكل تكرار بيولوجي. بعد الانتهاء من هذه الخطوة ، يجب أن يكون هناك ما مجموعه ثمانية أنابيب ذات سلالات مختلطة: أربعة تكرارات بيولوجية مع سلالات مرجعية ذات علامات تفاضلية (تحكم) ، وأربعة نسخ مكررة بيولوجية مع سلالات مرجعية ومنافسة ذات علامات تفاضلية (تجريبية).
    3. بقعة 10 ميكرولتر من كل عنصر تحكم وخليط تجريبي على ألواح بتري تحتوي على أجار LBS ؛ سيتم استخدام هذه البقع الاستزراعية للفحص المجهري الفلوري بعد الحضانة.
    4. اترك البقع تجف تماما على المقعد حتى يتم امتصاص كل السائل في الأجار ، واحتضن ألواح بتري عند 24 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. مطلوب ما لا يقل عن 15 ساعة ل V. fischeri سلالات الموسومة ب pVSV102 و pVSV208 لتنمو إلى كثافة خلية عالية بما يكفي لتصور البروتين الفلوري الأخضر (GFP) والبروتين الفلوري الأحمر (RFP) ، على التوالي ، على مستوى السكان باستخدام مجهر تشريح مضان. هنا ، نستخدم حضانة لمدة 24 ساعة لتصوير البقع المختلطة.
      ملاحظه: من المهم استخدام أطباق ليست رطبة جدا أو جافة جدا. إذا كانت الألواح رطبة جدا ، فلن يتم امتصاص بقع الحضانة في لوحة أجار ؛ تجنب استخدام الأطباق المصبوبة في نفس اليوم. إذا كانت الصفائح جافة جدا ، فقد تتشكل موجات صغيرة أو تشققات على سطح أجار ، مما يجعل بقع الحضانة غير منتظمة الشكل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
figure-results-1

الشكل 1: مخطط انسيابي يوضح مقايسة الحضانة. (أ) السلالات البكتيرية التي تحتوي على إما pVSV102 (السلالة المرجعية المشار إليها المرجع سلالة أو RS) أو pVSV208 (السلالة المنافسة المشار إليها Comp. سلالة أو CS) تزرع بشكل منفصل على وسائط ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1.5 مل أنابيب الطرد المركزي الدقيقةصياد05-408-129 
ماصة متعددة القنوات سعة 10 ميكرولتر   
ماصة متعددة القنوات سعة 100 ميكرولتر   
ماصة متعددة القنوات سعة 300 ميكرولتر   
ماصة أحادية القناة سعة 10 ميكرولتر   
ماصة أحادية القناة سعة 20 ميكرولتر   
ماصة أحادية القناة سعة 200 ميكرولتر   
ماصة أحادية القناة سعة 1000 ميكرولتر   
لوحات 24 بئرصياد07-200-84معقم مع غطاء
لوحات بتريصيادFB0875713معقم مع غطاء
نظام بدء التشغيل TipOne 0.1-10 ميكرولترالولايات المتحدة الأمريكية العلمية1111-350010 رفوف
نظام بدء تشغيل TipOne 200 ميكرولترالولايات المتحدة الأمريكية العلمية1111-50010 رفوف
نظام بدء التشغيل TipOne 1000 ميكرولترالولايات المتحدة الأمريكية العلمية1111-252010 رفوف
وسائط LBS
1M Tris Buffer (الرقم الهيدروجيني ~ 7.5)  50 مل 1 متر مخزن مؤقت (62 مل حمض الهيدروكلوريك ، 938 مل ماء DI ، 121 جم قاعدة Trizma)
اجارفيشر الفنيDF0812-17-915 جم (أضف فقط للأطباق
ماء DI  950 مل
كلوريد الصوديومصيادS640-320 جرام
التربتونصيادBP9726510 جرام
مستخلص الخميرةصيادBP9727-25 جرام

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة