اختبار في المختبر لدراسة التفاعلات الميكروبية في الزراعة المشتركة

الملخص

المصدر: تيمكين، إم. آي. وآخرون. اختبارات الزراعة المشتركة عالية الإنتاجية لدراسة التفاعلات الميكروبية. J. Vis. Exp. (2019)

يعرض هذا الفيديو اختبارا في المختبر لدراسة التفاعلات الميكروبية بين كورينباكتيريوم بروبينكوم والمكورات العنقودية في زراعة مشتركة.

البروتوكول

1. تلقيح الكائن المستهدف

ملاحظة: بعد الحضانة الليلية، تأكد من أن الزراعة عكرة. بعض المزارع البكتيرية قد تتجمع في أسفل أنبوب الزراعة. قم بتدوير أنابيب الزراعة لتوزيع الكتل وتقييم عكارة الثقافة.

1. جهز الطبق المستهدف بملء كل بئر من طبق فارغ يحتوي على 12 بئر بسعة 1.8 مل من مرق تسريب الدماغ والقلب (BHI) و200 ميكرولتر من الزراعة المستهدفة طوال الليل.
   ملاحظة: يشير الكائن المستهدف إلى الكائن الذي يتم تحديد حالة تثبيطه باستخدام اختبار تفاعل الزراعة المشتركة. في هذه التجربة، الكائنات المستهدفة هي أنواع المكورات العنقودية المعزولة من عينات غسيل أنف بشري.
2. افتح الغلاف وضع ختم تلقيح معقم في لوحة الهدف. حرك الثقافات بلطف في الآبار، مع الحرص على ألا تتقاطع المزارع في الآبار المجاورة.
3. ارفع ختم التلقيح وتأكد من وجود قطرة من الزراعة المستهدفة المخففة على كل طرف ختم.
4. جهز لوحة تحكم أحادية الزراعة عن طريق وضع ختم التلقيح على لوح اختبار حيوي غير ملقح وهز الختم بلطف بحيث تتلقى قطرة الزراعة كل بئر. بمجرد إزالة ختم اللقاح، يجب أن تكون قطرة من الزراعة مرئية في آبار صفيحة الاختبار الحيوي.
   1. إذا لم يتم تحصين أي آبار بختم التلقيح بسبب عدم توازن مستويات الوسط، ضع 3 ميكرولتر من الزراعة المخففة ليلا على الجانب الأيمن من الآبار باستخدام ماصة.
5. قم بتحصين ألواح التحليل الحيوي كما تم أعلاه (انظر الخطوة 1.4.1)، لكن محاذاة الختم بحيث تتوافق الأطراف مع الجانب الأيمن من صفيحة 12 بئرا. تأكد من أن الطابع لا يلامس مستعمرة البكتيريا الموجودة عند تلقيح الآبار.
6. أزل الختم بعناية وأعاده إلى اللوحة المستهدفة.
7. كرر عملية التلقيح لكل لوح اختبار حيوي حتى يتم تطعيم جميع الصفائح.
8. حضن ألواح الفحص الحيوي مقلوبة عند درجة الحرارة المناسبة لمدة 7 أيام.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
صفيحة زراعة خلايا بسعة 12 بئر، معقمة مع غطاء	جراينر بيو-ون	665 180
آغار، علم بكتيريا	VWR	J637
مرق حقن القلب الدماغي	دوت ساينتفيك	DSB11000-5000