تحقيق وتطبيق القياسات المباشرة للقوات على الخلايا العصبية في نطاق microdyne 2000-1000 بدقة عالية باستخدام الإبر الزجاجية معايرة. ويمكن استخدام هذه المنهجية لمراقبة وقياس جوانب عديدة من التنمية المحاور ، بما في ذلك الشروع المحاور ، المحاور التوتر ، سرعة استطالة محواري ومتجهات القوة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
معالجة ميكانيكية من الخلايا العصبية للسيطرة على تطوير محواري
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ويمكن تحقيق التلاعب الخلية وتوسيع محاور الخلايا العصبية مع زجاج معايرة الدقيقة الألياف قادرة على قياس وتطبيق القوات في نطاق 1،2 1-10 μdyne. ويتم الحصول على قياسات القوة من خلال الملاحظة من Hookean الانحناء من الإبر والزجاج ، والتي هي محسوبة من الطريقة المباشرة والتجريبية 3. موصوفة بشكل كامل الاحتياجات من المعدات وإجراءات لافتعال ، ومعايرة ، وعلاج ، واستخدام الإبر على الخلايا. قوة الأنظمة أنواع الخلايا المستخدمة سابقا والمختلفة التي طبقت هذه التقنيات إبداء المرونة في المنهجية وتعطى كأمثلة عن التحقيق في المستقبل 4-6. مزايا التقنية هي مستمرة "تصور" للقوات التي تنتجها التلاعب والقدرة على التدخل مباشرة في مجموعة متنوعة من الأحداث الخلوية. وتشمل هذه التحفيز المباشر وتنظيم النمو وانكماش محواري 7 ، وكذلك القياسات الميكانيكية ومفرزة على أي نوع من الخلايا المستنبتة 8.
البروتوكول
1. الإبر صنع الزجاج.
- يتم استخدام إبرة قابل للتعديل الجزئي مجتذب الى افتعال الإبر مع طرف مدبب حوالي 4 ملم طولا والتي هي مغلقة الكمرات الصلبة. خلافا لنصيحة مرنة طويلة ، وهذا باختصار طول حدود 4 مم الاهتزازات من طرف الإبرة خلال التجارب. في المنطقة القريبة من الألياف 4 ملم ، والإبرة يضمحل بسرعة من قطر الأنبوب الزجاجي إلى 15 ميكرومتر في حدود 1 ملم ، في حين أن القاصي أقصى 1 ملم من الألياف هو 2.5 ميكرون في القطر. نستخدم الأنابيب الشعرية R - 6 الزجاج ، OD 0.9 ملم ، 0.6 ملم معرف طول 8 "ومجتذب BB - CH. إذا كان المحقق مهتمة في قياس مدى قوة أخرى ، وا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تقنيات لتطبيق وقياس قوات الخلوية لديها تاريخ طويل 9. كان الدافع أصلا لدينا وسيلة لعمل براي دينيس ، الذين استخدموا الإبر والزجاج مماثلة لبلدنا أن الخلايا العصبية 'جر' بمعدل ثابت باستخدام جهاز آلية هيدروليكية 10. هناك العديد من وسائل بديلة لتطبيق قوى للخلايا والتي تشمل : السائر المحركات 11 ، 12 حبات المغناطيسي ، الأشعة microfabricated 13 و 14 تدفق السوائل. هذه الأخيرة هي مماثلة لنهجنا في هذا هو في نهاية المطاف.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
نحن نعترف بامتنان بالمساهمات الهامة للE. الدكتور روبرت Buxbaum في تطوير هذه المنهجية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أنبوب R-6 cap. | Drummond Scientific | 9-000-3111 | زجاج R-6، القطر الخارجي 0.9mm، القطر الداخلي 0.6 mm، بطول 8" |
| جهاز سحب BB-CH | Mecanex S.A., Geneva, Switzerland | BB-CH puller | استخدم الوضع 4 Alt بالقيم CP=100, PP=10, SP1=1000, SP2=1000 |
| سلك Chromel بقطر 0.001" | Omega Engineering, Inc. | SPCH-001-50 | سلك مزدوج حراري غير مغلف، بكرة بطول 50ft، يُسمى الآن Chromega |
| سلك Constatan بقطر 0.003" | Omega Engineering, Inc. | SPCI-003-50 | سلك مزدوج حراري غير مغلف، بكرة بطول 50 ft |
| ملقط دقيق | Fine Science Tools | 91150-20 | Dumont Inox #5 |
| حامل مجهر عالمي بذراع تمديد | Nikon Instruments | 76135 or 90430 | معظم العلامات التجارية أو أنواع حوامل أذرع التمديد ستفي بهذا الغرض |
| متحكم ميكرومانيبيوليتور ميكانيكي | Narishige International | M-152 | متحكم ميكرومانيبيوليتور خشن ثلاثي المحاور بدفع مباشر |
| متحكم ميكرومانيبيوليتور هيدروليكي | Narishige International | MO-203 | متوفر الآن تحت مسمى MMO-203، من النوع ثلاثي المحاور المتحركة |
| حامل إبر | Leica Microsystems | 11520145 | مجموعة من 3 |
| حامل أداة فردي | Leica Microsystems | 11520142 | |
| حامل أداة مزدوج | Leica Microsystems | 11520143 | |
| متحكم ميكرومانيبيوليتور ميكانيكي | Leica Microsystems | 39430001 | تركيب على عمود، حامل مسبار واحد، طراز RH 430001 |
| متحكم ميكرومانيبيوليتور ميكانيكي بعصا تحكم | Leica Microsystems | 11520137 | |
| Leica DM IRB | Leica Microsystems | مجهر مقلوب | |
| طاولة عزل Vibraplane | Kinetic Systems | 1200 series | طرازنا هو 1201-02-12 |
| حاضنة Ringcubator | صناعة منزلية (راجع المرجع 19) | المرجع 19، تتطلب وحدة تحكم محدثة مدرجة أدناه | |
| وحدة تحكم في درجة الحرارة قابلة للبرمجة | Instrumart.com | Fuji Electric PXR3 | تحل محل وحدة التحكم في درجة الحرارة PXV3 المتقاعدة |
| Nikon Diaphot TMD | Nikon Instruments | مجهر مقلوب، إصدار عام 1980 تقريبًا | |
| مجهر تشريح ثنائي العينين Nikon SMZ-10 | Nikon Instruments | ستفي مجاهر التشريح الأخرى بالغرض |
المراجع
- Zheng, J., Buxbaum, R. E., Heidemann, S. R. Measurements of growth cone adhesion to culture surfaces by micromanipulation. J Cell Biol. 127, 2049-2060 (1994).
- Chada, S., Lamoureux, P., Buxbaum, R. E., Heidemann, S. R. Cytomechanics of neurite outgrowth from chick brain neurons. <....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
