وصفت طريقة جديدة لتغليف جريب مبيضي في شبكة الليفين - 3D ألجينات الإختراق. هذا النظام يجمع بين الدعم الهيكلي مع تدهور بروتين لدعم التنمية في بصيلات غير ناضجة لانتاج البويضات الناضجة. ويمكن تطبيق هذا الأسلوب لخلية المجاميع الثقافة للحفاظ على الخلية خلية الاتصالات دون الحد من التوسع.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
وهناك طريقة لتغليف المسام المبيض والثقافة في نظام 3 تحلل Proteolytically الأبعاد
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
جراب المبيض هو الوحدة الفنية للالمبيض التي تفرز الهرمونات الجنسية وتدعم نضوج البويضة في المختبر تقنيات جريب توفير أداة لتطوير نموذج جريب من أجل التحقيق في البيولوجيا الأساسية ، وكذلك يجري تطويرها كأسلوب للحفاظ على الخصوبة في عيادة 1-4. ثقافتنا المختبر في النظام يعمل الهلاميات المائية من أجل محاكاة البيئة الأصلية المبيض عن طريق الحفاظ على العمارة الجريبي 3D ، خلية خلية التفاعلات ويشير هذا التطور نظير الصماوي جريب المباشر 5. سابقا ، كانت تربيتها بنجاح في بصيلات الجينات ، وهو خامل الطحالب المستمدة من السكاريد أن يخضع تهليم مع أيونات الكالسيوم 6-8. والهلاميات المائية ألجينات شكلت في تركيز 0.25 ٪ ث / ت الأكثر تساهلا للثقافة جريب ، والإبقاء على أعلى كفاءة التنموية 9. ألجينات الهلاميات المائية ليست قابلة للتحلل ، وبالتالي زيادة في النتائج قطرها جريب في قوة ضاغطة على المسام التي يمكن أن تؤثر نمو بصيلات 10. بعد ذلك قمنا بتطوير نظام ثقافة تستند على شبكة الليفين - ألجينات الإختراق (FA - IPN) ، والتي هي خليط من تبلور الليفين والجينات في وقت واحد. هذا المزيج يوفر بيئة حيوية لأن كلا من مكونات ميكانيكية تساهم في مصفوفة الصلابة في البداية ، ولكن البروتياز التي يفرزها جريب تزايد تدهور الليفين في المصفوفة ترك الجينات فقط لتقديم الدعم. مع IPN ، يمكن خفض محتوى ألجينات أدناه 0.25 ٪ ، وهو غير ممكن مع الجينات وحدها 5. وهكذا ، كما توسع المسام ، وسوف تواجه قوة ضاغطة بسبب انخفاض لمحتوى المواد الصلبة مخفضة. هنا ، نحن تصف طريقة التغليف والثقافة في المختبر نظام لجريبات المبيض داخل FA - IPN. البيئة الحيوية الميكانيكية يحاكي البيئة الطبيعية في المبيض الذي المسام الصغيرة الموجودة في القشرة الصلبة والانتقال إلى لب أكثر تساهلا لأنها تزيد في حجم 11. قد يكون العنصر الحاسم للتحلل ولا سيما بالنسبة للترجمة السريرية من أجل دعم أكبر من 10 6 أضعاف الزيادة في حجم المسام التي تخضع عادة الإنسان في الجسم الحي.
البروتوكول
1. جريب العزل
وقد أجريت تجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعتها المعاهد الوطنية للصحة دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية والتي أنشئت استخدام الحيوان المؤسسية وبروتوكول العناية في جامعة نورث وسترن.
لأفضل النتائج ، يتم تنفيذ جميع التشريح في L15 سائل الإعلام من أجل السيطرة على مستويات الحموضة المحيط من ثاني أكسيد الكربون 2 ، 37 درجة مئوية على مراحل ساخنة للتحكم بدرجة الحرارة ، وعلى مقاعد البدلاء النظيفة للحد من التلوث الجرثومي. وسائل الإعلام مستعدة تشريح (D....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
جراب المبيض قدم طريقة التغليف في FA - IPN يسمح الثقافة جريب في بيئة 3D في المختبر. FA - A IPN هي عملية ديناميكية وتستجيب للخلية في المصفوفة التي تحدد الخصائص الميكانيكية الأولية عن طريق الجمع بين كل من الليفين والجينات. خلال الثقافة ، وتنشيط بصيلات مغلفة البروتياز التي تحط من مكون واحد فقط من IPN ، والليفين ، مما يؤدي الى تناقص تدريجي جمود هلام التي ساهمت فقط من الجينات المتبقية في نهاية الثقافة. وقد اقترحت الخصائص الميكانيكية الحيوية التي تم الحصول عليها مع FA - IPN لتكو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة (وU54HD41857 PL1EB008542 والحيوية الأساسية P30 ضمن منحة اتحاد Oncofertility خارطة الطريق).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| فيتوين (Fetuin) | Sigma-Aldrich | F3385 | |
| مصل جنين البقر (FBS) | Invitrogen | 10082-139 | |
| أبروتينين (Aprotinin) | Roche Group | 10236624001 | |
| CaCl2 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | 039-00475 | 40 mM |
| عامل نمو الخلايا الظهارية (EGF) | Sigma-Aldrich | A412 | |
| الهرمون المنشط للحويصلة المعاد تركيبياً (rFSH) | المعهد الوطني لأمراض السكري والجهاز الهضمي والكلى | ||
| موصل الغدد التناسلية البشرية (hCG) | Sigma-Aldrich | CG-5 | |
| هيالورونيداز (Hyaluronidase) | Sigma-Aldrich | A1603 | |
| مكملات (ITS) | Sigma-Aldrich | I1884-1VL | |
| وسط L-15 | GIBCO, by Life Technologies | 11415 | |
| αMEM+Gluta MAX | GIBCO, by Life Technologies | 32561 | |
| البنسلين-ستربتوميسين (Pen-Strep) | Cellgro | 30-002-CI | |
| محلول TBS | Pierce, Thermo Scientific | 28379 | |
| طقم فيبرين Tisseel | Baxter Internationl Inc. | 921030 | |
| ألجينات الصوديوم (Sodium Alginate) | FMC BioPolymers | LF200DL | Mw 418kDa |
المراجع
- Cortvrindt, R., Smitz, J., VanSteirteghem, A. C. In-vitro maturation, fertilization and embryo development of immature oocytes from early preantral follicles from prepuberal mice in a simplified culture system. Human Reproduction. 11, 2656-2666 (1996).
- Smitz, J., Cortvrindt, R., Hu, Y. X.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
