قياس التماسك الحصى بواسطة Tensiometry الأنسجة السطحية

ملخص

نحن تصف طريقة لقياس الطاقة الملزمة ، كما expressible التوتر السطحي الأنسجة ، وبين خلايا الأنسجة داخل المجاميع مثل 3D. وقد أظهرت الاختلافات في التوتر السطحي للربط مع أنسجة الرئة الغازية ، العضلات ، وأورام الدماغ ، والمحددات الأساسية لإقامة العلاقات المكانية بين أنواع مختلفة من الخلايا.

الملخص

لا يمكن القياس الدقيق لطاقة الربط بين الخلايا يتم باستخدام أساليب ترتكز على مبادئ الديناميكا الحرارية في النظم في التوازن. وقد طورنا tensiometry الأنسجة السطحية (TST) خصيصا لقياس الطاقة السطح خالية من التفاعل بين الخلايا. لقد كانت المفاهيم الكامنة وراء تجارة الرقيق عبر الأطلسي البيوفيزيائية الموصوفة سابقا في ^1،2 التفصيل. وتستند هذه الطريقة على ملاحظة أن الخلايا متماسكة بعضها بعضا ، إذا حافظت في الهز والثقافة ، وسيكون التجمع في مجموعات تلقائيا. بمرور الوقت ، فإن هذه المجموعات الجولة تصل إلى شكل المجالات. هذا السلوك التقريب متابعة يحاكي خصائص سلوك النظم السائلة. وتقاس طاقة الربط بين الخلايا عن طريق ضغط الركام كروية بين لوحات موازية في مقياس التوتر السطحي الأنسجة السطحية مصمم خصيصا. يتم استخدام نفس المعادلة الرياضية المستخدمة لقياس التوتر السطحي لقطرة السائل لقياس التوتر السطحي للمجاميع الأنسجة مثل 3D كروية. أي ما يعادل الخلوية من التوتر السطحي السائل طاقة الربط بين الخلايا ، أو أكثر عموما cohesivity الأنسجة. وقد أظهرت دراسات سابقة من أن الأنسجة مختبرنا التوتر السطحي (1) كيف تتوقع مجموعتين من الخلايا الجنينية سوف تتفاعل مع بعضها البعض ^1-5 ، (2) يمكن أن تؤثر بشدة على قدرة للتفاعل مع الأنسجة الحيوية ⁶ ، (3) يمكن لا يمكن تغييرها إلا من خلال التلاعب المباشر للكادهيرين المستندة إلى التماسك بين الخلايا ⁷ ، ولكن أيضا عن طريق التلاعب من الجزيئات ECM رئيسية مثل FN ^11/08 و 4) يرتبط الغازية المحتملة لسرطان الرئة ¹² ، ¹³ ليفية ، ورم في الدماغ وورم البروستاتا ¹⁴ خطوط الخلية ^15. في هذه المقالة سوف نقوم وصف الجهاز ، بالتفصيل الخطوات المطلوبة لتوليد الأجسام الشبه الكروية ، لتحميل الأجسام الشبه الكروية في غرفة مقياس التوتر السطحي ، للشروع في الضغط الكلي ، وتحليلها والتحقق من صحة القياسات التوتر الأنسجة السطحية ولدت.

البروتوكول

1. تجميع استعدادا لقياس التوتر السطحي الأنسجة.

لخلايا ملتصقة ، يمكن تشكيل الأجسام الشبه الكروية باستخدام الأسلوب قطرة شنقا أو عن طريق توليد ورقة متماسكة من الخلايا التي يمكن بعد ذلك يقتطع أجزاء 1 مم.

الكلي من خلال طريقة تشكيل قطرة معلقة :

1. يجب أن تنمو قرب متموجة الثقافات الخلية تمسكا التقاء 90 ٪ ، يجب شطف monolayers عندها مرتين مع برنامج تلفزيوني. بعد افراغ جيدا ، إضافة 2 ملل (لوحات 100 ملم) من 0.05 ٪ الترب....

المناقشة

قياس التماسك مجموع مباراتي الذهاب وتجارة الرقيق عبر الأطلسي واضحة نسبيا. هناك ، ومع ذلك ، والخطوات الأساسية التي يجب أن يلم من أجل توليد البيانات TST صالحة للاستعمال ؛ 1) المجاميع يجب أن تكون "سليمة". يمكن التحكم بذلك عن طريق ضمان أن يبدأ تكوين خلايا الكلية التي هي في نقطة التقاء مثالية قبل مفرزة. ويجب أيضا حجم الركام والوقت في الثقافة يمكن السيطرة عليها للحد من تطوير نواة نخرية ضمن المجموعة ؛ 2) آخر المعلمة التي يمكن أن تؤثر على تجارة الرقيق عبر الأطلسي وقياسات لدرجة ال.......

المواد

• ماء الحمام / شاكر (نيو برونزويك العلمية وأديسون ، ونيو جيرسي)
• 10 مل جولة القاع قوارير (وكالة بلكو ، Vineland ، NJ)