و في المختبر النظام الدراسي لاستئصال ورم من الخمول وتبديل للنمو النقيلي

ملخص

ويرد تعديل 3 - D في النظام المختبر الذي خصائص النمو للعديد من خطوط الخلايا السرطانية في الغشاء القاعدي إعادة ربط مع السلوك التكاثري نائمة أو خلايا الورم في موقع ثانوي النقيلي في الجسم الحي.

الملخص

تكرار الاصابة بسرطان الثدي غالبا ما يلي فترة طويلة الكامنة التي لا توجد مؤشرات على السرطان ، والانبثاث قد لا تصبح واضحة سريريا حتى سنوات عديدة بعد إزالة الورم الأولي والعلاج المساعد. والتفسير المحتمل لهذه الظاهرة هو أن الخلايا السرطانية والمواقع المصنفة المتنقل ، ومقاومة للعلاجات التقليدية ، وتظل ساكنة لفترات طويلة من الزمن ^1-4.

وقد وصفت وجود خلايا سرطانية نائمة في مواقع الثانوية سابقا زنازين انفرادية هادئة التي تتكاثر ولا تخضع لموت الخلايا المبرمج ^5-7. علاوة على ذلك ، وقد تبين هذه الخلايا لنشر الانفرادي من الورم الأساسي في مرحلة مبكرة من تطور المرض ^و80-10 يقيمون نمو اعتقل في نخاع العظم للمرضى ، والدم والغدد الليمفاوية ^1،4،11. لذا ، فهم الآليات التي تنظم السكون أو التبديل إلى حالة التكاثري هو أمر حاسم لاكتشاف أهداف الرواية والتدخلات اللازمة لمنع تكرار المرض. ومع ذلك ، كشف آليات تنظيم التحول من السكون إلى نمو الورم النقيلي قد تعرقلت بسبب عدم وجود نظم نموذج المتاحة.

في الجسم الحي ، ونظم السابقين نموذج الجسم الحي لدراسة تطور الخلايا السرطانية المنتشر وقد وصفت سابقا ^1،12-14. لكن هذه الأنظمة لم تقدم النموذج في الوقت الحقيقي ، وارتفاع في رؤى الإنتاجية بطريقة ميكانيكية الى ما يتسبب في ظهور الخلايا السرطانية النائمة الانفرادي لتتكاثر والمرض المنتشر. وقد وضعنا مؤخرا 3D في نظام المختبر إلى النموذج في خصائص نمو خلايا الجسم الحي الذي يحمل السلوك المنتشر نائمة إما (D2.OR ، MCF7 ، K7M2 - AS.46) أو التكاثري (D2A1 ، MDA - MB - 231 ، K7M2) في الجسم الحي. أظهرنا ان الخلايا السرطانية التي تظهر في الجسم الحي السكون في موقع النقيلي تبقى هادئة عند المثقف في 3 البعد (3D) القبو استخراج غشاء (BME) ، في حين أن خلايا الجسم الحي المنتشر بشكل كبير في تتكاثر بسهولة في الثقافة 3D بعد المتغير ، لكنها قصيرة نسبيا فترات من الهدوء. الأهم من خلال الاستفادة من نموذج 3D في نظام المختبر أثبتنا للمرة الأولى أن تكوين ECM يلعب دورا مهما في تنظيم ما إذا كانت الخلايا السرطانية النائمة ستتحول الى دولة التكاثري وأكدت هذه الدراسات المجراة في عام ^15-17. وبالتالي ، فإن النظام النموذجي المبينة في هذا التقرير يوفر الأسلوب في المختبر لنموذج الورم السكون ودراسة التحول إلى النمو التكاثري يسببها المكروية.

البروتوكول

1. خلية نائمة ثقافة الصيانة وخطوط الخلايا السرطانية النقيلي

1. تنمو الخلايا السرطانية النائمة (D2OR / MCF7/K7M2-AS.46) ، والمتنقل (D2A1 / MDA - MB - 231 / K7M2) في 10 سم تحتوي على لوحات ثقافة متوسطة Dulbecco في التعديل النسر (DMEM) الجلوكوز 10 ٪ وارتفاع مصل بقري جنيني ( FBS) والمضادات الحيوية. بمجرد الوصول إلى نقطة التقاء الخلايا 70-80 ٪ ، والمضي قدما في المقايسات التالية.

2. مقايسة الخلايا انتشار الخلايا السرطانية النائمة (هادئة) ، والمتنقل (تكاثر) تربيتها في نظام 3D -....

المناقشة

الآليات الأساسية التي تحافظ على نشر الخلايا السرطانية في حالة سبات أو التي تمر بمرحلة انتقالية نتيجة لنمو النقيلي لا تزال مجهولة إلى حد كبير. وقد تحققت هذه الظاهرة في غاية الصعوبة للدراسة في المرضى من البشر ^4،12 ونماذج قليلة قبل السريرية وضعت لمعالجة هذه المسألة. ومع ذلك ، فقد اتسم بعضها في الجسم الحي ، ونظم نموذج السابقين فيفو عن السكون ورم ^(1،12 في استعراض). ومع ذلك ، في المقام الأول في النماذج الحية للورم السكون ستستخدم .......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
اسم كاشف	شركة	فهرس العدد	تعليقات
ارتفاع الجلوكوز DMEM	Invitrogen	11965-118
DMEM انخفاض الجلوكوز	Invitrogen	11885-092
الجنين مصل البقر (FBS)	Invitrogen	10091-148
عامل نمو مخفض سرداب Cultrex 3 - D استخراج الغشائية	شركة Trevigen		تركيز البروتين بين 14-15mg/ml
D2.0R وخطوط الخلية D2A1			5،19
والخلايا K7M2 K7M2AS1.46			20
MCF - 7 و MDA - MB - 231 خلايا سرطان الثدي	ATCC
على زجاج الغرفة 8 الشريحة نظام	(لاب تيك ، الحرارية العلمية)	177402
العيار الحجمي 96 خلية خلية مائي حل واحد الانتشار مقايسة طقم	Promega	G3580
VECTASHIELD تصاعد المتوسطة مع دابي	مختبرات شركة ناقلات	H - 1200
الحمار العادي المصل	جاكسون ImmunoResearch	017-000-121
إليسا قارئ اللوحة	الحيوي تك		سجل 490nm
مبائر المجهر	زايس LSM - 510 -		التكبير x63