و في الجسم الحي التصوير بروتوكول لرصد المحاور العصبية الحسية الأولية التالية سحق الجذرية الظهرية. إجراءات استخدام واسع الحقل المجهري مضان وthy1 - YFP الفئران المعدلة وراثيا ، والسماح التصوير المتكرر للتجديد لأكثر من 4 سم محور عصبي في الجهاز العصبي المحيطي والتفاعلات محوار مع واجهة للجهاز العصبي المركزي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
يعيش بين محاور التصوير الجذر الظهرية بعد بضع الجذور
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
والمحاور الرئيسية الحسية أصيب إصابات العمود الفقري تفشل الجذرية على التجدد في النخاع الشوكي ، مما يؤدي إلى الألم المزمن وفقدان الحواس دائم. يتم منع تجديد الظهرية المحاوير (DR) الجذر في النخاع الشوكي في منطقة الجذر دخول الظهرية (DREZ) ، والتفاعل بين الجهاز العصبي المركزي والجهاز العصبي المحيطي. فهمنا من الأحداث الجزيئية والخلوية التي تمنع التجديد في DREZ غير مكتملة ، في جزء منه لأنه قد تم استنتاجها التغيرات المعقدة المرتبطة الاصابة العصبية من يحلل بعد الوفاة. يتم دراسة أفضل العمليات الخلوية الحيوية ، مثل تجديد المحور ، مع التقنيات التي التقاط الأحداث في الوقت الحقيقي مع ملاحظات متعددة من كل حيوان حي. وقد زاد من قدرتنا على رصد الخلايا العصبية في الجسم الحي بسبب متسلسل بشكل كبير على الابتكارات الثورية في علم البصريات والمعدلة وراثيا الماوس. عدة أسطر من الفئران المعدلة وراثيا thy1 - GFP ، الذي وصفت وراثيا مجموعات فرعية من الخلايا العصبية في الألوان الفلورية متميزة ، تسمح تصوير الخلايا العصبية الفردية في الجسم الحي 1. وقد استخدمت هذه الفئران على نطاق واسع في الجسم الحي لتصوير الدماغ والعضلات 2-4 5-7 ، وقدمت أفكارا جديدة في آليات الفسيولوجية التي لا يمكن أن يكون حل تحليلات ثابتة. دراسات التصوير من الخلايا العصبية في النخاع الشوكي الذين يعيشون في الآونة الأخيرة فقط بدأ. يختمن وزملاؤه أثبتت جدواها first عن طريق تتبع المصابين عمود الظهري (DC) مع المحاور واسعة المجال المجهري 8،9. الفوتون متعددة في مجال التصوير المجراة من محاور العاصمة وضعه بعمق ، الدبقية الصغيرة والأوعية الدموية كما تم إنجاز 10. على مدى السنوات القليلة الماضية ، ونحن كان لها السبق في تطبيق المجراة في مجال التصوير لرصد تجديد المحاوير DR باستخدام واسع المجال المجهري وH - خط thy1 YFP الفئران. وقد أدت هذه الدراسات لنا فرضية جديدة حول لماذا يمنعون من المحاور DR تجديد داخل الحبل الشوكي 11.
في خط H - YFP من thy1 الفئران ، متوضعة بشكل سطحي متميزة YFP + المحاور ، الذي يسمح برصد محاور عدة في وقت واحد. تعلمنا أن يتم تصوير أفضل محاور DR صوله DREZ في الفقرات القطنية من العمود الفقري في عنق الرحم. في هذا التقرير عدة استراتيجيات وصفنا بأننا وجدنا من المفيد أن أؤكد التصوير ناجحة على المدى الطويل والمتكرر لتجديد المحاوير DR. وتشمل هذه الأساليب التي تقضي على التنبيب المتكررة وانقطاع التنفس ، وتقليل التوتر المصاحب لعملية جراحية وتشكيل ندبة ، والحصول على صور ثابتة بدرجة وضوح عالية دون الضيائية.
البروتوكول
1. مجهر إعداد والتحضير والتصوير
- لدينا مجموعة التصوير وتتألف المجموعة من stereomicroscope MZ16 ايكا الفلورسنت مع مصراع الكاميرا بسرعة ويبرد CCD التي تسيطر عليها البرمجيات Metamorph.
- إعداد لوحة التحكم التدفئة حراريا وضبط الانتاج الى 32.5 درجة مئوية للحفاظ على درجة حرارة جسم الحيوان أثناء وبعد الجراحة.
- رينغر الدافئة محلول معقم أو اصطناعية السائل النخاعي (ACSF) إلى 32.5 درجة مئوية في وقت مبكر للري من الحبل الشوكي أثناء الجراحة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
التصوير DR التجدد مباشرة في الفئران الحية تحديا من نوع خاص لأنه يتطلب استئصال الصفيحه كبيرة الظهرية لرصد النمو محوار على مساحة واسعة تليها إجراءات متعددة الغازية الجراحية والتخدير في جلسات التصوير لاحقة. وساعدت عدة استراتيجيات للتغلب على هذه التحديات. الأولى ، والتصوير الناجح يتطلب الحد من وفيات الماوس (حوالي 25 ٪) من خلال تقليص مدة التخدير والنزيف ، وعبر الرعاية بعد العملية دقيقة وتم خفض معدل وفيات باستخدام الإعدادات التي تسمح بسرعة لاكتساب السرعة الكاميرا بسرعة صور متعددة دون ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
نشكر الدكتور ألان تسلر للتعليق عليها ومساعدة التحرير. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة NS062320.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم كاشف | شركة | فهرس العدد | تعليقات |
| H - خط thy1 YFP (2-4 أشهر من العمر ، أي من الجنسين) | مختبر جاكسون (بار هاربور ، ME) | 003782 | |
| زيلازين (حقن AnaSed ، محلول معقم) | مختبرات لويد ، (شيناندواه ، LA) | 4811 | 8 ملغ / كغ |
| الكيتامين (حقن هيدروكلوريد الكيتامين ، USP) | هوسبيرا ، وشركة (ليك فورست ، IL) | 2051 | 120 ملغ / كغ |
| البوبرينورفين (Buprenex حقن) (0.05 ملغ / كلغ) | ريكيت بينكيزر الصيدلة (رمزها في ريتشموند ، فيرجينيا) | 7571 | |
| الحيوانات الصغيرة كليبرز الشعر | اوستر الفنية ، (McMinnville ، TN) | 76059-030 | |
| إزالة الشعر محلول | الكنيسة وشركاه دوايت (برينستون ، نيوجيرسي) | ناير النفط مع اطفال | |
| الشاش الإسفنج | فيشر العلمية ، (بيتسبرغ ، السلطة الفلسطينية) | 22-362-173 | |
| مسحات القطن ذات الرؤوس | فيشر العلمية ، (بيتسبرغ ، السلطة الفلسطينية) | 14-960 ، 3Q | |
| 1 مل المحاقن | بيكتون ، ديكسون وشركة فرانكلين البحيرات ، ونيو جيرسي) | 309602 | |
| تحت الجلد (الفرعية س) الإبر ، 26ga. | بيكتون ، وشركة ديكسون (فرانكلين البحيرات ، ونيو جيرسي) | 305115 | |
| مقص وملقط الربيع | أدوات العلوم الدقيقة ، (فوستر سيتي ، كاليفورنيا) | ||
| 2.5 ملم rongeurs المنحني | أدوات العلوم الدقيقة ، (فوستر سيتي ، كاليفورنيا) | 16221-14 | |
| USP حقن Lactated رينغر | باء براون الطبية ، وشركة (ايرفين ، كاليفورنيا) | ببر - L7502 | |
| محلول ملحي معقم | APP الصيدلة ، (شومبرغ ، IL) | 918610 | |
| الغشاء الرقيق مصفوفة الاصطناعية (Biobrane) | Bertek الصيدلة ، (مورغانتاون ، WV) | 62794-096-251 | |
| الاصطناعي الجافية | جور يستبعد دورا MVP البديل ، WL غور وشركاه ، و(فلاغستاف ، من الألف إلى الياء) | 1MVP40 | |
| خيوط الحرير 5-0 | Ethicon ، وشركة (سوميرفيل ، ونيو جيرسي) | K - 580 | |
| مقاطع الجرح | الكمال -- الترجمة Ets Bruneau (Burnea ، فرنسا) | A75 | |
| فلوري stereomicroscope | لايكا مايكروسيستمز ، (يتزلا ، ألمانيا) | MZ16 | |
| كاميرا CCD | هاماماتسو ، (بريدجووتر ، ونيو جيرسي) | ORCA - Rx2 | |
| درجة الحرارة المراقب المالي | العالم الدقة الثمينة (ساراسوتا ، فلوريدا) | 1000 ATC | |
| Metamorph البرمجيات | الأجهزة الجزيئية (سانيفيل كاليفورنيا) | ||
| فوتوشوب | أدوبي سيستمز ، سان خوسيه ، كاليفورنيا |
المراجع
- Feng, G. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28, 41-51 (2000).
- Lichtman, J. W., Sanes, J. R. Watching the neuromuscular junction. J Neurocytol. 32, 767-775 (2003).
- Bishop, D. L., Misgeld, T., Walsh, ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
