توليد نموذج فأر الورم الأرومي الدبقي

الملخص

المصدر: Bolcaen, J., et. al. ، التشعيع الموجه بالتصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني والتصوير بالرنين المغناطيسي لنموذج فأر الورم الأرومي الدبقي باستخدام مشعاع دقيق. J. Vis. Exp. (2017)

يوضح هذا الفيديو إجراء إنشاء نموذج فأر الورم الأرومي الدبقي عن طريق حقن خلايا الورم الأرومي الدبقي المسببة لورم الدماغ في قشرة الفص الجبهي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بالنماذج الحيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية في JoVE.

1. نموذج خلية الفئران F98 جيجابايت

1. زراعة خلايا F98 GB ، التي تم الحصول عليها من ATCC ، في طبقات أحادية باستخدام Eagle Medium المعدل من Dulbecco ، ومصل العجل 10٪ ، و 1٪ بنسلين ، و 1٪ ستربتومايسين ، و 1٪ L-glutamine ، و 0.1٪ أمفوتريسين ب ، وضعها في حاضنة CO₂ (5٪ CO₂ و 37 درجة مئوية).
2. تلقيح خلايا الورم الدبقي في دماغ إناث فئران فيشر F344 (وزن الجسم 170 جم).
   1. استخدم أدوات معقمة وارتد قفازات معقمة في جميع الأوقات.
   2. تخدير الفئران عن طريق حقن خليط من 74 ملغم/كغ من الكيتامين و11 ملغم/كغ زيلازين داخل الصفاق (IP) مع حقنة الأنسولين (1 مل، 29 جم). تأكيد التخدير من خلال عدم الاستجابة لمنعكس الانسحاب للطرف. شل حركة الفئران في جهاز تجسيمي باستخدام نقاط تثبيت للأنف والأذنين. ضع جل العين كاربومر لمنع جفاف العينين أثناء التخدير.
   3. احلق الجرذ من مستوى العين إلى الجزء الخلفي من الجمجمة وقم بتطهير الجلد باستخدام بوفيدون اليود.
   4. كشف الجمجمة من خلال شق فروة الرأس في خط الوسط بطول 2 سم ، وقم بعمل ثقب 1 مم (مثقاب ماسي) 2 مم خلفي و 2.5 مم جانبيا للبريجما في نصف الكرة الأمامي الأيمن.
   5. أدخل إبرة أنسولين موجهة تجسيميا (29 جم) وحقن معلق خلية 5 ميكرولتر (20,000 خلية F98 جيجابايت) بعمق 3 مم باستخدام وحدة تحكم في مضخة الحقنة الدقيقة (الإعدادات: الحقن (I50) ، معدل 1 نانولتر / ثانية (001 SDN)).
   6. اسحب المحقنة ببطء وأغلق الشق بشمع العظام. خياطة الجلد وتطهيره ببوفيدون اليود.
   7. استقرار درجة حرارة جسم بعد الجراحة باستخدام مصباح أحمر. راقب استيقاظ الجرذ حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الاستلقاء القصي. لا تعيد إلى صحبة الأخرى حتى يتعافى تماما. احتفظ بجميع في ظروف خاضعة للرقابة البيئية (12 ساعة من دورات الضوء / الظلام العادية ، 20-24 درجة مئوية ، و 40-70٪ رطوبة نسبية) مع الطعام والماء ad libitum . تأكد من متابعة عن كثب من خلال مراقبة وزن الجسم وطعامها وتناولها للماء ونشاطها وسلوكها الطبيعي. استخدم جرعة قاتلة من البنتوباربيتال الصوديوم للقتل الرحيم للحيوانات (160 مجم / كجم) إذا لوحظ انخفاض بنسبة 20٪ في وزن الجسم أو عندما يتدهور السلوك الطبيعي بشدة ( على سبيل المثال ، قلة الاستمالة).

المواد

< فئة الشكل = نمط "الجدول" = "العرض: 486pt;'> frame frame< td style='العرض:127pt;'>FS-2, 4-0, 3/8, 19 ملم

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
GB RAT model
F98 خط خلية الورم الأرومي الدبقي	ATCC	CRL-2397
Fischer F344/Ico crl Rats	Charles River	N/A	http://www.criver.com/products-services/basic-research/find-a-model/fischer-344-rat
Micropump system	World Precision Instruments	UMP3	Micro 4: https://www.wpiinc.com/products/top-products/make-selection-ump3-ultramicropump/#tabs-1
Stereotactic	Kopf	902	Model 902 Dual Small Animal Stereotaxic
Diamond drill	Velleman	VTHD02	https://www.velleman.eu/products/view/?id=370450
Bone wax	Aesculap	1029754	https://www.aesculapusa.com/products/wound-closure/hemostatic-bone-wax
insulin حقنة ميكروفين	Beckton-Dickinson	320924	1 mL, 29G
InfraPhil IR lamp	Philips	HP3616/01
Ethilon	Ethicon	662G/662H