توليد انسداد الشريان الدماغي الأوسط في جرو الفئران للحث على نقص تروية الدماغ الموضعي

الملخص

المصدر: Larpthaveesarp, A., et. al. نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط العابر لسكتة دماغية حديثي الولادة في الفئران P10. J. Vis. Exp. (2017)

يوضح هذا الفيديو إنشاء نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط في جرو الفئران. يتعرض الشريان السباتي الداخلي (ICA) ، ويتم تأمين الرباط للحد من فيضان الدم. يتم إدخال انسداد من خلال ICA للوصول إلى الشريان الدماغي الأوسط. ثم يسمح للجرو بالتعافي قبل إجراء مزيد من التحليل.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بالنماذج الحيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية في JoVE.

1. انسداد الشريان الدماغي الأوسط

1. وزن الجرو وتأكد من أنه الوزن المناسب (19-21 جم). قم بتخدير الجرو بنسبة 3٪ من الأيزوفلوران في أكسجين بنسبة 100٪ (O ₂ ) وتأكد من عدم وجود استجابة لقرصة القدم. الحفاظ على درجة حرارة سطح الجسم بين 35.5 درجة مئوية و 37 درجة مئوية باستخدام وسادة تسخين تحت المرحلة الجراحية.
2. قم بتأمين في وضع ضعيف بشريط لاصق عبر مناطق الكتف. باستخدام مسحات قطنية معقمة ، امسح منطقة عنق الرحم الأمامية بمحلول بوفيدون - يود متبوعا بمسحة من 70٪ من الإيثانول في ماء مقطر مزدوج ، بالتناوب بين كل محلول لأربع مسحات إجمالا.
3. تسلل محليا 0.25٪ بوبيفاكائين إلى موقع الشق المخطط له. باستخدام منظار مجسم، قم بعمل شق عنق الرحم الأمامي من 5 إلى 7 مم لكشف الشريان السباتي المشترك (CCA). ضع 2-4 ضاغطات لإبقاء التجويف مفتوحا والشريان مكشوفا.
4. حدد موقع الشريان السباتي الداخلي (ICA) والشريان القذالي (OA) والشريان السباتي الخارجي (ECA). العناية بالشرايين للحصول على رؤية واضحة. احرص على عدم إزعاج العصب المبهم.
   ملاحظة: بالنسبة للجراء التي يتم تشغيلها بشكل وهمي ، يترك الشق مفتوحا ، ويتم الكشف عن الشرايين ، وبعد ذلك يتم خياطة الشق بإغلاق الشق. إجمالي وقت التخدير يعادل وقت جراحة الانسداد.
5. قطع 1.5 سم من خيط خياطة مضفر من الحرير 6-0. قم بفك الخيط ، واسحب خيوط مفردة. تأكد من أن الخيوط المفردة نظيفة وليست مهترئة.
   ملاحظة: إذا لزم الأمر ، قم بتنعيم الأطراف البالية عن طريق غمس الخصلة المفردة في ماء معقم والعناية بالخيط بأطراف الملقط.
6. أثناء الإمساك بخيط الخيط بملقط 45 درجة ، حرك الملقط بحركة قوس كاسحة للذهاب تحت ICA بحيث تظهر أطراف الملقط بين ICA و OA.
   ملاحظة: إذا تم التشريح بشكل جيد ، فستكون هذه الخطوة سهلة نسبيا. إذا كان ICA و OA يتلامسان ، فاحرص على عدم تمزق الشرايين عند استخدام الملقط لعزل ICA. في حالة حدوث نزيف ، اضغط على الشريان بالملقط حتى يتوقف النزيف. امتصاص الدم بمسحة معقمة.
7. أمسك بنهاية خيط الخياطة التي تمسك بها الملقط واسحبها بحيث يسهل الوصول إلى النهاية. حرر الخصلة من الملقط وأعد الملقط من تحت ICA ، مع عكس الحركة في الخطوة 1.5 ( الشكل 1 أ ).
8. اربط رباط مؤقت حول ICA في القاعدة ، الأقرب إلى المكان الذي ينفصل فيه عن CCA.
   ملاحظة: من المهم ربط العقدة بحيث تكون نهاية الخصلة التي سيتم سحبها لإزالة العقدة طويلة بما يكفي (أكبر من 1 مم ، أقل من 3 مم) للإمساك بها بسهولة باستخدام الملقط مع التأكد من وجود كمية مناسبة من خيط الخياطة على الجانب الآخر من العقدة للتراجع.
9. اسحب الهيكل الشعاعي الجسمي الجسمي للجسم بشكل جانبي بعناية واستخدم مشبك لتثبيت الخصلة على الجلد الزائد بالقرب من منطقة الإبط على الجانب المقابل للشق. تأكد من أن هذا الخيط المتراجع مشدود بما يكفي لوقف تدفق الدم قبل الانتقال إلى الخطوة التالية لتقليل مخاطر النزيف غير المنضبط. لاحظ أن الشريان مسطح وشاحب.
   ملاحظة: لا تبالغ في التراجع, لأنه يمكن أن يسبب تمزقا جزئيا أو كليا ل ICA. يمكن ضبط التراجع قبل إجراء بضع الشرايين مباشرة عن طريق سحب الخصلة الموجودة على الجانب المقابل للمشبك.
10. استخدم ملقطا بزاوية 45 درجة للإمساك بخيطة خياطة أخرى غير مضفرة ولفها أسفل وحول ICA ، كما في الخطوة 1.5. ضع هذا الخيط الجانبي على خيط التراجع ( الشكل 1 ب ).
    ملاحظة: يمكن أيضا تنفيذ هذه الخطوة قبل السحب. إذا لم تكن متأكدا من جودة التراجع ، فيمكن ربط هذه العقدة بشكل فضفاض قبل الخطوة التالية.
11. قم بقص بضع الشرايين 0.2 مم في منتصف الطريق بين الأربطة المربوطة وغير المربوطة ، مع الاقتراب من الرباط المربوط.
    ملاحظة: قد يفرغ الدم المتبقي في الشريان المربوط من خلال بضع الشرايين ولكن يجب ألا يتجاوز 5 ميكرولتر. إذا استمر النزيف ، اسحب خيط التراجع بعناية لزيادة التراجع ، مع الحرص على تجنب إتلاف الشريان من التوتر المفرط.
12. باستخدام مسطرة مترية ، قم بقياس خياطة الانسداد وقطع الخيط ببدل إضافي يبلغ 2-3 مم لإزالة الانسداد أثناء إعادة التروية. أمسك المغلق بملقط 45 درجة واستخدم ملقطا مستقيما لإنشاء انحناء بالطول المناسب للوصول إلى MCA ، مما يمثل نقطة توقف للتقدم.
    ملاحظة: يتم استخدام طول انسداد 10 مم من نهاية طرف السيليكون إلى الانحناء لصغار الفئران بعد الولادة أو P-10 Sprague Dawley أو Long Evans في نطاق الوزن هذا.
13. باستخدام ملقط 45 درجة ، قم بتغذية خياطة انسداد النايلون المطلية بالسيليكون في بضع الشرايين ودفع الخيط إلى الانحناء الذي يشير إلى المسافة المحددة مسبقا إلى MCA ( الشكل 1C ). تأكد من أن التقدم يشعر بسلاسة. توقف على الفور عن التقدم إذا شعرت بالمقاومة. أثناء التقدم ، صوب الخيط في اتجاه مواز ل CC / ECA ، باتجاه الرأس.
    ملاحظة: إذا كانت الخيط متقدمة ظهريا باتجاه العمود الفقري للحيوان ، فقد تصطدم بالشريان الجفري (PTA). إذا شعرت بالمقاومة بعد 3-5 مم من التقدم ، فإن الخيط قد اصطدمت بتقاطع PTA. أعد الانسداد خارج الشريان حتى يكون رأس السيليكون بالقرب من بضع الشرايين قبل ضبط اتجاه التقدم. ليس من الضروري إزالة الانسداد تماما من بضع الشرايين.
14. قم بتأمين مانع الانسداد عن طريق ربط رباط مؤقت باستخدام الخصلة من الخطوة 1.10 ( الشكل 1D ).
15. قم بإزالة مشبك الضام. قم بقص خيوط كلا الأربطة المؤقتة بحيث يسهل الإمساك بخيط العقدة الذي يتم سحبه لإزالة العقدة بالملقط المستقيم ويكون أطول من الخصلة التي يتم سحبها لتشديد العقدة.
    ملاحظة: يجب أن تكون الخيوط قصيرة بما يكفي حتى لا تتشابك في التجويف بعد الإغلاق.
16. قم بإزالة الضواعق وأغلق التجويف باستخدام 6-0 من الحرير المضفر لإنشاء ثلاث إلى أربع خيوط متقطعة.
17. أخرج الجرو من التخدير وضعه على وسادة تدفئة في هواء الغرفة. راقب الجرو حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الاستلقاء القصي وتأكد من تعافيه تماما قبل إعادته إلى السد. تأكد من أن الجرو يحافظ على درجة حرارة سطح الجسم بين 35.5 درجة مئوية و 37 درجة مئوية.

النتائج

الشكل 1: صور جراحية حية لإجراء tMCAO. ( أ) يتم لف خيط الخيط الأول حول ICA ، كما هو مفصل في الخطوة 1.6. (B) يتم ربط الرباط المؤقت الأول ، ويتم سحب ICA. يتم لف خيط الخياطة الثاني حول ICA ، بشكل جانبي إلى خيط الخياطة الأول ، كما هو مفصل في الخطوة 1.9. (C) يتم تغذية خياطة الانسداد المطلية بالسيليكون في موقع بضع الشرايين ، كما هو مفصل في الخطوة 1.12. (

المواد

<فئة الشكل = نمط "الجدول" = 'العرض: 639pt;'>< نمط td = 'العرض: 148pt ؛ '> World Precision Instruments < td style = 'width: 152pt ؛ '>PSMT5N < td style = 'width: 190pt ؛ '> < td style = 'height: 14.5pt ؛ width: 149pt ؛ '> Heating pad < td style = 'width: 148pt ؛ '> Sunbeam < td style = 'width: 152pt ؛ '> 000731-500-000 < td style = 'width: 190pt ؛ '> الإعداد المنخفض إلى المتوسط < td style = 'الارتفاع: 14.5 نقطة ؛ العرض: 149pt ؛ '> مقياس حرارة الأشعة تحت الحمراء < td style = 'العرض: 148pt ؛ '> أدوات الاقتباس< td style='width:152pt;'>72-5270td style='height:14.5pt;width:149pt;'>Retraction kit for small animals< td style='الارتفاع:14.5pt;width:149pt;'>Dumont #5SF Fallps Tools< td style='الارتفاع:14.5pt ؛ العرض: 149pt ؛ '>6-0 Perma-Hand Silk Reverse Cutting Suture< td style = 'width: 148pt ؛ '>Ethicon < td style = 'width: 152pt ؛ '> 769G < td style = 'width: 190pt ؛ '> < td style = 'height: 14.5pt ؛ width: 149pt ؛ '>Euthasol < td style = 'width: 148pt ؛ '>Virbac 0.22 ml / kg < td style = 'height: 14.5pt ؛ width: 149pt ؛ '> Cotton Pint Applicators

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
Isoflourane	Henry Schein	50033	Anesthetic, at 3٪
Trinocular منظار الجراحية
<
Fine Science Tools	18200-20
CermaCut Scissors	Fine Science Tools	14958-09
Fine Science Tools	112522-00	2x
Dumont # 5/45 Fallps	Fine Science Tools	11251-35	2x
B-2 Micro Clamp	Fine Science Tools	00398-02
Forcepts for Clamp Application	Fine Science Tools	00072-14
Micro Vannas Scissors	Fine Science	15000-03	2mm cutting edge
Occlusion Sutures	Doccol	602123PK10	701712PK5Re
Ruler	Fine Science Tools
710101>
Henry Schein	100-9249
Laboratory Tape	VWR	89097-990